Unidad II - Protenas

Prof. Zulay Castillo

PROTENAS:
Son polmeros lineales de aminocidos que forman la masa principal de la clula y de los tejidos y tienen funciones diversas entre las que destacan transportadoras de compuestos hidrfobos en la sangre, catalizadores, canales inicos en las membranas entre otros.
Sus caractersticas estan dictadas por su secuencia lineal de aminocidos o estructura primaria y esta determina su plegado e interacciones en la clula para realizar sus funciones. Las estructuras primarias de las protenas se sintetizan a partir de 20 aminocidos dispuestos en una secuencia lineal determinada por el cdigo gentico.

AMINOCIDOS
Son molculas orgnicas que contienen al menos un grupo amino (-NH2) a excepcion de prolina que contiene un grupo imino (-NH-) y el otro cido (-COOH) tienen por estructura general: COOH
H2N

C
R

La presencia de estos dos grupos le confiere la propiedad de ser anfteros y siendo bifuncionales pueden formar polmeros de longitud variable.

Los aminocidos son anfteros, es decir, comportan a la vez como cidos y como bases

se

A pH 7 Los aminocidos sin cadena lateral cargada son zwitteriones; presentan simultneamente una carga positiva y una negativa.

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos
Tienen cadenas laterales alifticas, apolares y voluminosas en las protenas estas cadenas laterales se unen para formar centros hidrfobos

alifticos

apolares:

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos aromticos: se agrupan aqu los que
tienen estructuras cclicas y propiedades semejantes pero de polaridades diferentes. El anillo aromtico es un anillo C-H con 6 miembros y 3 dobles enlaces (Anillo bencnico). Los sustituyentes del anillo determinan si participan en interacciones polares o hidrfobas.

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos alifticos polares y sin carga: en
este grupo se ubican los aa que tienen un grupo amida o un grupo OH. La asparagina y la glutamina son amidas de los aa aspartato y glutamato. Los grupos forman puentes de H entre ellos, con el agua y con el esqueleto peptdico de otros compuestos polares. Se encuentran gralmente en la superficie de protenas globulares hidrosolubles.

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos azufrados: En este grupo se incluyen los aminocidos que contienen azufre (la cistena y la metionina).

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos cidos: tienen grupos cido carboxlicos que llevan una carga negativa a pH fisiolgico

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS

Aminocidos bsicos: tienen cadenas laterales que contienen nitrgeno que puede protonarse y cargarse positivamente a pH fisiolgico o menos. Forman enlaces electrostticos con grupos con carga negativa como grupos R de aa cidos o grupo fosfato de las coenzimas.

ENLACE PEPTDICO
Enlace amida entre el grupo -carboxilo de un aminocido y el grupo -amino de otro con liberacin de una molcula de agua formando en esta condensacin un pptido.

CLASIFICACIN DE LOS ENLACES PEPTDICO SEGN EL NUMERO DE AMINOCIDOS

Dipptidos: si el n de aminocidos es 2. Tripptidos: si el n de aminocidos es 3. Tetrapptidos: si el n de aminocidos es 4. Oligopptidos: si el n de aminocidos es menor de 10. Polipptidos o cadenas polipeptdicas: aminocidos es mayor de 10. si el n de

CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS

CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS

Albuminas: de origen animal solubles en agua fra. Globulinas: de origen animal poco solubles en agua fria pero solubles en disoluciones salinas dluidas. Glutelinas: origen vegetal, insoluble en agua y soluciones salinas pero solubles en cidos y bases diluidas.

Segn su solubilidad:

Prolaminas: Origen vegetal soluble en alcoholes de escaso tamao molecular. Histonas: protenas pequeas y bsicas solubles en agua y cidos diluidos presentes en el ncleo de clulas eucariotas asociadas al ADN.

Escleroprotenas: Insolubles en todos los mencionados, se solubilizan solo por degradacin.

medos

CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS

ESTRUCTURA DE LAS PROTENAS

Las protenas son macromolculas de estructura tridimensional muy compleja, cada protena tiene una estructura nativa que es necesaria para que la protena realice su funcin. Se han planteado 4 niveles estructural para las protenas: Estructura primaria Estructura secundaria: -hlice y lmina Estructura terciaria Estructura cuaternaria de organizacin

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Primaria: secuencia de AA. La sustitucin de un solo AA altera su funcin.
Cambios en esta estructura origina una protena diferente que puede ocasionar enfermedades. P.e. (Anemia falciforme).

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Las protenas homlogas tienen secuencias y funciones semejantes La comparacin de permite establecer evolutivas Mutaciones secuencia --> secuencias relaciones en la

variaciones

Los aminocidos invariables son importantes para la funcin Las mutaciones conservadoras son cambios entre aminocidos qumicamente semejantes Algunas mutaciones se relacionan con enfermedades --> enfermedades moleculares (patologa molecular)

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL Secundaria: Reacciones estricas de los residuos

de aa que estan prximos unos a otros en la secuencia lineal. Describe el primer grado de plegamiento de la cadena polipeptdica no considerando ms que la disposicin en e espacio. Forman estructuras localizadas repetitivas.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

-Hlice: Estructura muy comn en protenas globulares, con dominio transmembrana y que unen ADN. Se encuentra formada por puentes de H entre el tomo carbonilo de O y el amida de un residuo de aminocidos localizado cuatro residuos por detrs de la cadena.

Un puente de H entre el CO de un aminocido y el NH del cuarto aminocido por detrs.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Estabilidad de la Hlice
Contribucin principal: enlaces de hidrgeno entre grupos -CO y NH peptdicos (cada residuo i con i+4) Interacciones entre cadenas laterales Electrostticas. Atractivas (estabilizadoras, entre residuos de distinta carga) Repulsivas --> desestabilizadoras (entre residuos con la misma carga) Hidrofbicas

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

La lmina : Se forma por el posicionamiento paralelo de dos cadenas de aminocidos dentro de la misma protena, en el que los grupos amino de una de las cadenas forman enlaces de hidrgeno con los grupos carboxilo de la opuesta.

Si los segmentos de la cadena estan en el mismo sentido se conocen como paralelas y en sentidos opuestos como antiparalelas.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Estructuras secundarias no repetitivas: vueltas, giros y bucles son estructuras secundarias sin elementos repetitivos representan un cambio abrupto de la direccin de la protena y posibilitan que la protena tenga una estructura compacta, suelen estar en la superficie protica. Muchas veces conectan segmentos de las hojas plegadas antiparalela.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Terciaria: Define el plegamiento espacial de la cadena completa e incluye el conjunto de interacciones covalentes o de otro tipo que gobiernan estos plegamientos. En algunas protenas globulares representa zonas de plegamiento compacto llamados dominios.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Fuerzas que estabilizan la estructura terciaria

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

Cuaternaria o agregados de protena globular: Asociacin no covalente de varias cadenas polipeptdicas
Ventajas de la asociacin Mayor estabilidad Regulacin alostrica Estabilidad Mismo tipo de enlaces que estructura terciaria.

NIVELES DE ORGANIZACIN ESTRUCTURAL

DESNATURALIZACIN DE LAS PROTENAS

La desnaturalizacin de las protenas implica modificaciones en modo variable de su estructura con la consiguiente alteracin o modificacin de sus funciones. Puede ocurrir por efectos fsicos: calor, radiaciones UV, altas presiones. O por efectos qumicos: cidos, alclis, urea y sustancias con actividad detergente.

Caractersticas de las protenas desnaturalizadas:

-Solubilidad disminuida
-Disminucin de la simetra molecular -disminucin cristalidad de su

PROTENAS PLASMTICAS

El plasma consiste en agua, electroltos, metabolitos, nutrientes, proteinas y hormonas, exento de clulas y el suero exento de clulas y protenas implicadas en coagulacin de la sangre. Las protenas plasmticas son en realidad una mezcla muy compleja que incluye no slo proteinas simples, sino tambin protenas conjugadas como glucoprotenas y varios tipos de lipoproteinas

Las protenas del plasma en 3 grupos principales: albmina, fibringeno y globulinas.

FUNCIONES DE LAS PROTENAS PLASMTICAS

Transporte y Almacenamiento

Balance de Fludos (Agua y electrolitos)

Regulacin del equilibrio cido/base Respuesta de fase inmune/complemento aguda/Anticuerpos/Sistema

Construccin y reparacin de tejidos Enzimas Hormonas Coagulacin

PROTENAS PLASMTICAS
Albmina: protena plasmtica de gran importancia fisiolgica y clinica. Compuesta por 610 aminocidos en una sola cadena peptdica y posee una estructura terciaria definida. Es sintetizada en exclusivamente por el hgado y tiene vida media de 10 das. Representa el 55% del total de protenas del plasma.

PROTENAS PLASMTICAS Funciones de la albmina

Reserva de nutricional protenas en la deprivacin

Transporte de cidos grasos de cadena larga y esteroles Transporte de Bilirubina Unin y solubilizacin de drogas Regulador de la presin coloidal

PROTENAS PLASMTICAS

Causas de la disminucin de albmina en plasma

Disminucin de la sntesis A. Malnutricin, Ayuno B. Malabsorcin alimentaria C. Enfermedad heptica crnica avanzada Distribucin anormal o dilucin A. Sobrehidratacin B. Aumento de permeabilidad capilar como en septicemia, quemados Excrecin anormal o degradacin A. Sndrome nefrtico B. Quemados C. Hemorragias D. Enteropatias con prdidas protecas

PROTENAS PLASMTICAS
Fibringeno: se forma en el hgado y juega un papel importante en la coagulacin de la sangre. Debido a su peso molecular elevado, es uno de los factores que condiciona la viscosidad sangunea. Involucrado directamente en el proceso de coagulacin sangunea es el responsable de transformarse en fibrina insoluble que constituye la armazn fundamental del cogulo.

Tromboplastina + Ca2+ +protrombina

trombina + fibringeno

fibrina

PROTENAS PLASMTICAS
Globulinas: son producidas principalmente en el hgado (80%) y en los linfocitos (20%). Se conocen tres tipos de globulina: alfa, beta y gamma. -globulinas (gluco y lipoprotenas) son las transportadoras del angiotensingeno, de las vitaminas liposolubles y del cobre (ceruloplasmina). -globulinas (lipoprotenas), incluyen, entre otras, la transferrina y las transportadoras de vitaminas y hormonas. -globulinas (producidas por las plasmazellen, plasmocitos y linfocitos) son, en su mayor parte, anticuerpos.

MTODOS DE SEPARACIN, IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE PROTENAS

Para estudiar detalladamente las protenas se necesita extraer las protenas de la clulas y orgnulos subcelulares. Homogeneizacin: Ruptura de la clula. Moler el tejido en una licuadora Homogeneizador Uso de centrifugacin diferencial para separar los componentes de las clulas. Partiendo de un homogeneizador de clulas, una fuerza gravitacional (g) creciente har que se sedimenten diferentes componentes de las clulas

MTODOS DE SEPARACIN, IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE PROTENAS

La fraccin proteica obtenida se puede purificar por medio de los siguientes mtodos:

Cromatografa: mtodo fsico de separacin en el que los compuestos a separar se distribuyen entre dos fases: la estacionaria, de gran rea superficial, que puede ser slida o lquida, estando en este caso dispuesta sobre un slido que le sirve de soporte y la mvil, que son fluidos que pasa a travs de la fase estacionaria. Puede ser liquida o gaseosa. Ejemplos: de intercambio inico, de afinidad, de exclusin molecular.
Electroforesis: La electroforesis se basa en el movimiento de partculas cargadas en un campo elctrico, hacia un electrodo con carga opuesta. La movilidad de las macromolculas depende de su carga, forma y tamao. Dilisis: paso de una sustancia a travs de los poros de una membrana semipermeable hacia un medio carente de ella por difusin simple.

MTODOS DE SEPARACIN, IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE PROTENAS

Una vez purificada la protena puede ser cuantificada por los siguientes mtodos:
Mtodo De Biuret El reactivo de Biuret se compone de hidrxido de sodio y sulfato de cobre (solucin alcalina fuerte), el grupo amino de las protenas reacciona con los iones del cobre del reactivo dando el color prpura, la cantidad del color producido es proporcional al nmero de enlaces peptdicos, y por lo tanto a la cantidad de protena. Metodo de Lowry: La muestra se trata con el reactivo de Folin Ciocalteau modificado. Si hay protenas presentes se produce una coloracin azul debido principalmente a la presencia de residuos de tirosina y triptofano en las protenas que reaccionan con cido fosfomolbdico tungstico en un medio cprico alcalino. Mtodo De Bradford el azl brillante g-250 coomassie se adhiere a la protena, el colorante se torna de rojizo a azulado y el mximo de absorcin del colorante cambia de 465 a 595nm. el cambio en la absorbancia a 595nm es proporcional a la concentracin de protena en la muestra.

PROTENAS NO PLASMTICAS
Protenas estructurales: Forman parte de clulas y tejidos a los que confieren apoyo estructural. Dentro de estas podemos citar, el colgeno y la elastina presentes en el tejido conectivo de los vertebrados. La queratinas de la piel, pelo y uas, la actina y la miosina, entre otras. Colgeno Elastina Queratina Sistema actina - miosina

Mucoplisacrdos

PROTENAS NO PLASMTICAS
Colgeno: protena insoluble en agua, rgida y muy resistente a todo tipo de tensiones, es una de las protenas ms abundantes en el cuerpo humano. Predomina en el tejido conjuntivo.
Contenido de colgeno en algunos tejidos humanos (g/100 g de peso seco)

Tejido
Hueso sin minerales

Contenido
88.0

Tendn de Aquiles
Piel Crnea Cartlago Ligamentos Aorta Hgado

86.0
71.9 68.1 ~ 50 17.0 12 24 4.0

PROTENAS NO PLASMTICAS
La unidad esencial del colgeno est constituida por tres cadenas de polipptidos que aparecen entralazadas formando una triple hlice, constituyendo una unidad macromolecular denominada tropocolgeno.

PROTENAS NO PLASMTICAS
Elastina: Protena insoluble de gran elasticidad es la segunda en importancia luego del colgeno en la arquitectura del tejido conjuntivo. Se encuentra en las paredes de vasos sanguneos, en los ligamentos, la piel y los cartlagos. La elastina se forma por la interacciones entre molculas solubles de tropoelastina.

PROTENAS NO PLASMTICAS
Queratina: la queratina, es una protena fibrosa y est unida principalmente por enlaces disulfuro y por puentes de hidrgeno. Tiene alto contenido de Cistena (por eso los enlaces disulfuro) La cadena polipeptdica de esta protena se enrolla en una hlice .

PROTENAS NO PLASMTICAS
Sistema actina miosina

Actina: monmero estructural de los filamentos delgados del sarcmero, es una protena globular de 43000-48000 Da y 375 aminocidos que puede unir un mol de ATP y Ca2+
Miosina: es el componente fundamental de los filamentos gruesos del sarcmero es una protena de 480000 Da, muy asimtrica constituida por dos cadenas polipeptdicas que se conocen como cadenas pesadas y otras 4 mas pequeas no idnticas llamadas cadenas ligeras.

PROTENAS NO PLASMTICAS

Ca2+

Troponina inhibe a tropomiosina

Estmulo despolarizacin de la membrana, hidrlisis de ATP y liberacin de Ca2+ que aumenta [citosol] dispara la contraccin Cesa el estmulo el Ca2+ regresa al retculo sarcoplsmico modifica a la troponina que cambia conformacin y el msculo se relaja.

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

Estructura: Hemoprotena. Constituida por 4 grupos hemo y 4 molculas de globina Cada cadena es muy similar a la mioglobina.
Funcin: Transporte de O2 y CO2 entre los pulmones y los tejidos. Une oxgeno en los pulmones y lo transporta, va sangre arterial, a los tejidos donde lo libera. Une CO2 procedente del metabolismo en los tejidos, y lo transporta, va sangre venosa, a los pulmones para ser eliminado

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

La Hb presenta un comportamiento alostrico, es decir depende de efectores de diversas naturalezas para aumentar o disminuir la afinidad de esta por el O2.
EFECTORES ALOSTRICOS: 1. CO2 2. H+ 3. 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)

La unin del O2 al grupo hemo de las 4 subunidades de la hemoglobina ocurre de forma cooperativa es decir la unin del primer O2 al primer grupo hemo promueve un cambio conformacional de la Hb aumentando su afinidad por el O2.

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

La Hb capta oxgeno cuando es abundante (pulmones PO2 100 mm Hg) y lo cede cuando disminuye (capilares PO2 30 mm Hg)

La curva de unin del oxgeno a la Hb es sigmoidea: Este comportamiento se debe a fenmenos de cooperatividad en la unin de oxgeno. Cada molcula de Hb tiene 4 lugares de unin de O2. La unin del primer O2 produce un cambio conformacional en la molcula, lo que facilita la unin de los siguientes y viceversa

PO2 en los pulmones PO2 en los tejidos

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

Representa el comportamiento de la Hb como esta en la sangre frente a la Hb diluida en agua. Se evidencia la efectividad de Hb en la fijacin de O2 . A elevadas pO2. en el caso de tener la presencia de Hb diluida en sangre a bajas presiones estaria aun tan saturada que impediria el paso de O2 a los tejidos.

Curva de saturacin basada en la pO2

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

Cuando aumenta la pCO2 disminuye la afinidad de la Hb por el oxgeno. Una fraccin del CO2 se transporta a los pulmones en forma de bicarbonato (HCO3) y otra fraccin se transporta unido covalentemente a la hemoglobina. Aumentos en la pCO2 desplazan la curva a la derecha por aumento de la tensin, esto se conoce como efecto Bohr y se debe al aumento de [H+].

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

EFECTO BOHR
El CO2 que se libera de los tejidos ingresa al GR donde forma H2CO3 que libera H+ y los cuales se unen a la Hb induciendo la liberacin de O2 en los tejidos. En los pulmones el O2 se une a la Hb protonada, haciendo que libere H+ que se unen al HCO3- para formar H2CO3 que se disocia en H+ y CO2.

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

7.6

Efecto del pH sobre la curva de saturacin de oxgeno.

UN MODELO PROTICO: HEMOGLOBINA

Regulacin Alostrica por el 2,3-BPG
El 2,3 BPG se une a la Hb en la cavidad central y dificulta los cambios conformacionales que facilitan la unin de O2 por lo que este compuesto facilita el paso de O2 a los tejidos donde hay una baja pO2 (tejidos)

HEMOGLOBINOPATAS

Patologas ocasionadas por la existencia de molculas de Hb anormales por alteraciones en su estructura, derivadas de mutaciones en los genes estructurales que las codifican.

Entre las Hb normales estan A, F. Las anormales S y M entre otros tipos.

Las enfermedades relacionadas con las hemoglobinopatas se dividen en alteraciones estructurales de la Hb (slteracin de secuencias en algunas de las cadenas) y talasemias (ausencia o disminucin de alguna de las globinas)

HEMOGLOBINAS NORMALES
Hb A: es la forma mayoritaria en adultos, es un tetrmero formado por dos tipos de subunidades y . Realiza su funcin transportadora normalmente como se ha descrito anteriormente.

Hb F: forma predominante durante el perodo fetal tiene una menor afinidad por el 2,3 BPG esta constituida por cadenas y . Persistencia de la Hb fetal es posible pero no manifiestan sntomas en pacientes.

HEMOGLOBINOPATAS

Hemoglobinas M Estas hemoglobinas se caracterizan por la presencia del hierro del hemo en estado frrico (Fe+++) en vez de estar en estado ferroso (Fe++). Son mutaciones que se caracterizan casi siempre por una sustitucin del aminocido histidina, situado en la cavidad del hemo, por la tirosina. La tirosina al poseer una carga negativa y al estar unida al hierro estabiliza su forma oxidada e impide la unin reversible al oxgeno.

HEMOGLOBINOPATAS
Hemoglobina S o anemia drepanoctica Se caracteriza por una anemia hemoltica grave, que aparece a los pocos meses de nacer cuando la Hb S reemplaza a la Hb fetal. Los valores de Hb oscilan entre 6 y 8 gr/dl. En el frotis de sangre se observan drepanocitos.
Se produce por la sustitucin del cido glutmico por la valina. Al descender la pO2 la sustitucin de dicho aminocido origina que la molcula de la hemoglobina cristalice, deformando los hemates, volvindolos falciformes y rgidos, e impidiendo su trnsito por los capilares pequeos.