INTEGRANTES: -Tania Arias Ch.

-Germn Mamani

Son bacilos Gram negativos no esporulados, forma bacilar.

Aerobias o anaerobias facultativas.

Fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a 3037C en 48 horas

Capacidad para crecer en presencia de sales biliares.

 Se encuentra en:
Intestino

del hombre, animales, y en

otros ambientes como: Suelo, plantas, cscaras de huevo, etc.

 Los principales microorganismos indicadores en alimentos son:

Indicadores de condiciones de manejo o de eficiencia de proceso: Mesfilos aerobios (o cuenta total) , cuenta de hongos y levaduras y cuenta de coliformes totales. Indicadores de contaminacin fecha o bacterias entricas: Coliformes fecales, E. coli y enterococos.

 La seleccin de indicadores en un alimento depende fundamentalmente de:

Los Lo

riesgos implicados

que se requiera saber para: liberar, controlar o mejorar el alimento, manteniendo el enfoque preventivo.

 E. coli, es un microorganismo indicador pues: Ser detectables y estar presentes. Su crecimiento y nmero debe ser correlativamente negativa a la calidad. Contados y diferenciados de otros microorganismos. Contables en poco tiempo. Su crecimiento no debe ser alterado por otro componente de la flora.

 Se consideran excelentes indicadores de la eficiencia de los procesos de sanitizacin y desinfeccin, as como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinacin se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa

 Los

coliformes

fecales

Termotolerantes,

fermentan la lactosa entre 43,.5 45,5C, y la facultad de producir Indol en agua peptonada (Pascual,1922).

 Los coliformes totales, fermentan la lactosa a 35 +-1C generalmente: Escherichia Enterobacter

Citrobacter

Klebsiella.

 Existen 3 fases o etapas:

Prueba Prueba

presuntiva. confirmatoria.

Prueba

concluyente.

 Fuente: Youself, E. Ahmed; Carlstrom, Carolyn; Microbiologa de los alimentos Manual de laboratorio;2003; Ed. Acribia.

Fuente: Youself, E. Ahmed; Carlstrom, Carolyn; Microbiologa de los alimentos Manual de laboratorio;2003; Ed. Acribia.

MUESTRA + Tampn fosfato Butterfield

10 -1

Homogenizar la muestra con solucin diluyente

10 -2

10 -3

1. Prueba presuntiva de coliformes

INCUBAR

2. Prueba confirmativa de coliformes totales

3. Prueba confirmativa de coliformes tolerantes

Consultar tabla NMP para 3 diluciones

FUENTE: FDA

4. Prueba completa para E.coli

MTODO NORTEAMERICANO MTODO BRITNICO MTODO CALDO LACTOSA 2% DE BILIS VERDE BRILLANTE, Y CONFIRMACIN EN MEDIO SLIDO

 MTODO NORTEAMERICANO
10
25 gr MUESTRA + 225ml AP -1

1ml 10 -2

1ml 10 -3 C/U con 9ml de AP

Prueba presuntiva:
INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.
Verificar gas y turbidez

C/U con 10ml de LST

Verificar gas y turbidez

Prueba presuntiva:
+ + + + + +

caldo LST

Prueba confirmativa:
INCUBAR: 35 37 C por 24 48 h. + + -

10 ml Caldo Brilla

Verificar gas y turbidez

Fuente: ICMS. Segunda Edicin. Editorial Acribia.

 MTODO BRITNICO
10
25 gr MUESTRA + 225ml AP -1

1ml 10 -2

1ml 10 -3 C/U con 9ml de AP

Prueba presuntiva:
INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.
Verificar gas y turbidez

C/U con 10 mL Caldo Mac Conkey (Prpura de Bromocresol)

Verificar gas y turbidez

Prueba confirmativa:
+ + + + + +

Caldo Mac Conkey (Prpura de Bromocresol)

MTODO CALDO LACTOSA 2% DE BILIS VERDE BRILLANTE, Y CONFIRMACIN EN MEDIO SLIDO 1ml 1ml -1 10 10 -2 10 -3
25 gr MUESTRA + 225ml AP

C/U con 9ml de AP

Prueba presuntiva:
INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.
Verificar gas y turbidez

C/U con 10ml de Brilla

Verificar gas y turbidez

Prueba presuntiva:
+ - + - - - + Siembra en superficie de tubos positivos

caldo brilla

Prueba confirmativa:

INCUBAR: Con VRBA (Agar bilis lactosa rojo neutro cristal violeta): 24 horas/ 35 37C Verificar gas y turbidez Con Agar ENDO: 48 horas/ 35 37C

MTODO NORTEAMERICANO MTODO BRITNICO MTODO CALDO LACTOSA 2% DE BILIS VERDE BRILLANTE, Y CONFIRMACIN EN MEDIO SLIDO

 MTODO NORTEAMERICANO
10
25 gr MUESTRA + 225ml AP -1

1ml 10 -2

1ml 10 -3 C/U con 9ml de AP

Prueba presuntiva:
INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.
Verificar gas y turbidez

C/U con 10ml de LST

Verificar gas y turbidez

Prueba presuntiva:
+ + + + + +

caldo LST

Tomar asadas

Prueba confirmativa:

10 ml Caldo Brilla

INCUBAR: 44,5 +- 0,2 C por 24 48 h.

Verificar gas y turbidez

+ + -

 MTODO BRITNICO
10
25 gr MUESTRA + 225ml AP -1

1ml 10 -2

1ml 10 -3 C/U con 9ml de AP

Prueba presuntiva:
INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.
Verificar gas y turbidez

C/U con 10 mL Caldo Mac Conkey (Prpura de Bromocresol)

+ + +

+ -

Verificar gas y turbidez caldo LST + + + + + + Tomar asadas de los tubos positivos

10 ml Caldo Brilla

INCUBAR: 44C +- 0,1 C por 24 48 h. + + +

+ + + Verificar gas y turbidez

Tomar asadas de los tubos positivos

Prueba Indol 44 C

+ + +

Produccin de gas e Indol positivo

Coliformes termotolerantes

PRUEBAS IMViC PARA IDENTIFICACION DE COLIFORMES

Fuente: ICMS. Segunda Edicin. Editorial Acribia.

Gas en caldo lactosado biliado a 4445.5 C E. Coli Tipo I Tipo II Intermedios Tipo I Tipo II Enterobacter aerogenes Tipo I Tipo II Enterobacter cloacae Irregulares Tipo I Tipo II Tipo IV + -

Prueba de indol

Prueba rojo de metilo

Prueba de Vogues Proskauer

Crecimiento en citrato

+ +

+ + + +

-b -b

+ +

+ -

+ + +

+ + +

+ +

+ -

+ + -

Fuente: ICMS

25 gr MUESTRA + 225ml AP

Serie de diluciones con 9ml de diluyente

10 -2

10 -3

10 -4

10 ml

1 ml

0,1 ml

INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.

FUENTE: MINISTERIO DE SALUD 25 gr MUESTRA + 225ml AP

Serie de diluciones con 9ml de diluyente

10 -2

10 -3

10 -4

CALDO: AL

10 ml

1 ml 0,1 ml Pre incubacin: 35 -37 C por 3 horas Incubacin a Bao Mara: 44,5C x 21 a 23 horas

Indol (+)

Rojo de metilo (+)

Voges Proskauer (-)

Citrato (-)

FUENTE: NORMA ISO

 Uso de las Petrifilm:

Estas placas contienen un medio selectivo para E.coli colorendose las colonias de azul violeta si esta esta presente, sin necesidad de realizas pruebas de identificacin.

VENTAJAS: Evita errores humanos Ayudan a los procesadores de alimentos a muestrear fcilmente, una deteccin rpida del microorganismo

UTILIZAREMOS LACTOSA 2% BRILLANTE, Y MEDIO SLIDO

EL MTODO CALDO DE BILIS VERDE CONFIRMACIN EN

MUESTRA

Refresco presuntamente contaminado

DILUYENTE

Agua peptonada

MEDIO

Caldo lactosa 2% bilis verde brillante (brilla)

VACIAR LA MUESTRA AL BEAKER

10 -1
25 ml

1ml

10

-2

1ml 10 -3 C/U con 9ml de AP

AP

Agregar 1ml a cada tubo

C/U con 10ml de Brilla

INCUBAR: 35 -37 C por 24 48 h.

VERIFICAR SI HUBIERA GAS Y TURBIDEZ

1ra Lectura
+ + + -

caldo brilla

Inocular con un asa los tubos positivos

Sembrar en superficie tubos positivos

INCUBAR: 24 horas a 44C a bao mara

INCUBAR: Con Agar ENDO: 48 horas a 35 37C

 Luego de analizar la muestra de refresco, se obtuvo una cepa sospechosa para E. coli, y luego de las pruebas bioqumicas IMViC:

Prueba del INDOL

El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptfano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con produccin de indol. Al aadir dos gotas del reactivo. Esperar 10 minutos para observar el color del halo formado. Halo rojo: reaccin +

Prueba del ROJO DE METILO

Esta prueba se fundamenta en el tipo y la proporcin de productos de fermentacin que se originan de la fermentacin de la glucosa La fermentacin n cido-mixta Reactivo prueba de RM: solucin indicadora Rojo de Metilo Halo rojo: reaccin (+)

Prueba de VOGUES PROSKAUER

Voges-Proskauer busca va de fermentacin del butanodiol Glucosa acetil-metil-carbinol butanodiol Reactivo prueba de VP: Solucin de naftol e K(OH) Color marrn: reaccin ()

Prueba del CITRATO SODICO

Determinacin sobre la capacidad de un organismo de utilizar citrato como nica fuente de carbono y energa. nicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en este medio y, al hacerlo, liberarn iones amonio lo cual basificar el medio. Sin crecimiento y color verde: reaccin

 - Tener todo listo antes de iniciar la prctica - No demorar al momento de realizar las diluciones - Homogenizar bien las diluciones - Marcar las pipetas que se usan para cada dilucin

I.C.M.S.F. 2000. Los Microorganismos de los Alimentos. Vol. I: Su significado y mtodos de enumeracin. 2a edicin. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza (Espaa).

Food and Drug Administration. 2001. Bacteriological Analytical Manual. 8th Edition. USA.
Youself, E. Ahmed; Carlstrom, Carolyn; Microbiologa de los alimentos Manual de laboratorio;2003; Ed. Acribia.