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Mestrado em Engenharia Biomdica: Especializao em EBTO Virologia e Terapia Gnica 2 ANO (1 Semestre )
Parvovrus
Vrus mais pequenos ( = 18-26 nm)
Dependovirus
Parvovirinae
(vertebrados)
Parvoviridae
Densovirinae
(invertebrados)
Parvovrus autnomos
Dependovirus
Alguns podem replicar na ausncia do vrus ajudante; Usados como vectores de genes:
Parvovirus autnomo
Foi descoberto no soro de um dador de sangue saudvel; Infecta os precusores dos glbulos vermelhos; Infeco assintomtica; Doenas associadas: - artrite aguda; - anemia aplstica; - quinta doena.
Fonte:Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
PARVOVRUS: Virio
GENOMA CPSIDE
Aproximadamente esfrica;
Fonte: Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
PARVOVRUS: Replicao
Depende de protenas da clula hospedeira; Apenas disponveis durante a fase S do ciclo celular (sntese de DNA);
PARVOVRUS: Replicao
LIGAO E ENTRADA:
Fonte:Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
PARVOVRUS: Replicao
Converso ssDNA para dsDNA e Replicao DNA:
Converso mediada por DNA polimerase celular; Extremidade 3-terminal actua como primer (local onde a enzima
polimerase se liga);
Fonte:Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
PARVOVRUS: Replicao
TRANSCRIO E TRADUO:
Fonte: Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
Fonte: Carter, J. and Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd
AAV: Caracterizao
Protenas Primer da replicao Protenas Integrao do genoma viral e funcionais 5kb estruturais (VP1, VP2, VP3) sua desintegrao
Adaptado de: Buning H., Perabo L., Coutelle O., Quadt-Humme S. & Hallek M. (2008). Recent developments in adeno-associated virus vector technology. The journal of gene medicine 10: 717-733.
AAV: Infeco
EtapasAAV-2 da infeco
3 1 Ligao ao receptor celular 2 Entrada na clula 3 4 2 5
Ciclo ltico
Replicao do genoma do AAV Expresso de genes Produo de viries
Ciclo latncia Expresso das protenas Rep Ligam-se s ITR e ao AAVS1 Integrao do genoma viral
Locus: 19q13.4
Cpside: poder ser Alternativa: de diferentes Clulas de insectos serotipos 5 vezes (produo superior)
Adaptado de: Buning H., Perabo L., Coutelle O., Quadt-Humme S. & Hallek M. (2008). Recent developments in adeno-associated virus vector technology. The journal of gene medicine 10: 717-733.
Cpside AAV-2
Olho
CNS Fgado, msculo esqueltico Msculo esqueltico Corao Junes Pulmo
AAV-2
AAV-2 AAV-2 AAV-1/2 AAV-1; AAV-6 AAV-2 AAV-2
HEMOFILIA B: Doena gentica associada ao cromossoma X; Consiste numa deficincia no factor de coagulao IX (FIX);
Tratamento actual:
Injeces intravenosas do factor de coagulao concentrado (2 a 3 vezes por semana); Carcter profiltico; Extremamente dispendioso.
Alternativa: TERAPIA GNICA
Transferncia do gene mediada pelo vector AAV; Permite a restaurao da actividade de coagulao;
- a produo do factor diminui progressivamente;
- torna-se indetectvel 14 semanas aps o tratamento.
AAV-2
Insero de ligandos; Uso da cpside do AAV-8 ou de outros AAV (requerimento: < seroprevalncia);
Fonte:Buning H., Perabo L., Coutelle O., Quadt-Humme S. & Hallek M. (2008). Recent developments in adeno-associated virus vector technology. The journal of gene medicine 10: 717-733.
AAV2/8
Administrao intravenosa
(diferentes concentraes)
AAV-8 Cpside
AAV-2 ITR
Monitorizao overnight
Nathwani A.C. et al. (2011). Adenovirus-Associated Virus VectorMediated Gene Transfer in Hemophilia B. The New England Journal of Medicine 365 (25): 2357-2365.
Quanto maior a dose administrada -> maiores os nveis de FIX; 4 (dos 6 pacientes) pararam de receber o tratamento profiltico (injeco de FIX concentrado) -> retomando as actividades que estavam impedidos de realizar devido doena;
2 pacientes diminuram o nmero de injeces de FIX concentrado necessrias; (soluo possvel: aumentar a dose de administrao do transgene -> aumento da expresso de FIX);
A administrao do transgene FIX provoca um aumento dos nveis de aminotransferase (soluo: administrao de glucocorticides, que no afectam a expresso do FIX);
Esta estratgia permite assim a expresso, a longo prazo, do transgene FIX (a nveis teraputicos) -> sem apresentar uma toxicidade aguda e a longo prazo;
Concluses
necessrio conhecer e compreender melhor o processo infeccioso de modo a superar as limitaes e optimizar a eficincia e segurana dos vectores virais Continua por resolver o problema associado resposta imunitria
Bibliografia
Buning H., Perabo L., Coutelle O., Quadt-Humme S. & Hallek M. (2008). Recent developments in adeno-associated virus vector technology. The journal of gene medicine 10: 717-733. Carter, J. & Sauders, V. (2007). Virology: principles and applications. England: John Wiley & Sons, Ltd. Giacca M. & Zacchigna S. (2012). Virus-mediated gene delivery for human gene therapy. Journal of controlled release 161: 377-388. Menck C. F. M. & Ventura A. M. (2007). Manipulando genes em busca de cura: o futuro da terapia gnica. Revista USP 75: 50-61. Nathwani A.C. et al. (2011). Adenovirus-Associated Virus VectorMediated Gene Transfer in Hemophilia B. The New England Journal of Medicine 365 (25): 2357-2365. Ortolano S., Spuch C. & Navarro C. (2012). Present and future of adeno associated vrus based gene therapy approaches. Recent patents on endocrine, metabolic & immune drug discovery 6: 47-66. Qiu Y., Yang B., Lan X., Li X., Yin X. & Liu J. (2012). Advances in studies on recombinant adeno-associated virus vector. Asian journal of animal and veterinary advances 7: 1255-1260.