Dra. Ela Alvarado A.

TEMAS A DESARROLLAR
Introduccin a la Gentica. Importancia. Terminologa mas usada. Mtodos clnicos y mtodos de laboratorio. rbol Genealgico Familiar. Obtencin de cromosomas in vitro. Cultivos celulares. Mencin de Ciclo celular y divisin celular. Cromosomas humanos: morfologa clasificacin, identificacin. Tcnicas de bandeo: G, C, Q, NOR, ICH, FISH. Cromatina sexual - Hiptesis de Lyon. Cromosomopatas Sexuales: Sndromes de Turner y Klinefelter y similares.

RAMAS O CAPTULOS DE LA GENTICA

CITOGENTICA GENTICA MOLECULAR GENTICA BIOQUMICA GENTICA POBLACIONAL INMUNOGENTICA FARMACOGENTICA INGENIERA GENTICA

GENTICA DEL COMPORTAMIENTO

LA GENTICA, LA LEY Y LA BIOTICA

TERMINOLOGA
ALELOS, HOMOCIGOTOS, HETEROCIGOTOS, HEMICIGOTO DOMINANCIA Y RECESIVIDAD GENOTIPO Y FENOTIPO

CONGNITO Y HEREDITARIO
HERENCIA Y AMBIENTE MOSAICISMO

I. MTODOS CLNICOS DE LA GENTICA

1. AMNIOCENTESIS 2. RADIOGRAFAS 3. ULTRASONOGRAFA 4. FETOSCOPA 5. MANIPULACIN DE CLULAS GERMINALES 6. EMBRIONES IN VITRO 7. INGENIERA GENTICA

8. PREDICCIN DEL SEXO

9. PRODUCCIN DE CLONES 10. PROCREACIN SELECTIVA

RBOL GENEALGICO FAMILIAR

DEFINICIN: o heredograma, o pedigr. Es un mtodo abreviado en las que se representa esquemticamente mediante smbolos conocidos la historia de una familia indicando las personas afectadas y el parentesco que guarda con el propsitus, probando o caso ndice

RBOL GENEALGICO FAMILIAR

SMBOLOS MAS USADOS

RBOL GENEALGICO FAMILIAR

SMBOLOS MAS USADOS

A. G. BRAQUIDACTILIA

II. MTODOS DE LABORATORIO

CICLO CELULAR

Telomero

Centrmero

TECNICAS DE COLORACION I. COLORACION CONVENSIONAL

II. DIFERENTES TCNICAS DE BANDEO CROMOSMICO

1. Bandas Q
2. Bandas C 3. Bandas G

5. Bandas NOR 6. Bandas G-11 7. ICH 8. FISH

4. Bandas R

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS Q: Casperson, 1971.

Se colorean con mostaza de quinacrina o dihidroclorato de quinacrina.

Se visualiza en microscopio de fluorescencia.

Fluorece en presencia de ADN rico en A-T (Ellison y Barr, 1972).

Las bases G-C rompen la fluorescencia (Commings, 1975-1978).

Las proetnas NO HISTONAS limitan el acceso a la zona G-C (Pachman & Riegler, 1972).

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS G: Summer, 1971. GIEMSA: Colorante derivado de las TIAZINAS, que son molculas planas con carga (+) que interactan con los grupos fosfatos del ADN por fuerza inicas. Las bandas G (+) corresponden a CROMATNA LIBRE para unirse al colorante. Las bandas G (-) son DNA cubierto o no disponible y en parte extrado.

Las bandas G (-) son ricas en G-C de replicacin temprana, se relacionan con genes estructurales. Dan lugar a bandas G claras.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS G (continuacin) Las bandas G (+) son ricas en A-T que replican tardiamente con genes de tejido especficos (ej. gen de la -globina), sin embargo replican temprano en el tejido que expresa el gen. Dan lugas a bandas G oscuras (+). Utiliza la tripsina (desnaturaliza las protenas).

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS C: Pardue & Gall, 1970. Para marcar la heterocrmatina constitutiva. Extraccin del DNA no pericentromrica (heterocromatina de la regin centromrica). 20% del genoma humano. Se trata con solucin de hipoclorito de sodio a temperatura ambiente y se lava con solucin salina. Resultado: Se observa la marcacin de la heterocromatina constitutiva de distribucin pericntrica en todos los cromosomas a excepcin del Y que se encuentra en el brazo largo. Tie las constricciones secundarias de los cromosomas 1, 9 y 16.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS R: Dutrillaux & Lejuene, 1971. Llamadas tambin bandas REVERSA, por ser el reverso de las Bandas G. Se obtienen con tratamiento de temperatura y colorante Giemsa. Tambin bandas R fluorescentes con ACRIDIA ORANGE. Detecta DNA rico en G-C. Denatura DNA rico en A-T.

Especialmente til en rearreglos terminales y polimorfismos.

Se usa cuando se sospecha que los telomeros participan en alguna anormalidad.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS NOR: Ferguson-Smith, 1961.

FUNDAMENTO: Emplea plata amoniacal para teir regiones de los organizadores nucleolares, que contienen ARNr localizados. Para ver polimorfismo de los satlites.
Las regiones NOR se ubican e el tallo del satlite de los cromosomas acrocntricos, correspondiendo a protenas NO HISTONAS que aparecen con la sntesis del ARNr. RESULTADOS: Las constriciones secundarias de los cromosomas acrocntricos con satlite se tien en los tallos con plata amoniacal.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDAS G-11: FUNDAMENTO: Modificacin de la banda G con pH elevado para demostrar variantes normales comunes (polimorfismos). RESULTADOS: Se tien: las constricciones secundarias del cromosoma 9, el segmento distal largo del cromosoma Y,

el rea pericntrica del cromosoma 20.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

ICH (INTERCAMBIO DE CROMATIDES HERMANAS)

Mediante la autoradiografa usando sustancias como Bromo-desoxiuridina que sustituye a la timidina. Se observa el intercambio entre los segmentos de las cromatides hermanas. Se realizan normalmente de 6-9 intercambios por metafase, y aumentan cuando se exponen a mutgenos o en algunas enfermedades donde se observan los GAPS sitios frgiles como brechas que no se tien bien.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO.

FISH (HIBRIDACION FLUORECENTE IN SITU) Se emplean sondas (PROBES) especficas para la coloracin de determinados cromosomas, y disgnostican anomalas cromosmicas.

FUNDAMENTO: A partir del ADNc o ADN genmico. La sonda se marca y se aade por hibridacin, y la seal se identifica por autoradiografa o fluorescencia. Se observan grnulos en la zona que hubo hibridacin

Gen glicogeno fosforilasa 1 del msculo en el cromosoma 11

Baja resolucin

Alta resolucin

Regin

Banda

HETEROMORFISMOS CROMOSOMICOS
Las diferencias interindividuales en el contenido de ADN de los cromosomas se han precisado mediante la CITOMETRIA DE FLUJO O MICRODENSITOMETRIA. Existen cuatro grupos principales:

1. TAMAO DEL BRAZO q DEL CROMOSOMA Y:

FRECUENCIA: 10% de los hombres tienen el cromosoma Y mas largo y mas corto que lo usual.

COLORACION: BANDAS Q Y BANCAS C.

HETEROMORFISMOS CROMOSOMICOS
2. TAMAO DE LA HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA:
VARIACIONES EN LOS CROMOSOMAS 1, 9, 16. TINCION: BANDAS C.

3. POLIMORFISMOS DE LOS SATELITES:

VARIACIONES EN LOS CROMOSOMAS 13, 14, 15, 21, 22. TINCION: BANDAS Q Y NOR.

4. SITIOS FRAGILES:
Rasgos estructurales de los cromosomas que se hacen visibles en cieras condiciones en el cultivo de tejidos. Se heredan en forma codominante, por lo menos existen 20 sitios frgiles comunes y 18 sitios raros.

CARIOGRAMA NORMAL

SISTEMA INTERNACIONAL DE NOMENCLATURA PARA CITOGENTICA HUMANA

- DEFINICIONES MAS USADAS EN CITOGENTICA HUMANA: CARIOTIPO, CARIOGRAMA E HIDIOGRAMA. - NOMENCLATURA CROMOSMICA IS C N ( INTERNATIONAL SYSTEM CYTOGENEITC NOMENCLATURE ) 1,995 - En cromosomas normales : Varn normal Mujer normal - En anomalas numricas : S. de Down : 46,XY : 46,XX : 47,XY,+21

S. de Klinefelter : 47,XXY

- En anomalas estructurales : S. Cri-duchat : 46,XY,del(5)(p15) S. de Down : 46,XX, der ( 14;21) (q10;q10),+21

Anomala en cromosoma sexual X : 46,X, r (X) (p13 q26)

SMBOLOS MAS USADOS EN LA NOMENCLATURA CROMOSMICA

AG 1 22 X, Y / del dup i ins inv mat Grupos cromosmicos Numeracin de autosomas Cromosomas sexuales Indica mosaicismo Delecin Duplicacin Isocromosama Insercin Inversin Origen materno pat mar dic fra h p q Origen paterno Marcador Dicntrico Sitio Frgil Heterocromatina Brazo corto Brazo largo.

SMBOLOS MAS USADOS EN LA NOMENCLATURA CROMOSMICA

r s t t rep t rob

Cromosoma en anillo Satlite Translocacin Translocacin robersoniana Translocacin tandem Terminal desde hasta

ter o qter

(delante del N de cromosoma indica adicin)

Ej +21
(indica prdida) Ej 5p-

CROMOSOMAS EN INTERFASE
(CROMATINA SEXUAL)

LYONOZACIN O INACTIVACIN DEL CROMOSMA X

HIPTESIS DE LYON Lyonizacin: ( Mary Lyon en 1,961) Proceso por el cual uno de los crom.X en la mujer se inactiva al azar en c/u de las clulas somticas Proceso de desarrollo q afecta al cro. X en etapas sucesivas an incompletamente conocidas. GEN XIST : Responsable de la inactivacin caracterstica de 1 de los 2 crom. X de la mujer y se manifiesta citolgicamente como corp. de Barr. Un EH de 14 da es mosaico para el Xm Xp . Aspectos moleculares de la H.L. : El gen XIST est ubicado en el Xp13, estrechamente ligado al gen RP4X y al PHKA1, se extiende por cerca de 80 kb. Consta de 8 exones y su producto de transcripcin es >15 kb Algnos genes q se encuentran en el X inactivo son resisten a la lionizacin y mantienen su actividad transcripcional.

ASPECTO MOLECULAR DE LA CROMATINA SEXUAL La cromatina sexual es un complejo de ADN mas histonas (Arg Lis). Estas proteinas son de dos grupos : - Histonas proteinas pequeas con alto contenido de aa bsicos, se distribuyen en paquetes de 8 moleculas: H2A, H2B, H3 y H4. H1, se encuentra en el ADN espaciador y en la parte externa de los nucleosomas. - No histonas grupo heterogneo, forma la estructura de los cromosomas, otros se relacionan con la transcripcin y la replicacin.

ASPECTO MOLECULAR DEL CORPSCULO DE BARR

La cromatina en el nucleo se puede encontrar en dos formas: - Heterocromatina: forma inactiva condensada, localizada en la periferia del nucleo. Se tie fuertemente, replicacin tardia. a.- H. Constitutiva: Carece de informacion gentica. b.- H. Facultativa: Contiene informacin de los genes que no se expresan. -Eucromatina: forma activa condensada. Se tie debilmente, contiene la mayoria de los genes estructurales.

CROMOSOMOPATAS SEXUALES FRECUENTES

FENOTIPO FEMENINO: SINDROME DE TURNER TRISOMIA X SINDROME PENTA X FEMINIZACION TESTICULAR

45,X0 47,XXX 49,XXXXX 46,XY

FENOTIPO MASCULINO: SINDROME DE KLINEFELTER SINDROME XXXXY HOMBRES XYY VARONES XX SINDROME DE NOONAN

47,XXY 49,XXXXY 47,XYY 46,XX 46,XY

SINDROME DE TURNER
FRECUENCIA: 1/2500 recien nacidos vivos de sexo femenino 90% de embriones con cariotipo 45,X0 son abortados en el primer trimestre. En Mxico la talla promedio de mujeres 45,X0 es 1.376 +/- 0.58 cm.

HALLAZOS CLINICOS MAS FRECUENTES EN EL SINDROME DE TURNER CON 45,X0

SIGNO POR CIENTO

Talla baja Cubitus valgus Implantacin baja del cabello Epicanto Linfedema Malformacin renal Pterygium coli Cardiopata congnita Nevos pigmentados Metacarpo, metatarso o falanges cortas

100 95 78 76 67 60 59 53 44 33

SINDROME DE TURNER

SINDROME DE TURNER

SINDROME DE TURNER

CARIOTIPO SINDROME DE TURNER

TRISOMIA X CARIOTIPO : 47, XXX INCIDENCIA: 1/1,000 1/2,000 R.N. vivas.

FENOTIPO: Amenorrea secundaria, hipoplasia de labios menores. Mas alta que el resto de las nias en su familia. El 75% son frtiles. R.M. en 25% de ellas. Prinera infancia con alteraciones de carcter y posterior esquizofrenia y psicosis. Problemas mentales de aprendizaje y comportamiento. Trastornos neuroepilepticos similar a XXY. Efecto de edad materna avanzada.

SNDROME PENTA X CARITIPO : 49,XXXXX FENOTIPO : Hendidura parpebral mongoloide. Hpertelorismo, coloboma del iris.

Conducto artereoso permeable.

Odos de asentamiento bajo.

Cuello corto, surco simiescos, equinovaro.

Manos pequeas con clinodactilia en los meiques.

FEMINIZACIN TESTICULAR (PSEUDOHERMAFRODITISMO MASCULINO) CARIOTIPO : 46, XY FENOTIPO : Fenotipo externo es como el de una mujer nomal. Vagina termina en fondo de saco, no existe tero ni trompas de Falopio. Testculos de ubicacin abdominal o inguinal.

Causada por receptores de andrgenos

SINDROME DE KLINEFELTER
HALLAZGOS CLINICOS: Hipoplsia testicular con azoorpermia u oligospermia. Caracteres sexuales deficinetes por niveles disminuidos de testosterona. Ginecomastia uni o bilateral en 40%. Escaso vello pbico. Hbito eunucoide. Retardo metal moderado nunca profundo (CI = 10-15 ptos menor a los normales). 15% de casos son mosaicos y algunos son frtiles. Otros mosaicos con 3 o ms lneas celulares se observan ocasionalmente.

SINDROME DE KLINEFELTER

FRECUENCIA: 1/1000 nacidos vivos de sexo masculino. 100/1000 en varones infestados. 10/1000 en varones en instituciones para retardados

mentales.

CARIOTIPO SINDROME KLINEFELTER

SINDROME XXXXY
CARIOTIPO: 49,XXXXY

- Cuello corto, esternon grueso.

- Hipogenitalismo, pronacin limitada de los codos.

- Recuento bajo de crestas drmicas en los pulpejos digitales.

- Deficiencia mental, C.I. medio 34

- Peso y estatura baja al nacimiento.

- Hipertelorismo, estrabismo, epicantos internos.

- Prognatismo mandibular.

VARONES XYY CARIOTIPO : 47, XYY

- Frecuencia: 1/1,000 R.N. vivos. En varones internados en instituciones para subnormales mentales es de 20/1,000. Entre hombres adultos deficientes mentales 3/1,000. - Fenotipo: Presentan untamao mayor de los diente, mas alto que sus hermanos. Testculos de tamao normal.
- Algnos tienen problemas de comportamineto social. - Funcin endocrina conservada. Se reproducen normalmente

VARONES XX CARIOTIPO: 46,XX

- Frecuencia: 1/20,000 R.N. vivos.

- Etiologa: En el 80% de los casos el cariotipo demuestra transferencia de material gentico: Yp11.2 al Xp. - El 20% de los casos se identifica por analisis de ADN o por hibridacin in situ y en Xp.

- Fenotipo: son infrtiles con manifestaciones exocrinas semejantes al Sndrome de Klinefelter. Testculos pequeos. Inteligencia normal. Desproporcin esqueltica entre el segmento superior e inferior.

SINDROME DE NOONAN - CARIOTIPO: 46,XY -FENOTIPO : Similar al Sndrome de Turner: - Pabellones auriculatres de asentamiento bajo y/o anormales.Implantacin baja de cabello. Pterigion coli. - Estatura baja.Torax en escudo, pectus escavatum.

- Cardiopata congnita: estenosis de la pulmonar, defectos septales.

- Pene y testculos pequeos. Criptoqudea.