MEIOS DE CULTURA

Como preparar
Meios comerciais devem ser hidratados Primeiramente devem ser pesados Tansferir para um frasco Hidratar em pequena quantidade e misturar

Depois deve-se acrescentar o restante da gua

Levar o meio para fundir aquecer

 Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos no precisam estar esterilizados previamente Esterelizar em autoclave por 15 minutos e temperatura de 121C Distribuir o meio aps a autoclavao - tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estreis

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semiabertas - tampas fechadas no permitem a entrada do vapor

Classificao dos meios

Meios para transporte e conservao Meios para cultivo e isolamento Meios comerciais para provas de identificao

Transporte e conservao
Cary Blair Salina Tamponada Meio Stuart Agar nutriente

Cary Blair
Microrganismos intestinais patognicos e coliformes fecais sobrevivem bem neste meio. outros

carncia de uma fonte de nitrognio impede A consideravelmente a multiplicao dos microrganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles. Utilizado para transporte de material fecal consequente conservao dos microrganismos. e

Salina Tamponada
Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel. Usado como meio de transporte de amostras biolgicas.

Contm NaCl, fosfato dipotssico anidro, bidestilada e gua destilada.

Glicerina

Meio Stuart
A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microrganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles. Usado para transporte de diversos materiais consequente conservao dos microrganismos. e

onservao de microorganismos patognicos como: C Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.

Agar Nutriente
um meio relativamente simples, de fcil preparao e barato, muito usado nos procedimentos do laboratrio de Microbiologia. Usos: nlise de gua, alimentos e leite A Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a exames bacteriolgicos Isolamento de organismos para culturas puras. Observar esporulao de espcies de bacilos Gram positivos. O uso mais frequente - conservao de culturas em temperatura ambiente, para os laboratrios que no dispem de crioconservao (freezer - 70C).

Cultivo e Isolamento
gar TSA Caldo BHI gar Chocolate Caldo Selenito gar MacConkey Caldo Tetrationato gar Sangue Lwenstein Jensen gar CLED Meio bifsico: Lwenstein e Middlebrook, gar Salmonella-Shigella gar Manitol (MSA) gar EMB gar Mycosel gar Sabouraud gar Verde Brilhante (BGA) Caldo Tioglicolato com indicador Caldo Tioglicolato sem indicador

Tryptic Soy Agar (TSA)

Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar Tambm chamado de CASO Agar (Casein-peptone soymeal-peptone agar) recomendado para o cultivo de bactrias no fastidiosas uso geral.

Pseudomonas aeruginosa

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Caldo BHI
Brain Heart Infusion meio enriquecido um meio derivado de nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrose. Fornece fontes de nitrognio, carbono, enxofre e vitaminas. Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no fermentadores, leveduras e fungos. Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos Realizao de teste de coagulase em tubo Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C Teste de motilidade em lmina.

Agar Sangue
Meio enriquecido e diferencial Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e resfriada, adiciona-se sangue. A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem a formao de halos de hemlise ntidos.

Diferenciao de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.

Bacillus cereus -hemoltico

Enterococcus faecalis Estreptococcus -hemoltico No hemoltico ()

Agar Chocolate
Meio de cultura enriquecido base do meio, adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.: Neisseria, Haemophilus) Alguns organismos que no crescem em meios comuns so capazes de crescer neste meio

Neisseria gonorrhoeae

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Agar Thayer-Martin
Thayer-Martin Chocolate um meio rico seletivo superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis Contm em sua frmula antibiticos que inibem o crescimento de Neisserias saprfitas e outras bactrias, evitando contaminaes.

Neisseria gonorrhoeae

Agar Salmonella-Shigella (SS)

Seletivo e diferencial

Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem microrganismos Gram positivos.
O meio possui lactose, que permite diferenciar bactrias lactose positivas e negativas Lactose positivas- produzem cido que na presena do indicador vermelho - formao de colnias de cor rosa Lactose negativas- formam colnias transparentes. ermite a deteco de H2S - formao de colnias de P cor negra no centro.

Agar MacConkey
Seletivo e diferencial O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos.

A concentrao de sais de bile relativamente baixa, por isso no to seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o gar SS. Usado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactrias e no fermentadores) e verificar a fermentao ou no da lactose.

Pseudomonas aeruginosa

Escherichia coli

Salmonella sp.

Meio Hektoen
um meio seletivo e diferencial Utilizado para detectar a fermentao de lactose e produo de H2S

Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactrias no-entricas

Fermentados de lactose - amarelo ou salmo No fermentadores - sem cor Produo de H2S - precipitado preto

Salmonella enteridis

Escherichia coli

Agar Sal Manitol

Meio seletivo e diferencial Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem em altas concentraes de sal

Diferencia

Staphylococcus aureus Staphylococci

de

outros

Aps o crescimento, Staphylococcus aureus amarelo (fermenta o manitol), outros Staphylococci so brancos

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Agar CLED
Cystine Lactose diferencial Eletrolyte Deficient Seletivo e

A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de Proteus.

Usado para isolamento e quantificao microrganismos presentes em amostras urina.

de

Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. olnias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor C azul.

Staphylococcus aureus

Proteus mirabilis

Escherichia coli

Agar verde brilhante (BGA)

um meio altamente seletivo, usado para o isolamento de outras salmonelas que no a S. Typhi, existentes nas fezes e em outros materiais. A presena de extrato de levedura e duas peptonas fornecem os nutrientes

A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema de diferenciao de fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
Salmonelas no produzem cido a partir destes acares. O verde brilhante o agente seletivo que inibe a flora de acompanhamento.

Salmonella sp.

Escherichia coli

Agar Eosina Azul de Metileno

Agar EMB um meio para diferenciao ligeiramente seletivo Utilizado para o isolamento e diferenciao de bacilos entricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos). Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactrias gram-positivas num determinado grau - diferenciar os fermentadores Coliformes produzem colnias pretas-azuladas

Salmonella e Shigella so incolores ou tm uma cor mbar transparente, no fermentam lactose

Escherichia coli podero apresentar um reflexo verde metalizado caracterstico, devido rpida fermentao da lactose

Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli

Salmonella enteridis

Meio Lwenstein Jensen

A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactrias O crescimento satisfatrio para o teste de niacina (que positivo para Mycobacterium tuberculosis)

Utilizado para isolamento primrio das micobactrias

Crescimento bom a excelente (colnias amarelas) Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium Incubao por 60 dias

Mycobacterium tuberculosis

Agar Mycosel
A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatfitos. O cloranfenicol inibe o crescimento de bactrias e alguns fungos filamentosos. Usado para isolamento de fungos patognicos, principalmente dermatfitos, a partir de material de investigao contaminado. Crescimento bom a excelente: verrucosum, Candida albicans Crescimento inibido: Aspergillus tropicalis, Penicillium spp. niger Trichophyton , Candida

Candida albicans

Agar Sabouraud
Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos. Cultivo e crescimento de espcies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infeces superficiais.

Caracterizao macroscpica do fungo filamentoso (colnia gigante).

Sporothrix schenckii

Candida albicans

Microsporum canis

Meios para identificao

gar TSI CaldoTSB Meio SIM gar Citrato Simmons gar Fenilalanina gar base uria Caldo Triptona Caldo Nitrato Caldo Malonato gar Blis-Esculina gar Sangue Caldo base de Moeller gar Dnase gar Esculina CTA Cystine Tryticase Agar Meio base para oxidao e fermentao - OF Base de nitrognio para leveduras

Veremos os meios para identificao na nossa prxima aula!