Mtodos de laboratorio

Actividad enzimtica

Conveniencias del mtodo para obtener muestras con utilidad clnica

Las enzimas se miden utilizando el suero sanguneo. Las enzimas se pueden clasificar en dos tipos Las que son segregadas a la sangre por un tipo de clula Cimgeno Proceso de coagulacin de la sangre y las del metabolismo de las lipoprotenas Las que son liberadas por el recambio celular. Si un rgano es daado por una enfermedad o por lesin puede elevar estas enzimas

Enzimas

Se encuentran en el plasma, y se mantiene mediante la desintegracin normal de clulas Sin embargo no es la nica forma de liberar enzimas

Lesin Tisular
Hay una liberacin de enzimas al plasma, debido a que estas se encuentran dentro de las clulas El nivel de actividad enzimtica se relaciona con la extensin de la lesin, por lo que es til determinar el grado de elevacin de una actividad enzimtica La causa es que cualquier circunstancia que afecta la permeabilidad de la membrana va a traer como consecuencia una liberacin de enzimas

Tcnicas manomtricas
Aparato de barcroft-warburg Oxidasa de xantina Acetilcolinesterasa

Espectrofotometra

Mtodo de thunberg

Determinacin qumica
Se pueden analizar muestras de la mezcla reaccionante, tomadas a diversos intervalos, y determinar la cantidad del substrato o de producto.

Polarimetra

Otros mtodos

Potenciometra

Cromatografa

Localizacin de la actividad de la enzima en la clula

Mtodo de Schneider y Hogeboom: Permite la separacin del homogenato en varias fracciones uniformes.

Separacin de lisosomas y peroxisomas: Cambio de la naturaleza quimica y densidaddel medio.

Enzimas especificas de los rganos

Los cambios en los niveles de enzimas plasmticas reflejan los cambios en los rganos y tejidos.

Cambios en la permeabilidad de la membrana y muerte celular causan la liberacin de enzimas intracelulares en el plasma. El diagnostico se basa en la proporcin de enzimas.

Enzimas especificas de los rganos

Diagnostico del infarto del miocardio (Isoenzimas)

Son enzimas que catalizan la misma reaccin, sin embargo no tienen la misma propiedades fsicas debido a la secuencia de aminocidos, por tanto se pueden separar mediante electroforesis. Enzimas mas utilizadas: Creatina quinasa (CK) y lactato deshidrogenasa (LDH). CK: Es la primera enzima que se detecta durante el infarto de miocardio. La concentracin en suero aumenta y cae tan rpidamente que es de poca utilidad clnica despus de varios das. LDH: La concentracin en suero aumenta mas tarde, se utiliza para el seguimiento de las ultimas fases del dao coronario. Muchas isoenzimas contienen diferentes subunidades en diversas combinaciones.

* Cada actividad enzimtica muestra un perfil temporal caracterstico en trminos de su liberacin por clulas musculares cardiacas daadas y de la velocidad de depuracin de la sangre

La CK que se encuentra en forma de dmero tiene dos tipos de protmeros: tipo muscular (M) y tipo cerebral (B). CK1 (BB). CK2 (MB) y CK3 (MM): estn en el musculo cardiaco. La MB su concentracin en sangre alcanza un mximo un da despus del infarto. La CK3 (MM) tambin se encuentra en otros tejidos, alcanza un pico un da despus de la CK2.

La LDH es un tetrmero formado por dos protomeros: tipo cardiaco (H) y tipo muscular (M). Existen cinco isoenzimas diferentes de LDH: LDH-1 (H4) y LDH-2 (H3M): se encuentran en musculo cardiaco y los eritrocitos. LDH-5 (M4): se encuentra tanto en el hgado como en el musculo esqueltico. LDH-3 y LDH-4: se encuentran en otros rganos.

El musculo miocardico es el nico tejido que contiene 5% de la actividad CK total en forma de isoenzima CK2 (MB), la aparicin de esta enzima hibrida en el plasma es especifica del infarto de miocardio; aparece de 4 a 8 hrs tras el comienzo del dolor torcico, alcanza su mximo a las 24 hrs y regresa a su estado basal despus de 48 a 72 hrs. La troponina T e I son protenas que interviene en la contraccin del miocardio, se liberan al plasma en respuesta a una lesin cardiaca, aparece en el plasma al cabo de 4 a 6 hrs despus de un infarto alcanza su valor mximo en 8 a 28 hrs y se mantienen elevadas durante 3 a 10 das.

Bibliografas
http://www.drcalderonlabs.com/Metodo

s/Analisis_De_Aguas/Determinacion_DBO 5_Metodo_Respirometrico.htm