ANLISIS DE METABOLISMO DE SACAROSA DURANTE EL CRECIMIENTO DE PTALO DE ROSAS DE CORTE

Resumen
Investigamos el metabolismo de la sacarosa en ptalos de rosa usando el conectado y el separado de flores. El peso fresco del ptalo de flores separadas tratada con sacarosa era inferior que para flores conectadas, y los niveles de hexosa de estos ptalos de flor separada eran tambin inferiores

 Las actividades invertasa en flores conectadas aumentaron notablemente durante el crecimiento de ptalo, pero estas actividades en separado de flores disminuyeron, incluso cuando flores separadas fueron tratadas con la sacarosa. Nuestros resultados sugieren que la induccin de la actividad invertasa en condiciones de poscosecha podra ser importante para la calidad de algunos cultivares de rosa

Introduccin
La vida de la flor principalmente depende del desarrollo de relaciones adversas de agua, que causa la carencia de apertura de flor, el marchitamiento de ptalo prematuro y el doblamiento del pednculo. La acumulacin de azcar en clulas de ptalo, como se cree, es un mecanismo para reducir potencial de agua en el ptalo, promoviendo la afluencia de agua para la ampliacin de clula y la abertura de flor

 La adicin de la sacarosa para cortar flores aumenta los niveles de glucosa y fructosa, pero tiene poco afecto sobre el contenido de sacarosa en ptalos, indicando que la sacarosa trasladada a ptalos de otros rganos es metabolizada a glucosa y fructosa y se acumula en clulas de ptalo La enzima que metaboliza la sacarosa trasladada de hojas para hundir tejidos es principalmente el cido invertasa (B-fructosidasa, que est presente en muchas plantas ms altas en la vacuola (forma soluble) y el tabique celular (forma insoluble).

 El cido invertasa tiene un rol importante en la conversin de sacarosa en hexosas, Despus de su traslado desde el floema a la apoplast, y esto permite absorber hexosa por los ptalos. El cido invertasa soluble tambin tiene funcin biolgica importante relacionada al metabolismo de sacarosa

Materiales y mtodos
Las flores fueron cosechadas en tres etapas (Fig. 1A): ST. I, los spalos estuvieron cerrados y los ptalos eran pigmentados (ms jvenes que la etapa de cosecha comercial). ST II, los spalos estuvieron centrados completamente el uno del otro. ST III, los ptalos externos fueron ampliados y comenzados para doblarse atrs. Para los experimentos de corte de flor, los brotes de rosa en STI fueron cosechados. Y sus tallos fueron cortados de nuevo en su pednculo bajo el agua.

Fig. 1. Etapas abertura de la flor y peso fresco del ptalo despus del tratamiento dado a las flores en la etapa I. (A) Etapas como observadas en conectado de flores. (B) Las Flores fueron cosechadas en la etapa ST l, colocado en el agua o tratado con la solucin sacarosa. Los ptalos fueron probados cuando las flores haban abierto a ST II o III. Los datos se refieren a FW de cinco ptalos externos por flor. Los valores son el medio de siete o nueve rplicas S.E.

 Estos brotes fueron tratados con agua desionizada o 90mM de solucin de sacarosa en 25 C y 70% RH y 16 h fotoperodo (PAR; 55-90 mol/m2/s). Los cinco ptalos exteriores de cada brote o flor fueron probados. Despus de que su peso fresco fue medido, los ptalos fueron congelados en el nitrgeno lquido para la enzima subsiguiente y extracciones de azcar. EL total de protenas fueron extradas en 4 C o sobre hielo por homogenizando ptalos congelados en nitrgeno lquido con un mortero y una mano. El polvo congelado fue mezclado bien en dos veces el volumen de extraccin buffer ( 0.1 M K fosfato buffer, ph 7.4 contiene 2 mM etilenodiaminotetraacetato, 10 mM mercaptoetanol y 10 mM de asorbato de sodio). La mezcla fue centrifugada en 15, 000x g por 10 minutos, y la bola fue lavada con la extraccin buffer y centrifugada otra vez.

 Esto se lava el paso fue repetido dos veces. Despus de la centrifugacin, el supernadador que contuvo la protena soluble y el residuo que contuvo la protena insoluble fue separada. Protenas solubles en el supernadador fueron precipitadas con el 80 % de sulfato de amonio saturado, centrifugada en 15, 000x g por 10 minutos, y luego disuelto en un pequeo volumen de extraccin buffer (fraccin soluble). El residuo bien lavado, que contuvo la protena insoluble, fue mezclado con un pequeo volumen de extraccin buffer (la fraccin insoluble). Tanto fracciones solubles como insolubles eran dializados contra el buffer de dilisis (el buffer fosfato de K de 10 mM en el pH 7.4 2 mM que contienen 2-mercaptoetanol) de la noche a la maana.

 La actividad invertasa fue probada por el mtodo de Yamada et al. (2006). La mezcla de ensaye consisti en una parte alcuota de extracto de dializado, la sacarosa de 100 mm y el buffer de 100 mm de acetato (pH 5.0) para el cido invertasa o 100 mm Tris-HCl el buffer (pH 7.5) para invertasa neutro. La cantidad de glucosa producida en la mezcla de ensayo fue medida por usando la Glucosa CII-la Prueba (Wako Chemicallndustries Puro Ltd., Osaka, Japn). Los azcares solubles fueron extrados y cada azcar fue medido como descrito detalladamente por Ichimura et al. (2005). Los azcares solubles fueron separados usando un sistema de cromatografa lquido de alta presin (655A-ll LC; Hitachi HighTechnologies Corporacin, Tokio, Japn) equipado con un detector de ndice de refraccin, un Azcar Shodex SP0810 columna (Showa Denko Compaa, Tokio, Japn), y agua de milliQ (Millipore, Milford, MA, EE.UU.) como el solvente de portador en 80C.

Resultados y discusin
El peso fresco de cada grupo de cinco ptalos externos fue medido poco despus el muestreo (Fig. l B). Los ptalos de brotes conectados crecieron notablemente de ST I para ST II y aumentando su peso fresco en 1.0 g/ cinco ptalos (n=9) en ST I a 2.6 g/ cinco ptalos (n=7) en ST III. Los brotes de ptalos tratados por sacarosa, que fueron separados en ST I aumentaron su peso fresco directamente durante crecimiento de ptalo, pero su peso fresco en ST III (1.8 g/ cinco ptalos, n = 9), era inferior que para conectados de flores .

 Los spalos de la flor tratados con agua separada, pero los ptalos no se ampliaron o del capullo de la flor es un proceso de crecimiento de ptalo irreversible y se doblaron atrs, y el peso fresco de los ptalos no aument (1.0 g/cinco ptalos, n = 9). La apertura reflexin, en la cual clulas existentes se amplan y el aumento de pesos fresco y seco. (Faragher et al., 1984; Red y Evans, 1986; Evans y Reid, 1988). Para la extensin de las clulas, el potencial osmtico es importante para promover la afluencia de agua. As, la acumulacin de azcar en clulas podra ser un mecanismo para reducir el potencial de agua en el ptalo y promueven la respuesta de agua. La hidrlisis de almidn es tambin importante para promover el crecimiento del ptalo de rosa, y se sugiere que la abertura de la flor puede ser debido a una combinacin de respuesta de azcar y degradacin de varios polisacridos.

Fig. 2. Niveles de azucares solubles durante el crecimiento de ptalo. Sacarosa, glucosa, fructuosa y myo inositol fueron medidos en ST I (Columna abierta) y ST III (columna cerrada) en conectado, tratamiento de flores con sacarosa y tratamiento de flores con agua. Los valores son bajos de tres replicas S.E. .n.d.: no detectado, (*) azucares solubles en tratamiento de flores con agua son medidos en ST III.

 Los azcares solubles fueron medidos en cada etapa de conectado, tratamiento de flores con sacarosa y tratamiento de flores con agua. (Fig. 2). Los principales carbohidratos solubles en ptalos de rosa son fructuosa, glucosa, sacarosa y myo-inositol, con xilosa y -metilglucopirnoside como menor azucares. Los niveles de azucares solubles, excepto por myoinositol, aumentaron durante el crecimiento de ptalos en conectado de flores: particularmente glucosa y fructuosa, aumentaron acerca de 2.6 y 2.7 veces respectivamente, en ST III comparado con ST I. La fructuosa en separdos de brotes tratadas con sacarosa aumentaron acerca de 1.9 veces por ST III comparado con ST I, pero la sacarosa y la glucosa aumentaron slo un poco

 As, los niveles de hexosa en ST III en tratamiento de flores con sacarosa (93.0 mmol/g FW) fueron bajos ((P < 0.05) que en conectado de flores (142.2 mmollg FW), aunque no hubiera ninguna diferencia estadstica por niveles de fructuosa en ST III, entre tratamiento de flores con sacarosa y conectado de flores Brotes separados trataron con el agua no abri hasta ST III y los azcares solubles son medidos solo en ST I y II. Sacarosa glucosa y myo-inositol disminuyeron notablemente y fructuosa disminuyo un poco durante el tratamiento con agua.

Fig. 3. Formas en actividades de invertasa durante el crecimiento del ptalo. Acido invertasa insoluble (panel superior) acido invertasa (panel medio) soluble y neutral invertasa soluble (panel inferior) fueron medidos en ST I (columna abierta) y ST III (columna cerrada) por conectado, tratamiento de flores con sacarosa y tratamiento de flores con agua. Los valores son bajos en 5 replicas S.E.

 Las actividades de acido insoluble, acido soluble y

neutral soluble invertasas fueron medidos en ST I y II (fig 3). En todas las flores, la actividad del neutral soluble invertasa fue detectado solo en bajos niveles por todas las etapas de crecimiento. La actividad de conectados por invertasas aumento notablemente en ST II (6.0, 8.0 y 2.8 veces para insolubles, acido soluble y neutral invertasa soluble respectivamente) y permanecieron en altos niveles en ST III (datos no presentados) sin embargos en brotes separados con sacarosa o agua, todos las actividades invertasas disminuyeron a un bajo nivel, bastante opuesto al de inevertasas en brotes conectados. Ah fue una diferencia significativa (p<0.01) por acido invertasas en ST III entre separado de flores y conectado de flores.

 En este estudio, la sacarosa trasladada de hojas a ptalos parece ser metabolizada por invertasas porque la actividad de la sacarosa sintasa no fue separada en nuestros experimentos (datos no presentados). Como solo un bajo nivel de invertasa fue separada, la principal actividad invertasa pareciera ser debido al acido invertasa En nuestros experimentos, flores separadas colocadas en el agua no abrieron, y los niveles de azcares solubles, sobre todo la sacarosa y la glucosa, en los ptalos eran bajos. Este resultado apoy el punto de vista que el suministro de sacarosa es importante para la apertura de la flor. Sin embargo, incluso cuando la sacarosa fue suministrada, los ptalos no se pusieron tan grandes como aquellos que permanecieron conectados (el 69 % en una base de peso fresco).

 Este parecido es debido a lo bajos niveles de hexosa en tratamiento de ptalos con sacarosa. La glucosa en el tratamiento de flores con sacarosa era en particular inferior que en flores conectadas. Esta diferencia en la cantidad de hexosa pareci ser debido a los bajos actividades invertasas en flores separadas en ST II. Las actividades invertasas en conectado de flores aumentaron notablemente durante la abertura de la flor. El Acido invertasa est estrechamente correlacionada con la proporcin de sacarosa a hexosa en rganos como sumidero de frutos de tomate, tubrculos de patata y races de zanahoria.

 En este estudio, las actividades de ambos cidos invertasas soluble e insoluble no aumento, independientemente del suministro de sacarosa. Una vez que las flores se haban trasladado, la actividad invertasa no aument ms. Las rosas cortadas, aunque con la sacarosa, no podra crecer y abrir tanto como en conectado de flores. La actividad invertasa parece limitar el crecimiento de ptalos y las flores de apertura. En conjunto, nuestros resultados indican que un mtodo para aumentar la actividad invertasa despus de la cosecha podra ser importante para la calidad de algunos cultivares de rosa.