ENTEROBACTERIAS

P.Q.C. MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

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Caractersticas Generales:

Las Enterobacteriaceae habitan en:

Distribuidas en suelo, agua, alimentos. Flora normal del intestino de humanos y animales.

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 MORFOLGICAS Y TINTORIALES
Bacilos o cocobacilos cortos gram negativos, no esporulados, mtiles (flagelos pertricos) o no, capsulados o no, pilis.

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 BIOQUMICAS
Anaerobios facultativos, catalasa positiva, (excepto Shigella dysenteriae Tipo 1) oxidasa negativa, fermentan la glucosa, reducen nitratos a nitritos.

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Reaccin de catalasa
Esta prueba detecta la presencia de citocromooxidasas La prueba se hace con perxido de hidrgeno (H2O2) al 3% sobre un portaobjetos. La produccin inmediata y abundante de burbujas indica la conversin del H202 en agua y oxgeno gaseoso. La prueba de la catalasa debe realizarse a partir de un medio que no contenga sangre porque los eritrocitos pueden producir una reaccin de catalasa dbil.
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Prueba de la catalasa

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Reaccin de citocromo oxidasa

Los

citocromo son hemoproteinas que contienen hierro y actuan como ltimo eslabn de la cadena de la respiracin aerobia ; transfireren electrones de Hidrgeno al Oxgeno, con la formacin de agua. El sistema citocromo se encuentra presente en microorganismos aerobios, microaeroflicos y en algunos anaerobios facultativos, pero nunca en anaerobios estrictos.

Dimetil-p-fenilendiamina al 1%

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 Los modos de transmisin a los seres humanos son:

Infecciones Nosocomiales
( E. coli)

Ingesta de alimentos o agua.

Salmonella, Shigella, Yersinia enterocolitica.
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Citrobacter. Enterobacter. Klebsiella.

Patgenos oportunistas.

Proteus.

Enterobacteriaceae

Serratia

Patgenos evidentes.

Salmonella tiphy (fiebre tifoidea.)

Shigella (Disentera). Y. Pestis (peste negro).

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MEDIOS DE CULTIVO
1. Medios no selectivos: agar sangre 2. Medios selectivos-diferenciales: agar McConkey, agar EMB, SS agar, agar XLD.

McConkey: colonias rosadas (fermentan lactosa) y colonias transparentes (no fermentan lactosa). Agar EMB: colonias azules (fermentan lactosa) y colonias transparentes (no fermentan lactosa).

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Mac Conkey
Gram positivas ven inhibido - sales biliares y cristal violeta. Fermenten la lactosa liberarn productos cidos que producirn un cambio de pH que se detectar gracias al rojo neutro.

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Aspectos de las colonias.

En agar sangre y agar chocolate las colonias son:
Grandes. Gris. Lisas.

Klebsiella o Enterobacter.
Mucoides (polisacridos).

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 E. Coli ( Beta hemoltica). P. mirabilis. P. penneri. P. Vulgaris.

Motilidad.

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIN
1. Pruebas bioqumicas

2. Pruebas serolgicas
3. Pruebas de biologa molecular

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Pruebas bioqumicas
Estudia el metabolismo de la bacteria
Estudio basado en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano Se detecta a travs de medios de cultivo especiales
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Los medios de cultivo generalmente estn formados por: El sustrato sobre los cuales actan las enzimas Un indicador que puede detectar la disminucin del sustrato o la presencia de un producto metablico especifico
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La medicin de las diferentes caractersticas metablicas de un microorganismo permiten identificar la especie

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Pruebas bioqumicas
Metabolismo fermentativo
Mide la capacidad del microorganismo para utilizar los hidratos de carbono Microorganismo acta sobre los carbohidratos y acidifica el medio El indicador presente vira

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIN BIOQUMICAS Prueba TSI (triple azcar hierro)

Contiene lactosa 10 g, sacarosa 10 g y glucosa 1 g. Resultados: Superficie inclinada/fondo: - cida/cida: Bacterias fermentadoras de lactosa: E. coli, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, etc - alcalina/cida: Bacterias no fermentadoras de lactosa. Salmonella (H2S+), Shigella (H2S -), Yersinia.

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TSI

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TSI

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS
Mide la capacidad de un organismo para utilizar el citrato como nica fuente de carbono Citrato compuesto orgnico constituye uno de los metabolitos del ciclo de Klebs Las bacterias al utilizar citrato extraen nitrgeno de la sal de amonio con produccin de amoniaco que hace vire el indicador
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CITRATO DE SIMMONS
Para esta prueba se utiliza el agar de citrato de Simmons que contiene citrato de sodio y azul de timol como indicador. La nica fuente de carbono en este medio es el citrato. Si la reaccin es positiva el indicador vira a azul. En la reaccin negativa los microorganismos no crecen y el medio conserva su color verde
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CITRATO DE SIMMONS El medio tambin contiene sales de amonio que la bacteria usa como fuentes de nitrgeno

Fosfato de amonio amoniaco alcalinizacin del medio

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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Descarboxilasas de aminocidos (arginina, lisina, ornitina

Los medios contienen: Peptona Extracto de carne Glucosa Aminocido Purpura de bromocresol

MEDIO DE LIA

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Descarboxilasas de aminocidos lisina, ornitina

Los aminacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en aminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador (prpura del bromocresol) vira a violeta
R CH - NH2 - COOH Aminocido R- CH2 - NH2 + CO2 Amina Dixido de carbono pH alcalino

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Descarboxilacin lisina (LIA y MIO)

Ejemplo:

Aminocido
Lisina

amina + dixido de carbono

lisina descarboxilasa

cadaverina

L- Ornitina

Ornitina descarboxilasa

Putrescina + CO2

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Descarboxilacin lisina (LIA)

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Descarboxilacin lisina (LIA)

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MEDIO DE MIO
Prueba que se utiliza para investigar:

Motilidad (M)
INDOL

Produccin de Indol (I) Descarboxilacin Ornitina.

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INDOL

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Indol
El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa . La prueba de indol est basada cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo.

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Medio de MIO

(p-dimetilaminobenzaldehdo)

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INDOL

Prueba positiva

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INDOL

Prueba negativa
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E. coli

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Escherichia coli.
Mac Conkey.
Colonias Planas. Colonias secas. Colonias Rosadas. (LF)

TSI

LIA

K/A
INDOL (+)

k/A A/A

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Escherichia coli Clasificacin de las cepas productoras de diarrea 1. E. coli enterotoxignica 2. E. coli enteropatgena 3. E. coli enterohemorrgica 4. E. coli enteroinvasiva 5. E. coli enteroagregante
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E. coli

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Klebsiella pneumoniae

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Klebsiella.
Mac Conkey
LF. Mucoides. (polisacridos).

Indicaciones de laboratorio:
Lysine + Citrato + Indol +/+ TSI (con gas) No-motile Ornithine

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Klebsiella pneumoniae Cpsula

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Klebsiella pneumoniae

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Proteus

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Proteus.
Gnero que contiene varias especies, de las cuales dos tienen importancia mdica:
P. mirabais. INDOL (-) P. vulgaris. INDOL (+)

Mac Conkey.
NFL. Swarning. Olor a podrido.
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Enterobacter

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Enterobacter.
Mac Conkey.
LF. Pueden ser Mucoides. MIO: *MOVILIDAD (+) *INDOL: (+) E. agglomeras. *INDOL: (-) E. aerogenas (LIA +), E. cloacae (LIA-).
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Enterobacter

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Shigella

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Shigella

S. dysenteriae S. flexneri S. sonnei S. boydii

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Shigella
Mac Conkey:
NLF.

TSI: alcalina/cida, H2S negativo. LIA: K/A o A/A.

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Crecimiento de Shigella en medio MacConkey

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Salmonella

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Salmonella Clasificacin S. enteritidis S. typhimurium S. typhi S. paratyphi A S. paratyphi B (Salmonella schottmuelleri) S. typhi C (Salmonella hirschfeldii)
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Salmonella enteritidis
Mac Conkey: NFL. TSI: alcalina/cida y H2S + S. typhimurium. INDOL (-)

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SALMONELLA SSA

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Salmonella XLD

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Bibliografa:
MANUAL DE TCNICAS EN MICROBIOLOGA CLNICA. M. V. lvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA. 1990. DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO CLNICOS POR EL LABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-SanfordDavidsohn. Tomo I y II. 8 Edicin. Salvat Editores. 1988. DIAGNSTICO MICROBIOLGICO. TEXTO Y ATLAS COLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. Editorial Mdica Panamericana. 2 Reimpresin. 1990.

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