Avant-propos sur les CD

On dsigne souvent les protines cellulaires (notamment membranaires) sous le terme de CDn (CD1, CD2, CD3, CD4, etc.) Pourquoi?

Les anticorps monoclonaux

Injection des antignes (ou des mlanges dantignes) contre lesquels on veut gnrer des anticorps

Les anticorps monoclonaux

Prlvement du sang de la souris et fusion des lymphocytes B avec des cellules immortalises : obtention dhybridomes

Les anticorps monoclonaux

Screening des diffrents clones obtenus avec les cellules utilises pour limmunisation

Quest ce quun CD?

CD : cluster of designation
nom initialement donn lensemble des anticorps monoclonaux dirigs contre les pitopes ou les antignes dune mme protine prsente la surface cellulaire par extension, le CDn dsigne la protine elle-mme; les anticorps tant dnomms anti-CDn

Utilisation des anticorps monoclonaux pour caratriser les sous-populations de leukocytes

Inoculation de leukocytes humains des souris Gnration danticorps monoclonaux dirigs contre les protines de membrane Utilisation conjointe du westernblot et du Facs pour dfinir
La nature de la protine reconnue Les sous-populations sur laquelle elle est prsente

Westerblot
Cytofluorimtrie

Echange dinformations et dhybridomes lors de workshops

Des anticorps monoclonaux diffrents, produits dans des labos diffrents reconnaissent dans certains cas la mme protine On dit alors que ces diffrents anticorps appartiennent au mme groupe (cluster) de diffrenciation (CD) Chaque workshop dfinit ainsi les CD par ordre de description et tablit pour chaque CD, les proprits de la protine reconnue et les cellules sur lesquelles on la trouve

Les anticorps monoclonaux

Les clones A3 et B1 reconnaissent la mme protine : cest le mme CD

De lanticorps monoclonal la protine

Au fur et mesure des workshops, on a utilis le terme CD pour dsigner les protines membranaires elles-mmes et donn le nom danticorps anti-CD aux monoclonaux correspondants

Immunit naturelle

Les barrires

Les dfenses de barrire

La peau et le sbum (rle antibactrien des acides gras) Le mucus et lescalator muco-ciliaire Les flores saprophytes (intestin, vagin, etc.)
Colicine

Les milieux acides Protines et peptides antimicrobiens

Les protines et peptides antimicrobiens

Produits par de multiples types cellulaires
Glandes sous-muqueuses Cellules pithliales Cellules spcialises de limmunit naturelle
Polynuclaires neutrophiles Macrophages

Selon les cas, intervention extracellulaire, intracellulaire (bactries phagocytes) ou les deux

Les protines et peptides antimicrobiens

Espoir thrapeutique (cf. rsistance aux antibiotiques)

Les protines et peptides antimicrobiens

Enzymes : ex. lysozyme (250-500 mg/ml dans les scrtions nasales, salive, larmes) Lactoferrine (chlation du fer) Dfensines (feuillets b)
b dfensines (HBD-1 et HBD-2)
Peau et tractus respiratoire

a dfensines (=cryptidines)
Cellules de Paneth de lintestin

Cathlicidines (hlices a) Protines A et D du surfactant (opsonines primitives)

Les protines et peptides antimicrobiens

Rle essentiel dans les dfenses de premire ligne Activit des dfensines et des cathlicidines effondre dans les poumons des enfants mucoviscidosiques
Inhibition frquente par hautes concentrations en sel (cf. mucoviscidose)
Nouvelles approches thrapeutiques agissant sur la concentration saline du mucus

Autres mcanismes?

La plupart des cellules de lorganisme participent limmunit naturelle

La plupart des cellules sont capables de percevoir la prsence dun microorganisme pathogne En rponse cette perception, elles attirent sur place des cellules plus spcialises de limmunit naturelle (phagocytes)

Systmes de perception des microorganismes pathognes

Signatures (strotypes) molculaires sur les microbes : PAMP (pathogen associated molecular patterns)
Ne sont pas prsents chez lhte Sont partags par de grands groupes dagents pathognes Sont relativement peu variables ( la diffrences de lhmagglutinine et de la neuraminidase p.ex.)

Exemples de PAMP (signatures)

Flagelline des flagelles bactriens Peptidoglycan des bactries G+ Lipopolysaccharide (endotoxine) des bactries G RNA double brin DNA non mthyl

Rcepteurs aux PAMP = PRR

Pattern recognition receptors
Trois types
senseurs membranaires ou intracellulaires
Rle dans la reconnaissance du microbe et le dclenchement de la rponse immunitaire (rcepteur dalarme) ex. Rcepteurs TOLL (TLR) Sont prsents sur la plupart des cellules de lorganisme

effecteurs membranaires
Dclenchent la phagocytose du microbe Uniquement prsent sur les cellules spcialises de limmunit naturelle

Solubles
Interagissent directement avec le microbe

Rcepteurs de la famille Toll

Les lipopolysaccharides (LPS) des bactries Gram-, les rcepteurs de la famille Toll et le CD14

Lipopolysaccharide (LPS) = endotoxine

Composant du feuillet externe de la membrane des bactries Gram Lipide A (responsable de la toxicit) + polysaccharides Responsable du choc septique induit par les bactries Gram Choc septique : phnomne actif li la rponse de limmunit naturelle la toxine

Protines Toll
Protines identifies initialement chez les insectes (drosophiles) et impliques la fois dans le dveloppement et dans la rsistance certaines infections Equivalent des protines Toll chez les mammifres (toll like receptors) Les souris TLR4 KO ne font jamais de choc septique aprs injection de LPS!

CD14 marqueur des cellules phagocytaires

Le Toll like receptor 4 appartient au rcepteur du LPS

Intrt ventuel bloquer les signaux induits par le LPS chez les patients en choc septique

TLR et activation des phagocytes

le facteur NF-kb
facteur transcriptionnel pivot des rponses phagocytaires

Famille de TLR
TLR-2 : protoglycans des Gram+ TLR-3 : dsRNA TLR-4 : LPS TLR-5 : flagelline TLR-7 : ssRNA viral TLR-8 : ssRNA viral TLR-9 : CpG non mthyls du DNA Etc.

Les phagocytes
1. Polynuclaires neutrophiles (et dans une moindre mesure les polynuclaires osinophiles) 2. Monocytes & macrophages 3. Cellules dendritiques

Hmatopose

1. Cellules pluripotentes Enorme capacit dautorenouvellement et de diffrenciation

1. Cellules pluripotentes 2. Cellule souche mylode (par opposition lymphode)

1. Cellule pluripotente 2. Cellule souche mylode (par opposition lymphode) 3. Prognitrice commune aux neutrophiles et aux cellules mononucles (mono/macro et cellules dendritiques)

1. Cellule pluripotente 2. Cellule souche mylode (par opposition lymphode) 3. Prognitrice commune aux neutrophiles et aux cellules mononucles (mono/macro et cellules dendritiques) 4. Rle des cytokines dans la diffrenciation : GMCSF et G-CSF

Les polynuclaires ou granulocytes

un seul noyau mais polylob (do le nom polynuclaire) 60 70% des leucocytes sanguins turnover trs lev (dure de vie courte) classification selon le type de granules
Leucocytes = globules blancs (par opposition au hmaties) =lymphocytes+granulocytes+monocytes

Les polynuclaires ou granulocytes

un seul noyau mais polylob (do le nom polynuclaire) 60 70% des leucocytes sanguins turnover trs lev (dure de vie courte) classification selon le type de granules
Ligne cellulaire trs sensible lors des traitements de chimiothrapie chez les cancreux ou leucmiques

Polynuclaires neutrophiles
Collagnase Lactoferrine Lysozyme

Lysozyme Peroxydase autres enzymes...

Polynuclaires neutrophiles
ou neutrophiles , cest le type de polynuclaires le plus important en nombre et en fonction 1re ligne de dfense contre de nombreux types de germes tuent les microbes intracellulaires de faon plus efficace que les macrophages

Trois types cellules cellulaires souvent associs en pathologie

Multiples mdiateurs inflammatoires Intervention dans les phnomnes allergiques et inflammatoires Polynuclaires osinophiles, basophiles et mastocytes

Polynuclaires osinophiles

Rle dans la dfense anti-parasitaire Multiples mdiateurs de linflammation

Eosinophiles et inflammation

Polynuclaires basophiles

Mastocytes

Cellules associes aux muqueuses, aux pithliums et aux endothliums (notamment veinules postcapillaires) Participent la premire ligne de dfense directement (p.ex. cathlicidines) soit par attraction dautres phagocytes (chimiotactisme)

Monocytes et macrophages

Monocytes et macrophages
Sang

Tissus

Macrophages
Poumon : macrophages alvolaires Tissus conjonctifs : histiocytes Rein : cellules msangiales Foie : cellules de Kpfer Cerveau : microglie Os : ostoclastes

Les cellules dendritiques

Les cellules dendritiques

Diffrents dnominations selon le site et la ltat de diffrenciation/activation
peau et muqueuses : cellules de Langerhans organes : cellules dendritiques interstitielles organes lymphodes : cellules dendritiques interdigitantes sang : cellules dendritiques circulantes (veiled cells)

Cellules dendritiques
Patrouillent dans les tissus Deux fonctions diffrentes selon le site

Phagocytes et prsentation dantigne

Polynuclaires neutrophiles, macrophages et cellules dendritiques sont trois types de phagocytes Les cellules dendritiques et les macrophages sont CMH II pas les polynuclaires neutrophiles donc pas de rle des neutrophiles dans la prsentation des antignes aux lymphocytes T CD4 Les cellules dendritiques sont les plus efficaces cellules prsentatrices dantignes aux lymphocytes T CD4+ Ne confondez pas cellules dendritiques et cellules folliculaires dendritiques (CMH II ngatives et non prsentatrices dantignes sensu stricto)

Macrophages et cellules dendritiques possdent la protine CD4

Rle? La prsence de la molcule CD4 rend les macrophages et les cellules dendritiques susceptibles linfection par le VIH

Les rcepteurs des phagocytes

Trois grands types de rcepteurs
rcepteurs pour des produits microbiens rcepteurs pour des facteurs humoraux ou cellulaires qui facilitent la phagocytose rcepteurs pour des ligands qui activent ou orientent les dplacements des cellules phagocytaires vers les sites inflammatoires

Immunit non adaptative

Reconnaissance de PAMP Pathogen Associated Molecular Patterns Structures molculaires hautement conserves et prsentes dans de larges groupes de microorganismes = strotypes molculaires associs aux pathognes

Rcepteurs aux produits microbiens (pattern recognition receptors PRP)

Le rcepteur au mannose (MR ou M/FR) et sa famille

Le rcepteur au mannose et sa famille

Domaine de type lectine

(site de la liaison au rsidus mannosyl et fucosyl)

Lectines
protines ou glycoprotines capable de se lier certains rsidus glucidiques origine non immunitaire capable comme un anticorps dagglutiner ou de prcipiter des cellules ou des glycoconjugus isoles initialement chez des vgtaux mais molcules voisines (lectin-like) prsentes chez les bactries et les animaux

Le rcepteur au mannose et sa famille

Domaine de type lectine

(site de la liaison au rsidus mannosyl et fucosyl)

Liaison de nombreux microorganismes Gram-, Gram+, mycobactries, champignons, parasites

Rcepteur f-Met-Leu-Phe
Rcepteurs pour peptides N-formyls de nombreuses bactries Rcepteur chimiotactique

Rcepteurs aux PAMP avec proprits diffrentes

Rcepteur au mannose : phagocytose Rcepteurs Toll : signal dactivation Rcepteur FMLP : chimiotactisme

Rcepteurs pour des facteurs humoraux de la rponse immunitaire

Opsonines-opsonisation
opsonein : je prpare le repas

Facilitation de la phagocytose des microorganismes par des produits humoraux de la rponse immunitaire (immunoglobulines ou fragments du complment activ)

Rcepteurs pour des facteurs humoraux de la rponse immunitaire

Rcepteurs pour lextrmit Fc (cristallisable ou constant) des immunoglobulines

Portion Fc

Rcepteurs pour des facteurs humoraux de la rponse immunitaire

Rcepteurs pour lextrmit Fc des immunoglobulines Selon la classe dimmunoglobuline reconnue (IgG, ou IgE), les rcepteurs (FcgR, FceR) ont des structures et des distributions cellulaires diffrentes

Rcepteurs pour des facteurs humoraux de la rponse immunitaire

Rcepeurs pour des fragments du complment activ
CR1 CR3

Le processus de phagocytose
Quatre tapes
chmotactisme adhsion phagocytose (sensu stricto) microbicidie
oxydative non-oxydative

Phagocytose
Phnomne actif et consommateur dnergie Efficacit accrue par lopsonisation

Microbicidie (ou bactricidie) intracellulaire

Deux mcanismes diffrents
phnomnes oxydatifs
dpend de la production dintermdiaires ractifs de loxygne qui ont un rle microbicide phnomne inductible : explosion respiratoire

phnomnes non oxydatifs

dpend de la production de peptides antibactriens

Microbicidie oxydative
Myloproxydase NO synthase NADPH oxydase

Microbicidie oxydative
Dpendance du NADPH fourni par le shunt des pentoses

Microbicidie oxydative
NO : nombreuses fonctions indpendantes de son rle microbicide

Microbicidie oxydative
Phnomnes qui consomment beaucoup dnergie et sont donc sensibles aux maladies o lapport cellulaire en nergie est perturb : diabte mal quilibr Dans certaines maladies gntiques, une des trois enzymes est dficiente : les germes prolifrent lintrieur des phagocytes, ce sont les maladies granulomateuses chroniques

Microbicidie oxydative
Phnomnes qui consomment beaucoup dnergie et sont donc sensibles aux maladies o lapport cellulaire en nergie est perturb : diabte mal quilibr Dans certaines maladies gntiques, une des trois enzymes est dficiente : les germes prolifrent lintrieur des phagocytes, ce sont les maladies granulomateuses chroniques

Microbicidie oxydative
A ltat de repos, les macrophages et monocytes sont gnralement moins efficaces que les polynuclaires neutrophiles pour la microbicidie oxydative et dpendent troitement de laide des lymphocytes T

Microbicidie non oxydative

existent aussi souvent dans les scrtions
Enzymes microbicides
Hydrolases : lysozyme (muramidase) : destruction de la paroi bactrienne des G+; glycosidases, lactoferrine, lastase, cathepsines

Protines cationiques : protines antibiotiques

dfensines : petites molcules (29-35 aa) possdant trois ponts disulfures et dont lactivit est inhibe quand la concentration en sels (Cl-) est trop leve

Exocytose
processus alternatif mis en place par les macrophages et les polynuclaires neutrophiles quand la phagocytose est impossible
moins slective moins efficace

processus principal dautres types cellulaires comme les polynuclaires osinophiles et basophiles

Polynuclaires osinophiles

Polynuclaires osinophiles

IgE

FceR

Dgranulation : produits activit antiparasitaire

Cytotoxicit ( mdiation cellulaire)

Lymphocytes T cytotoxiques CD8+ Cellules tueuses naturelles (natural killer ou NK) Cellules K et phnomne ADCC

Lymphocyte T cytotoxique (CD8+)

Polarisation et exocytose dpendent dun accroissement du [Ca++] i dans le lympho. cytotoxique

Deux constituants dans les granules

Perforines
forment des trous dans la membrane de la cellule cible (comme le complment)

Srine Protases (granzymes)

Perforines des lymphocytes T cytotoxiques

Deux voies dinduction de lapoptose de la cellule cible

Deux voies dinduction de lapoptose de la cellule cible

A la diffrence des autres lymphocytes les lymphocytes T cytotoxiques activs expriment le Fas ligand

Lymphocyte T cytotoxique
1. Il entre en contact avec sa cible 2. La reconnaissance spcifique de lantigne + MHC I dclenche un accroissement du calcium intracellulaire 3. Les granules se polarisent puis se vident linterface avec la cellule cible 4. Les monomres de perforine se polymrisent et forment des trous dans la cellule cible 5. Les srines protases (granzymes) entrent par ces trous et en synergie avec linteractions Fas/Fas ligand dclenchent lapoptose de la cellule cible

Lymphocyte T cytotoxique
Le lymphocyte cytotoxique ne tue pas la cellule cible, il la contraint surtout se suicider...

Les cellules tueuses naturelles (NK)

Les cellules tueuses naturelles

Toujours prtes : pas besoin de sensibilisation, ni de diffrenciation pralables... Mcanismes lytiques (perforines et granzymes) les mmes que ceux des lymphocytes T cytotoxiques

Cellules NK
Cellules de la ligne lymphode mais qui ne sont ni B (pas dIg de membrane ou cytoplasmique) ni T (pas de TCR)

Quel type de cellules reconnaissent les NK?

Cellules infectes Cellules tumorales Parasites

Comment a marche?

Base molculaire de la discrimination par les cellules NK

comment reconnatre une cellule transforme ou infecte par un virus quand on na pas de TCR?
premire piste : la cellule NK reconnat une sorte de PAMP la surface de ces cellules...
20 ans de recherche, jamais rien trouv de tel!

Base molculaire de la discrimination par les cellules NK

comment reconnatre une cellule transforme ou infecte par un virus quand on na pas de TCR?
deuxime piste : la cellule NK peroit labsence dune structure normalement prsente sur les cellules de lorganisme

Les rcepteurs KIR (Killer Inhibitory Receptors)

La perte des molcules MHC est un moyen frquemment utilis par les cellules tumorales ou par les cellules infectes par des virus pour chapper au contrle des lymphocytes T cytotoxiques CD8+ ...

cela rend les cellules en question plus sensibles lactivit des NK. Lvolution a conserv les NK aux cts des lymphocytes T cytotoxiques pour contrecarrer les mcanismes dchappement des virus...

 Cellules K et ADCC
ADCC = antibody dependent cell-mediated cytotoxicity

 Cellules K et ADCC
ADCC = antibody dependent cell-mediated cytotoxicity Les cellules K correspondent une fonction particulire que peuvent exercer plusieurs types cellulaires (NK, macrophages, polynuclaires) Les cellules K ne sont pas une ligne en soi

Conclusion
Immunit naturelle
Premire ligne de dfense contre les agents infectieux Rle fondamental dans linitiation des rponses adaptatives Rponses peu cibles, strotypes
Inflammation

Inflammation
Linflammation est souvent le reflet dune activation de limmunit naturelle