ADHESIN DE PLASMODIUM FALCIPARUM EN ERITROCITOS DE CLULAS HUMANAS INFECTADAS: MECANISMOS MOLECULARES E IMPLICACIONES TERAPUTICAS

Espino Macfarland Blanca Lydia

Minaya Pablos Germn Francisco

Marzo, 2010

INTRODUCCIN

El paludismo es causado por un parsito denominado Plasmodium que se transmite a travs de la picadura de mosquitos infectados.

La malaria mata a ms de un milln de personas al ao, la mayora de ellas en el frica subsahariana. En Amrica, el nmero de casos ha bajado en un 20% y el nmero de defunciones en un 70% desde 2000, cuando la Regin aument sus esfuerzos de control como parte de la iniciativa "Hacer retroceder el paludismo", de la Organizacin panamericana de la salud (OPS) y la Organizacin Mundial de la Salud (OMS).

El parsito tiene un complejo ciclo de vida, incluyendo hospederos tanto humanos como mosquitos.
mosquito Anopheles esporozoito migran al torrente sanguneo Invasin de hepatocitos

8-10 das
merozotos liberados

invaden a eritrocitos
trofozoto Pigmento caracterstico gametoctos

Las caractersticas clnicas de la malaria se producen durante la etapa de la infeccin de la sangre.

Sntomas clnicos como: Fiebre alta alteracin de la conciencia dificultad respiratoria anemia grave fallo multiorgnico coma.

Estas manifestaciones clnicas de la malaria severa se cree que ocurren debido a una combinacin de una carga parasitaria alta y el secuestro de parejas de eritrocitos infectados por P. falciparum. La masa de eritrocitos secuestrados conduce a: Obstruccin microvascular Perturbaciones metablicas, como la acidosis. Liberacin de mediadores inflamatorios Se pueden combinar para causar graves consecuencias: la enfermedad y la muerte del husped humano.

La importancia de adhesin de Plasmodium falciparum

El secuestro se produce por la expresin de adhesinas q se unen a receptores de clulas humanas. Tres grandes tipos de adhesin se han descrito:

(1) citoadherencia a las clulas endoteliales (a menudo denominado simplemente como citoadherencia o citoadhesin) (2) con rosetas de eritrocitos infectados (3) las interacciones con las plaquetas que puede conducir a agrupamiento de las entidades independientes in vitro (las plaquetas mediada por aglutinacin)

(b) Citoadherencia de eritrocitos infectados cultivadas in vitro de clulas endoteliales, visualizado por microscopa de luz despus de la tincin Giemsa. (c) Rosetas detectado in vitro Cultivo de P. falciparum, observada despus de la preparacin de frotis teido con Giemsa y observadas por microscopa de luz. (d) Plaquetas mediada por grupos de eritrocitos infectados en forma despus de co-incubacin in vitro de cultivos de parsitos con las plaquetas, observada por los frotis teido con Giemsa microscopa de luz.

Los fenotipos de adhesin son importantes en la patognesis de la malaria grave?

Un requisito previo importante para el desarrollo de los nuevos tratamientos es una comprensin de cmo diferentes tipos de adhesin contribuyen a la patognesis de la malaria.

Los investigadores tienen por lo tanto utilizan dos enfoques para investigar los fenotipos de adhesin de los parsitos en relacin con la enfermedad de gravedad. El primero compara las propiedades de unin de los aislamientos derivados de muestras de sangre de pacientes con diferentes formas clnicas de la malaria. El objetivo de estos estudios es identificar el fenotipo de adhesin que ocurren con ms alta frecuencia en el parasito aislado de pacientes con paludismo grave. Un segundo enfoque ha sido para investigar si los polimorfismos de los receptores que reducen la adherencia del parsito confieren proteccin contra la malaria.

Mecanismos moleculares de adhesin de P. falciparum

En 1995, se llav a cabo la clonacin de los genes var que codifican las variante de antgeno de superficie de la familia P. falciparum la protena de la membrana eritrocitaria 1 (PfEMP1) coloc las bases esenciales que se prestan para la investigacin sobre la base molecular de la adherencia en la malaria.

Otros derivados de antgenos tambin estn presentes en la superficie, tales como RIFINs y STEVORs, y tienen la posibilidad de participar en la adhesin; Sin embargo, la funcin de estas protenas sigue siendo desconocido. El papel de la PfEMP1 en diferentes tipos de adhesin se describen a continuacin, y la estructura, funciones y la diversidad de la familia de genes var se describen en la ms detalle en varios estudios recientes.

La conmutacin de la expresin gnica var puede ocurrir en cada nueva etapa del ciclo asexual de sangre, dando lugar a la variacin antignica de la malaria
Un individuo podra expresar una virulencia asociada a fenotipo de adhesin, como la de las rosetas, pero despus de la transmisin a un nuevo hospedero puede expresar una PfEMP1 predominante de diferente variante con un fenotipo de adhesin menos perjudicial.

Mecanismos moleculares de la infeccin

P. falciparum se ha demostrado que tiene el potencial de la unin a una diversa gama de receptores endoteliales. Slo el CD36 y la molcula de adhesin intracelular 1 (ICAM1) han sido estudiados en detalle.

Cada receptor se considera por separado a continuacin, sin embargo, es importante recordar que, in vivo, los receptores podran combinarse para promover la adhesin a las clulas endoteliales.

ICAM1
Es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas expresadas en las clulas endoteliales y los leucocitos. P-Selectina Es una glicoprotena que se expresa en las plaquetas activadas y las clulas endoteliales. Se cree que tiene un papel importante, porque PfEMP1 puede unirse a la P-selectina in vitro.

PECAM 1 Se expresa ampliamente en las clulas endoteliales, los monocitos, plaquetas y granulocitos.

E- selectina Es una glicoprotena que es expresa en las clulas endoteliales en los sitios de la inflamacin, no se ha encontrado ligando del parsito y no se asocia a enfermedad grave.

Efectos de la citoadherencia en endotelial

Existe una creciente evidencia de que la adhesin al endotelio tiene efectos adversos sobre la funcin celular. Apoptosis estrs isqumico Bajo nivel de xido ntrico (un importante regulador de la funcin de las clulas endoteliales). inducir un estado procoagulante.

Mecanismos moleculares de rosetas

La capacidad para obligar a los eritrocitos infectados para formar rosetas vara y los altos niveles de rosetas se asocian significativamente con la malaria severa en varios sitios en todo el frica subsahariana. mayor obstruccin microvascular. Las rosetas y la citoadherencia de clulas endoteliales estn fenotpicamente ligados, porque algunos de eritrocitos receptores de las rosetas se expresan tambin en las clulas endoteliales.

Receptor del complemento 1 (CD35)

Es una protena reguladora que se encuentra en los eritrocitos, en leucocitos y clulas dendrticas. La evidencia de que es un receptor CR1 de rosetas proviene de experimentos de que muestran que los eritrocitos deficientes en CR1 muestran reducidas en gran medida las rosetas.

A o B, los antgenos de grupo sanguneo

Las rosetas se producen en las clulas del grupo O, pero la rosetas son ms pequeos y ms dbiles. Grupos A y B mas susceptibles.

Mecanismos moleculares de P. falciparum adhesin de las plaquetas

Las plaquetas tambin podran aumentar citoadherencia actuando como puentes entre las clulas endoteliales. P. falciparum interaccin con las plaquetas podra tambin conducir a la activacin plaquetaria y la liberacin de mediadores inflamatorios.

La acumulacin de las plaquetas se ha reportado en los cerebros de los nios que mueren de paludismo; sin embargo, el papel preciso de las plaquetas en la patologa de la malaria sigue siendo poco clara. Un reciente informe pone de relieve el hecho de que las plaquetas pueden tambin tienen efectos antiparasitarios in vivo.

Los mecanismos moleculares de la interaccin de la P. falciparum con las plaquetas no se comprende plenamente; sin embargo, tres receptores plaquetarios han sido identificados: CD36 Receptor de C1q globular (gC1qR / HABP1/p32) P-selectina En todos los casos, los ligandos parsito son desconocidos, aunque PfEMP1 es el probable candidato.

CD36
Aunque la mayora de los parsitos aislados se unen a CD36, no todos lo reconocen. Por lo tanto, parece probable que la interaccin con los receptores de plaquetas o eptopos diferentes en CD36 podra diferenciar cepas de parsitos.

gC1qR/HABP/p32
La importancia de esta protena en grupos de aislados clnicos an no se ha probado ampliamente, ni se sabe si polimorfismos afecta a la unin y a la susceptibilidad de contraer malaria.

P-selectina
Se expresa en las plaquetas activadas y podra tener un papel accesorio en la agregacin, especialmente en combinacin con CD36; Sin embargo, esto no ha sido probado ampliamente . En la actualidad, muy pocas pruebas determinan si la P-selectina es un vinculante importante en la malaria severa.

Mecanismos moleculares de la interaccin de IE con las clulas del sistema inmune

Muchos de los receptores implicados en la adhesin del P. falciparum a las clulas endoteliales, los eritrocitos y las plaquetas tambin estn presentes en los subgrupos de leucocitos, incluyendo CD36, ICAM1, NCAM (CD56), gC1qR, CR1 y la A y B en la sangre los antgenos de grupo.

Existe la posibilidad de para que los parsitos se unen a leucocitos

Promover la activacin de clulas inmunes Eliminacin del parsito Inmunomodulacin

La evasin del sistema inmune

CD36 la ms estudiada, tambin , sigue siendo la ms polmica.

La unin de IES a los macrfagos CD36 conduce a la fagocitosis, sin la produccin de citocinas proinflamatorias , lo que sugiere que CD36 podra conducir a la remocin de parsitos y as favorecer al anfitrin. Otra evidencia muestra que los parsitos al adherirse a CD36 implica un deterioro de la funcin de las clulas dendrticas humanas y la subsiguiente inhibicin de la respuesta adaptativa del SI , y as podra a favor del parsito.

 IEs P. falciparum al vincularse con clulas B in vitro, y el dominio de PfEMP1 es suficiente para inducir la proliferacin de clulas B a travs de un receptor desconocido del anfitrin. La naturaleza molecular de esta interaccin sigue siendo desconocida , aunque no hay pruebas en su contra de la participacin de PfEMP1 unido a CD36 o de ICAM1. De hecho, podra PfEMP1 suprimir el IFN- de produccin de linfocitos.

Implicaciones clnicas y posibles aplicaciones teraputicas

 Las interacciones de adhesin entre IEs P. falciparum y las clulas humanas y abren la posibilidad de desarrollar terapias destinadas a obstaculizar o revocar adherencia del parsito.

 Sobre los conocimientos actuales, cualquier Los nuevos tratamientos Son intervencin teraputica capaz de revertir la necesarios con urgencia porque adhesin de IES tiene el potencial de aliviarla y podrade ponerse a prueba como un tasa mortalidad de casos complemento de los medicamentos graves de malaria esgraves de 15-20% antimalricos en enfermos de malaria.

 Los mejores resultados obtenidos son con derivados Artemisinina ms que la Quinina. La mayor eficacia de artemisinina es que acta en todos los las etapas del desarrollo parasitario , mientras que la quinina, slo mata esquizontes y madura trofozotos. Las terapias que quieren revertir la adhesin suelen ser drogas, y sera fcil y barato la fabricacin, tienen efectos secundarios mnimos, y una buena estabilidad .

Otra Opcin
La infusin de anticuerpos monoclonales o pptidos tambin podra tener el potencial para invertir de adhesin, aunque no parece factible , ya que tales intervenciones deberan ser lo suficientemente baratas para ser ampliamente utilizadas en pases en desarrollo o con recursos limitados.

Drogas antiadhesin en investigacin

 Los recursos para evitar o revertir la adherencia a CD36 , Levamisol es un inhibidor de la fosfatasa alcalina que se utiliza como una droga Antihelmnticos en seres humanos. Una investigacin reciente demostr que CD36 endotelial es constitutivamente fosforilada. El levamisol provoca inhibicin de la actividad de la fosfatasa , conduce a una doble reduccin de IE in vitro. Se espera determinar si levamisol ser de beneficio clnico

N-acetilcistena
N-acetilcistena (NAC) es un antioxidante que se utiliza ampliamente en los seres humanos para el tratamiento de sobre dosis de paracetamol (acetaminofeno) . In vitro estudios demostraron que IE vinculante para CD36 se reverta en un 72-83% en la presencia de la NAC.

Recombinante pptido PfEMP1

Un pptido correspondiente a la regin de unin CD36 de PfEMP1 de la malaya Camp cepa del parsito . inhibe la adhesin de las casos clnicos del campo en Tailandia en especial a una lnea de clulas endoteliales in vitro en la que revierte la adhesin.

Drogas para inhibir la unin ICAM1

Fueron analizadas in vitro para la capacidad de inhibir la adherencia a la IE ICAM1 bajo ciertas condiciones. Un compuesto, (+) epigalloyl-catechingallate [(+) EGCG], fue identificado como inhibidor en un 50% en concentraciones micromolares. Sin embargo, este compuesto no invirti la adhesin. EGCG es un compuesto polifenol natural que es un componente del t verde y esta siendo investigado actualmente para el cncer, propiedades antiinflamatorias y anti-infecciosos.

Medicamentos para mejorar la funcin de las clulas endoteliales.

L-arginina
L-arginina es el sustrato para la sntesis de NO por la xido- sintetasa. A raz de los estudios en pacientes de baja produccin de NO y de plasma con bajos niveles de arginina en la malaria severa, estudios in vitro muestran que el NO tiene una efecto antiadhesivo , los investigadores han comenzado a investigar el potencial de L-arginina para ser utilizado como tratamiento coadyuvant del paludismo.

Fasudil
Fasudil reducido por P. falciparum inducida por la apoptosis de las clulas endoteliales in vitro y ayud a restablecer la integridad de la barrera endotelial.

Compuestos glucoconjugado sulfatados

Una variedad de compuestos glucoconjugado sulfatados son conocidos para invertir la formacin de roseras para P. falciparum sin embargo, muchos de estos compuestos tambin tienen importantes propiedades anticoagulantes que pueden causar efectos secundarios.

CR1
CR1 recombinante soluble (scr1) se est desarrollado como un medicamento en los seres humanos para lesiones (tales como los infartos y la los accidentes cerebrovasculares) o inmuno-mediada hemlisis y las reacciones transfusionales. scr1 interrumpe rosetas en algunos pero no todas las Rosetas aislamientos de P. falciparum.

Los recursos para evitar o revertir la unin de plaquetas

Los mecanismos de accin de estos frmacos son bien conocidas, sin embargo, se sabe tan poco acerca de los mecanismos y las consecuencias de las interacciones entre las P. falciparum y las plaquetas, es difcil predecir si alguno de estos compuestos puede ser beneficioso en la malaria severa.

Perspectivas y preguntas pendientes de investigacin.

La evaluacin de que los fenotipos de adhesin contribuyen a la malaria grave

Dada la enorme cantidad de tiempo, esfuerzo y dinero necesarios para el desarrollo de la droga , slo las interacciones de adhesin cuya participacin estn en la malaria severa con respaldo de la evidencia cientfica slida, es mas probable tener xito en la recaudacin de fondos para la droga en desarrollo y ensayos clnicos.

Posibilidad de variacin geogrfica en fenotipos de la adherencia del parsito que causa la malaria grave
Como se describi anteriormente, existen claras diferencias en fenotipos de los parsitos vinculados a la enfermedad grave, en los estudios de reas de baja transmisin como es Asia (la tasa de multiplicacin es alta y no selectivos en la invasin) en comparacin con moderado-alto en reas de transmisin, tales como el frica subsahariana (rosetas).

Cmo podran estas condiciones regionales explicar las diferencias en los diferentes niveles de inmunidad del husped como un factor importante?

 En los individuos no inmunes en la zonas de transmisin baja (por ejemplo, SE de Asia), cualquier parsito que invade las clulas rojas de manera eficiente y retiene adecuadamente, puede llegar a tener una alta carga de parsitos y causar una enfermedad grave antes de que el sistema inmune del husped monte una respuesta especfica de anticuerpos.

 En el frica subsahariana, sin embargo, cuando los individuos estn expuestos a mltiples Infecciones por P. falciparum, el crecimiento del parsito en el husped humano podra ocurrir en la presencia de la respuesta inmune del parsito en proliferacin. En particular, las infecciones inciales en los nios puedan ser modificadas por exposicin en el tero de antgenos o anticuerpos maternos adquirido a travs de la placenta o por medio de mama la leche, y totalmente inmunolgicamente virgenes en relacin con la infeccin por Plasmodium .

Implicaciones de la variacin geogrfica de terapias antiadhesin

El argumento anterior es especulativo, sin embargo, se ajusta con los datos existentes. Si en tales regiones existen diferencias (en relacin a la malaria la intensidad de la ransmisin y la nmunidad del husped), este tiene importantes implicaciones teraputicas.

Posibles problemas con la terapias antiadhesin

Es la falta de un modelo animal de que refleje verdaderamente la fisiopatologa de la malaria grave por Plasmodium falciparum en los seres humanos, porque no es posible en la actualidad probar terapias antiadhesin de una manera significativa. Los intentos se han hecho para desarrollar modelos animales de estudio , sin embargo, su relevancia en los mecanismos de la enfermedad humana es poco clara y no probada.

Conclusin
A pesar de los problemas mencionados, la necesidad urgente de nuevas terapias adyuvantes para reducir la tasa de mortalidad de la malaria severa defiende firmemente la mayor investigacin en esta rea. Terapias antiadhesin tienen un gran potencial para salvar vidas y la investigacin para aclarar las fenotipos de adhesin que causan la malaria grave y el desarrollo de intervenciones para invertir la adhesin debe ser una prioridad para la investigacin en malaria en la prxima dcada