ELISA (Ensayo por Inmunoabsorcion Ligado a Enzimas)

Daniela Murillo Elizabeth Perea Natalia Villegas

Historia
1959 Yalow y Berson Precursores de los ensayos inmunoenzimticos que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlman. El uso de material radiactivo ha limitado el uso del radioinmunoensayo, y a la vez a popularizado el empleo del inmunoensayo enzimtico (EIA), del que hay dos tcnicas principales: El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas El ensayo inmunolgico multiplicado por enzimas.

 Reaccin antgeno-anticuerpo El color generado por la interaccin de un sustrato cromognico y una enzima

Determinacin de:
ANTICUERPOS CONTRA AGENTES INFECCIOSOS Toxoplasma CMV Epstein Barr Cisticerco Hepatitis A-B-C Rubeola Amebas Helycobacter pylori HIV ANTIGENOS TUMORALES ACE (Antigeno Carcinoembrionario) APS (Antigeno prostatico especifico) CA 125 (Antigeno Carbohidrato) AFP (Alfafetoproteina)

AUTOANTICUERPOS ANA (Anticuerpo Antinuclear) Anticuerpos antitiroideos FR (Factor Reumatoide) Anticardiolipinas

Formacin de colores por la accin enzimtica sobre diferentes cromgenos

Otras Enzimas
-galactosidasa Penicilinasa Ureasa Glucosa Oxidasa

Fase Pre-Analtica

Toma de la muestra

Muestra
Obtencin de suero Tubos de tapa amarilla o de tapa roja Centrifugacin

Condiciones de la muestra
No hemolizada No lipemica

Condiciones del Paciente

Ayuno ideal de 10 a 12 horas No consumo de tabaco ni alcohol

Fase Analtica

Fundamento del ELISA

Pasos Generales
Tapizado Lavado Adicin muestra problema Unin antgeno o anticuerpo Lavado Adicin de Ac secundario Lavado Adicin sustrato Desarrollo del color

Tipos de ELISA
Anticuerpos Marcados: ELISA directo ELISA indirecto ELISA sandwich - DAS (Doble) - HADAS (Heterologo)

Antigenos Marcados ELISA competitivo

ELISA directo

ELISA Indirecto

ELISA Sandwich DAS (Double Antibody Sandwich)

ELISA Sandwich HADAS

ELISA Competitivo

Revelacin de la actividad enzimtica

Adicin de cidos o bases fuertes para detener la reaccin Lectura de la densidad ptica (DO) por espectrofotmetro

Fase Post-Analtica

Densidad ptica (DO)

Concentracin

Reporte de Resultados
Reporte Cualitativo Positivo Negativo Reporte Cuantitativo ng o g / ml Unidades Internacionales de ELISA (EIU)

Falsos Positivos
Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares Enfermedades Autoinmunes Embarazadas Presencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc. Contaminacin cruzada entre muestras Deterioro de los reactivos Errores tcnicos

Falsos Negativos
Paciente no ha generado los anticuerpos de estudio Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antgeno de la prueba o viceversa Deterioro de los reactivos Errores tcnicos

Ventajas de la prueba ELISA

Muy sensible Gran numero de muestras procesadas simultneamente Resultados rpidos Utilizacin de Reactivos menos txicos Menor Costo

Gracias