Cultivo in vitro de tejidos vegetales

HISTORIA,

 CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES ES LA CIENCIA O (EL ARTE) DE HACER CRECER CELULAS, TEJIDOS U ORGANOS AISLADOS DE LA PLANTA MADRE EN UN MEDIO ARTIFICIAL

El cultivo en medio nutritivo, bajo condiciones estriles, de plantas, semillas, embriones, rganos, tejidos, clulas de plantas
El trmino cultivo in vitro es un trmino muy genrico que se refiere ms bien a la metodologa usada que al propio objetivo de ese mtodo. En sentido estricto, in vitro quiere decir "dentro de vidrio", es decir, el cultivo de plantas o de alguna de sus partes (pero tambin de clulas y tejidos) dentro de recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado.

A diferencia de lo que sucede con los vertebrados, en los vegetales la semilla es liberada cuando an sus tejidos no se han diferenciado totalmente.La semilla contiene clulas embrionarias que darn origen a todos los tejidos de la nueva planta despus del proceso de germinacin; adems, muchas de las clulas de los tejidos vegetales ya maduros conservan la potencialidad de diferenciarse y dar origen a diversas estructuras; estas clulas forman parte de meristemos primarios y secundarios que pueden encontrarse en todos los rganos de las plantas. Gracias a esto es posible obtener plantas enteras a partir de tejidos de yemas, tallos, races y hasta hojas de casi cualquier planta. La propagacin clonal o vegetativa de plantas es una produccin a partir de partes vegetativas. Se utilizan tejidos vegetales que conserven la potencialidad de multiplicacin y diferenciacin celular para generar nuevos tallos y races a partir de cmulos celulares presentes en diversos rganos

1. CONCEPTO DE TOTIPOTENCIALIDAD
La teora de la totipotencialidad celular, enunciada por Haberlandt a principios del siglo veinte, postula que toda clula vegetal individual es capaz de regenerar una planta entera a partir de un cultivo in vitro sin importar el grado de diferenciacion alcanzado. Para ello se requieren condiciones especificas referidas al medio de cultivo, relaciones hormonales, temperatura, fotoperodo, etc.

IMPLICA QUE TODA LA INFORMACION NECESARIA PARA EL CRECIMIENTO Y REPRODUCCION DE LOS ORGANISMOS ESTA CONTENIDO EN LA CELULA

Planta donante

Planta completa regenerada

Totipotencia
Clula aislada Clulas en divisin

2.

CONCEPTO DE DESDIFERENCIACIN
La desdiferenciacin consiste en la transformacin y prdida de las caractersticas de especializacin de un tipo celular para dar lugar a clulas de tipo meristemtico. El siguiente paso involucrado en la regeneracin de una planta es la redifereciacin de las clulas previamente desdiferenciadas.

MORFOGENESIS VEGETAL Se denomina morfognesis al proceso por el cual se

determinan el desarrollo de los rganos, tejidos o clulas individuales del organismo de los seres vivos, como tambin las caractersticas y funciones particulares de cada uno de esos componentes.

COMPETENCIA

El potencial endogeno de una clula dada o tejido para desarrollar una ruta particular

Los meristemas determinan el crecimiento de la planta y dan origen a sus diferentes rganos

Los meristemas son grupos de clulas indiferenciadas que retienen la capacidad de dividirse durante todo el ciclo de vida de una planta
Los meristemos estn compuestos porclulasno diferenciadas que se dividen activamente, tambin llamadasclulas totipotentespor su habilidad de dar lugar a todos los tejidos vegetales

3. BALANCE HORMONAL
Todo proceso de diferenciacin est regulado por el balance entre diferentes tipos de reguladores del crecimiento, fundamentalmente de auxinas y citocininas

Qu es un explanto?
La eleccin de un Explante apropiado constituye el primer paso para el establecimiento de los cultivos, dicha eleccin en parte est determinada por el objetivo a estudiar y la especie vegetal involucrada.

El material vegetal con el que se inicia un cultivo in vitro puede ser cualquier clula, tejido u rgano de la planta (explanto). Tejidos somticos: de tallo, raz, hoja, meristemos Tejidos reproductores: anteras, polen, microesporas, vulos, semillas Las condiciones de cultivo pueden pretender la proliferacin desorganizada de las clulas del explanto hasta dar lugar a un callo o incluso a un cultivo de clulas cuando se separan stas del callo. .

TIPOS DE EXPLANT ES

EXPLANTES: YEMAS APICALES Y AXILARES

Medios de cultivo: composicin general

Compuestos inorgnicos
Macronutrientes: NO4- , PO43- , K+, Ca2+, Mg2+, SO42Micronutrientes: Fe2+, Cu2+, Zn+, Mn2+, Mo2+, Co2+, ICarbohidratos Sacarosa, glucosa, mio-inositol Vitaminas Tiamina (B1) Piridoxina Acido nicotnico (C) Biotina Aminocidos Glicina

Reguladores del crecimiento Auxinas Citocininas Giberelinas Soporte inerte (medios semislidos) Agar (0,7 a 1%) Gelrite pH 5,6 5,8 Esterilizacin 1 atmsfera, 15 a 20 minutos en autoclave

EL MEDIO DE CULTIVO PUEDE SER SOLIDO O LIQUIDO

Reguladores del crecimiento

Grupos bsicos de reguladores del crecimiento: - Auxinas - Citoquininas - Giberelinas - Acido abscsico - Etileno Generalidades: - Actan a bajas concentraciones - Interactan unos con otros (los resultados estn determinados por las concentraciones relativas entre las diferentes fitohormonas). - Los reguladores endgenos del crecimiento estn presentes en la planta durante todo su ciclo de vida pero su concentracin flucta. Su concentracin relativa vara en funcin del estado fisiolgico de la planta y en cada uno de los rganos de sta. - Estn involucrados en numerosos procesos fisiolgicos.

 Laboratorio: condiciones y material . Instrumental, material de siembra, cultivo, productos. Material vegetal: preparacin y esterilizacin. Soluciones nutritivas

AREA DE PREPARACION

AREA DE TRANSFERENCIA

AREA DE INCUBACIN

AREA DE CRECIMIENTO

 OTRAS AREAS
AREA DE OBSERVACIN Y EXAMEN

AREA DE CUARENTENA Y CONTROL FITOSANITARIO

AREA DE OFICINA

CULTIVO DE Meristemo GAMETFITOS

CULTIVO DE MERISTEMOS

Enraizado

TIPOS DE CULTIVO in vitro

Tallos adventicios
A IRECT D S I ES IOGN EMBR

Seccin uninodal CULTIVO DE del tallo SECCIONES UNINODALES

ORGANOGNESIS DIRECTA

Plantlas
ORGANOGNESIS INDIRECTA

PLANTA MADRE

Seccin de tejido somtico

(Hojas ,hipocotilo races)

Embriones somticos Callo Tallos adventicios

CULTIVO DE CLULAS Y PROTOPLASTOS

Embriones somticos

SEMILLAS SINTTICAS

Aplicaciones
Estudios bsicos de fisiologa, gentica, bioqumica y ciencias afines.

- Bioconversin y produccin de compuestos tiles - Incremento de la variabilidad gentica - Obtencin de plantas libres de patgenos - Propagacin de plantas

Alcances de la micropropagacin vegetal

Propagacin vegetativa rpida y a gran escala Uniformidad seleccionada del material clonado Multiplicacin de plantas recalcitrantes a las tcnicas convencionales Reduccin en el tiempo de multiplicacin y en el espacio requerido para tal fin Mayor control sobre la sanidad del material propagado Introduccin rpida de nuevos cultivares Conservacin de germoplasma Facilidades para el intercambio internacional de material vegetal

CASOS EXITOSOS
Cultivos de clulas vegetales, tiles para la industria en Colombia Con tan solo una hoja o el tallo de una planta, investigadores de la UN lograron reproducir en el laboratorio cultivos de clulas vegetales tiles para la produccin de sustancias industriales.
La tecnologa del cultivo de clulas vegetales en suspensin

Recordemos que..
La tecnologa del cultivo de clulas vegetales en suspensin, es decir, por constante agitacin, parte de conservar clulas libres y pequeos agregados celulares en un medio de cultivo lquido, y se convierte cada vez ms en una alternativa viable al cultivo de la planta completa en el campo para la produccin de los llamados metabolitos secundarios o aquellos que dan origen a los compuestos y que, junto con los primarios (encargados de garantizar la vida), permiten la existencia de los seres vivos

Prueba de ello es que los investigadores de la Universidad Nacional de Colombia han producido de la planta comnmente llamada como Cobangolo o catape, Thevetia peruviana por su nombre cientfico, una sustancia llamada peruvsido, que puede ser utilizada como regulador del ritmo, y de otros problemas cardiacos.

La investigacin que se desarrolla en la UN en Medelln, an a escala de laboratorio, se complementa con el estudio de otras especies de plantas como Nerium oleander (rosa laurel), Catharanthus roseus (Vinca), Calendula officinalis (Calndula), Petiveria alliacea (Anam) y Azadirachta indica (rbol del Neem o Margosa).

Sorprendentes avances en agrobiotecnologa

Mircoles, 27 de Junio de 2012 23:55

Las plantas y animales modificados son una posibilidad casi sin lmites para remediar carencias y problemas de la humanidad.Para obtener jugo de naranjas, quin dijo que hay que plantar un naranjo? No. Eso es moda pasada. El Grupo de Biotecnologa de la Universidad de Antioquia que dirige Luca Atehorta, produce los sacos o bolsitas donde viene el jugo en la naranja. No hay necesidad de producir ms.

Est en desarrollo, como muchos otros productos, como la ipecuacana, de la que se produce solo la raz para obtener los compuestos de utilidad. Se aslan los tejidos y se multiplican para tener esas bolsitas del jugo, en el caso de la naranja.

Produce material vegetal, "plntulas" de excelente calidad gentica y fitosanitaria, a partir de tcnicas de Cultivo de TejidosIn Vitro,que permiten a los productores desarrollar sus cultivos con material vegetal garantizado y as incrementar sus rendimientos y productividad, para ser ms competitivos en el mercado nacional e internacional. http://www.biofabricapta.org/recorrido-virtual

La Biofbrica posee tecnologas avaladas por el Instituto de Biotecnologa de las Plantas (IBP), para la propagacin masiva en las siguientes especies:

FORESTALES Teca, Eucaliptus sp; (grandis, glbulus, teriticornis), Pino Tecunumanni, Meligna arborea, Acacia Magnium, Paulownia FRUTALES Mora (San Antonio, Francesa, Sin Tuna, Castilla), Pia (Oro Miel), Fresa, Tomate de rbol. FLORES Grbera, Clavel y Mini Clavel, Aster, Crisantemos (Deliflor, Royal Van Zanten, Fides, Dekker, Danziger), Callas y Mini Callas, Limoniun, Statice

MUSCEAS Banano (Willians, Valery, Gran Naime), Pltano (Hartn) TUBRCULOS Yuca, Papa: (capira, ica purace, criolla, cumanday, roja nario) BIOCOMBUSTIBLES
Biodiesel

Jatropha Curcas, Higuerilla Etanol Caa de Azcar

Micropropagacin vegetal

Iniciacin
Eleccin y fitoacondicionamiento de la planta madre Eleccin del explanto inicial y de la formulacin del medio de cultivo Desinfeccin superficial de los explantos Establecimiento del cultivo in vitro

Tcnica alternativa para la multiplicacin clonal de especies, consiste en cultivar, in vitro, cualquier parte de una planta en un medio de cultivo artificial, previamente esterilizado, y bajo condiciones ambientales controladas. Bsicamente se trata de una multiplicacin masiva de individuos que a travs de su fragmentacin y posterior desarrollo, permitirn la formacin de plantas completas. Las plantas madres de las cuales se toman los primeros explantos (parte de la planta que se usa para la multiplicacin), deben ser sanas y poseer caractersticas varietales conformes con la variedad elegida. En poco tiempo se obtendr un elevado nmero de plantas sanas genticamente iguales a la planta madre.

Multiplicacin
Multiplicacin del material stock

Enraizamiento
Enraizamiento de los brotes obtenidos in vitro

Rusticacin
Pasaje de las plantas crecidas in vitro a las condiciones de maceta o a campo

FASE 0: PREPARACIN DE LA PLANTA MADRE

Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre un perodo de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero, en que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias ptimas y con un control de la nutricin, del fotoperodo y de la irradiancia recibida

FASE I: ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES DE ASEPSIA

Una vez escogida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de los cuales se obtendrn los explantos. Antes de extraer los explantos se har una desinfeccin de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. Ya en condiciones de asepsia (se trabajar en cabinas de flujo laminar) se extraern los explantos del material vegetal y se pondrn en cultivo en un medio de iniciacin dentro de un tubo de cultivo.

FASE II: MULTIPLICACIN DE LOS BROTES

Los nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cmara de flujo laminar

FASE III: ELECCIN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS

Para enraizar los explantos se utilizan principalmente dos mtodos: ENRAIZAMIENTO IN VITRO Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta operacin se realiza en la cmara de flujo laminar y como la fuente de energa para enraizar est en el medio de cultivo no es necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para realizar la fotosntesis. ENRAIZAMIENTO EX VITRO Los explantos se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no necesariamente estril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita. Con este mtodo es necesario que el medio de enraizamiento est libre de organismos patgenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben realizar fotosntesis para que la planta tenga una fuente de energa para enraizar y desarrollarse. Los explantos deben de plantarse en contenedores cubiertos por un plstico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar en el laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en un rea sombreada.

FASE IV: ACLIMATACIN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS

Tanto si los explantos fueron enraizados in vitro como ex vitro, estn poco adaptados a crecer en un invernadero, ya que estos explantos han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas perezosos para responder al descenso de la humedad relativa, demasiado lentos para para evitar la desecacin del explanto. Por otra parte crecer en ambientes tan hmedos tambin suele implicar la falta de una cutcula crea bien desarrollada. Los explantos deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz.

MICROPROPAGACIN

Propagacin vegetativa por embriognesis somtica

Explanto (disco de hoja) Callo Explanto (clulas vegetales)

REGENERACIN

Suspensin celular Embriones somticos GERMINACIN ENCAPSULACIN

GERMINACIN

Semilla artificial

EMBRIOGENESIS SOMATICA

ENCAPSULACION DE EMBRIONES SOMATICOS

Propagacin vegetativa a partir de yemas preexistentes

Proliferacin de yemas apicales o axilares

- Consiste en la multiplicacin de plantas a partir de las yemas axilares preexistentes. Representa la aceleracin in vitro del crecimiento natural de dichos meristemas. - La tasa de multiplicacin (t.m.) se calcula en base al nmero de brotes o vstagos obtenidos a partir de un explanto inicial, entre un repique y el sucesivo. Esta tasa puede variar entre 2 y 20 brotes por mes, dependiendo de la especie en cuestin, entre otras variables. - Por ejemplo, con una t.m. de 5/mes podran obtenerse 10.000.000 plantas en un solo ao, a partir de una nica yema inicial. - El cultivo de meristemas es un caso especial del uso de esta tcnica.

Existen dos posibles vas morfogenticas implicadas en la diferenciacin de novo de brotes y/o plantas completas

Posibles vas morfogenticas: - Organognesis - Embriognesis Diferencias entre las dos posibles vas:
- La organognesis es de origen pluricelular. Un grupo o cluster de clulas del explanto inicial se desdiferencia inicialmente para luego rediferenciarse dando lugar a un rgano vegetal. No se obtienen por esta va plantas completas. - La embriognesis se presupone de origen unicelular. Una clula del explanto se asla y constituye el punto de partida para la obtencin de un embrin somtico. Se diferencian embriones o estructuras bipolares que completan cada una de las etapas implicadas en la ontogenia de un embrin cigtico. El resultado es una planta completa.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS