TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA) OU ANTIBIOGRAMA

Thiago C. Nascimento

Conceito: Teste para verificar o comportamento dos microrganismos (sensibilidade ou resistncia) in vitro, frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do antimicrobiano ideal. Indicaes: Para microrganismos isolados e identificados como agentes causadores de infeco; Quando o microrganismo causador da infeco apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no espectro de resistncia ou tendncia mesma. Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.

Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade no apresenta variao ao longo do tempo. Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes (sensveis penicilina G)

Os resultados servem de base para: 1. Nortear a escolha do agente antimicrobiano mais adequado; 2. Predizer a chance de sucesso de um esquema teraputico.

O diagnstico laboratorial das doenas infecciosas comea com a indicao clnica adequada do exame microbiolgico, o que requer conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo infeccioso

Cultura + Antibiograma

Rede Brasileira de Monitoramento da Resistncia Microbiana (ANVISA)

Laboratrios brasileiros

CLSI

Tipos de Teste:
1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

A. Diluio: em tubo ou em placa;

B. Teste E (Teste epsilomtrico).

1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

16 a 24h, 35 C
Suspenso bacteriana (0,5 McFarland)

Disposi o dos discos impregnados com antimicrobianos gar Mueller -Hinton

Princpio: medida do halo de inibio (mm)

1. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

A. Diluio: em tubo;
1
Inoculo padronizado da amostra teste Aerobiose ~24 H - 37C

CIM 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Caldo + droga em concentraes crescentes 0,0625g/mL -1024,0 g/mL

Caldo

Controle

gar

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

A. Diluio: em placa;
Concentrao Inibitria Mnima

Controle

Aerobiose 24h - 35C

Suspenso bacteriana (0,5 McFarland)

Replicador de Steers

gar + Droga

0,0 g/mL

0,0625 g/mL

0,125g/mL

?
0,25g/mL 0,5g/mL 1,0g/mL

2,0g/mL

4,0g/mL

8,0g/mL

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

B. Teste E (Teste epsilomtrico).

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

B. Teste E (Teste epsilomtrico).
Vrios estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest apresenta concordncia com os mtodos de diluio em gar ou tubo, para dierentes antimicrobianos, em geral, com uma variao permitida de +/- 1 diluio.

2. Quantitativo: determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

B. Teste E (Teste epsilomtrico).

DEMONSTRAO E INTERPRETAO

2. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

Halo de leitura em mm

Leitura

Ausncia de halo: resistncia Presena de halo: sensibilidade ou resistncia

2. Qualitativo: mtodo de difuso de discos em gar (KirbyBauer)

Medir os halos de cada placa distribuda

Anotar os resultados

Consultar o CLSI
Resultado Sensvel Resistente Resistncia Intermediria

Correlao entre tamanho do halo e CIM

Quando os halos de inibio so correlacionados aos valores logartmicos da CIM, pela anlise de regresso linear, encontra-se uma relao linear consistente demonstrando que o halo de inibio inversamente proporcional CIM daquele antimicrobiano

Do ponto de vista clnico, o que significa dizer que uma bactria sensvel, resistente, ou apresenta resistncia intermediria?
Resistente: significa que a bactria no inibida pelas concentraes de antimicrobiano alcanadas pelas doses habituais e h grande chance de falha teraputica; a bactria cresce na concentrao srica mxima do antimcrobiano no paciente; Resistncia intermediria: isolados cujas CIMs so prximas concentrao srica mxima obtida por aquele antimicrobiano;

Sensvel: a categoria sensvel implica que a infeco causada pela bactria isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem recomendada para aquele tipo de infeco e para aquela espcie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser utilizado para o tratamento;

Os resultados dos TSA devem ser muito bem interpretados pela equipe do laboratrio de microbiologia, antes que o relatrio final seja emitido ao mdico.

Fatores que influenciam o resultado do TSA:

1. Composio qumica do meio de cultura: gar Muller-Hinton, com 4 a 6 mm de espessura ; 2. Densidade do inculo: 108 clulas/mL; 3. Temperatura: 35C a 37C;

4. Concentrao dos antimicrobianos nos discos;

5. Validade e conservao dos discos; 6. Ao e estabilidade da droga:
6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrlise nas primeiras horas de incubao 6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difuso da droga

7. Tempo de incubao : 18 a 24h

Antimicrobianos de espectro estreito x Antimicrobianos de amplo espectro Antimicrobianos de escolha x Antimicrobianos de reserva

Triste Realidade

Obrigado