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Automatizacin en el estudio de la hemostasia

Johanna Acevedo Hematologa clnica 2013

Hemostasia

La hemostasia es una serie de mecanismos, que nuestro organismo pone en marcha, para evitar una hemorragia o para cohibirla cuando se ha producido, asegurando adems que el tapn hemosttico no perdure ms tiempo del necesario para restablecer la continuidad del vaso.

Fases de la Hemostasia

Vasoconstriccin refleja
Hemostasia Primaria Coagulacin Plasmtica. Fibrinolsis

Pruebas Automtica para evaluar la Hemostasia primaria

Pruebas Automtica para evaluar la Hemostasia primaria

Hemostasia primaria
Citometria de flujo recuento de plaquetas (confirmacin con frotis sanguneo)

Agregacin Plaquetaria :Agregometro

Citometria de flujo
A las clulas que sern examinadas se les acopla un fluorocromo generalmente a travs de un anticuerpo monoclonal que reconoce una estructura especfica en la clula. Posteriormente, las clulas son suspendidas en el centro de un flujo de lquido isotnico que es impulsado a gran velocidad por un orificio estrecho pasan por un lser, al incidir con cada clula, se desva y este cambio de direccin es registrado por detectores especiales. Por otra parte, el reactivo fluorescente al ser excitado, emite luz en una longitud de onda determinada (color) que es registrado por detectores colocados de forma perpendicular al rayo lser. Cada uno de los detectores del equipo ofrece una informacin que es convertida en impulsos elctricos y posteriormente en cdigos digitales que pueden ser visualizados a travs de los programas de computacin especializados.8

Agregacin Plaquetaria
Las plaquetas se agregan unas con otras en las fases iniciales del proceso hemosttico, por lo que un defecto grave en esta etapa se asocia con hemorragia potencial, mientras que la hiperagregacin puede producir o facilitar la trombosis. El proceso de agregacin se estudia en el laboratorio utilizando sustancias con capacidad agregante, como ADP, epinefrina, colgena y Ristocetina. El mtodo empleado generalmente es el turbidimetria, la agregacin plaquetaria es un mtodo fundamental para obtener informacin sobre la hemostasia primaria.

Evaluacin de la coagulacin plasmtica

Tiempo de protrombina

Tiempo de tromboplastina parcial activada

Tiempo de trombina

TTPa

TP

TT

Mtodo cuagulometrico
Son tcnicas que se basan en la actividad biolgica de las distintas protenas que intervienen en los procesos de coagulacion. Estas determinaciones calculan el tiempo que se tarda, in vitro, en formarse del cogulo en la muestra a analizar.

ptico -mecnica

ptico

ptico

La formacin del cogulo genera un cambio en la densidad ptica.

ptico
Nefelometra
Luz dispersada. La dispersin va a depender de la concentracin y del tamao de la molcula

ptico -Mecnico

Este mtodo se basa en poner una bolita metlica en el tubo de reaccin, la cual queda suspendida entre dos imanes e interrumpe un rayo lumnico que enfoca a un detector. Al aadir el plasma muestra, el sistema se pone en marcha y el tubo sufre un movimiento de vaivn, pero mientras la muestra es lquida la bola se mantiene entre los imanes interrumpiendo el paso del haz de luz. Y cuando se coagula la muestra, la bola se mueve junto al tubo y permite el paso del rayo, marcando el tiempo.

Tiempo de protrombina (TP)


Es el tiempo que se demora en coagular una muestra de plasma descalcificado en presencia de un exceso de tromboplastina y calcio. Mide la actividad de la va extrnseca y va comn. Sirve para controla a pacientes en tratamiento con anticoagulantes orales. Para el estudio de alteraciones congnitas. Dficit de vitamina K. Enfermedades hepticas. Relacin internacional normalizada (INR) = Dosis de AO (2 - 3). Pacientes con prtesis valvular (2,5 - 3,5). Mayor a 4 se asocia a riesgo de hemorragia.

Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA)

Es el tiempo que se demora en coagular una muestra de plasma descalcificado en presencia de un exceso de fosfolpidos y calcio. Mide la actividad de la va intrnseca y va comn. Estudio de alteraciones congnitas. Control de coagulacin previo tratamiento con heparina. Est aumentado cuando hay anticoagulantes lpicos.

Tiempo de trombina (TT)

Es la velocidad con que la trombina coagula una solucin de fibringeno. Aadiendo un exceso de trombina al plasma. Est aumentado en hipofibrinogenemias, disfibrinogenemias, hiperfibrinlisis, tratamiento con heparina.

Fibringeno (FI)
Cuantificacin del fibringeno plasmtico. 2.0-4.0 g/l. El fibringeno es una protena esencial para la formacin del coagulo. La disminucin puede deberse a hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia.

Pruebas para la Fibrinlisis

Dmero D

Productos de degradacin del fibringeno (PDF)

Inmunologa
Aglutinacin
ELISA

Dmero-D
Se cuantifica por inmunoensayos. Se forma por accin de la plasmina sobre la fibrina. Positiva en procesos fibrinolticos secundarios (por trastornos mdicos, medicamentos, etc.) y en la coagulacin intravascular diseminada. Negativa en la hiperfibrinlisis primaria (aumento en la descomposicin normal del cogulo).

Productos de degradacin del fibringeno (PDF)


Se detecta por Inmunoensayo.

La plasmina produce productos de degradacin de la fibrina, designados como X Y D E. Por lo general los fragmentos D y E no alcanzan concentraciones plasmticas mayores que 10 ug/ml.
Los niveles aumentados de PDF son caractersticos de la CID aguda y crnica, la fibrinlisis sistmica, la trombosis venosa profunda y la embolia pulmonar.

Muestra suero

Mtodo ELISA anticuerpos policlonales anti D y anti E

Valor de referencia < 10 g/mL.

Utilidad clnica Evaluacin de la hiperfibrinlisis primaria, en ausencia de activacin de la coagulacin concomitante. Evaluacin de estados de hiperfibrinlisis: cirugas que involucran rganos con un alto potencial de activador del plasmingeno o durante circulacin extracorprea.

Variable pre analtica Aumentado: Bypass, circulacin extracorprea, dao necrotizante del tejido, perfusin deteriorada de rganos ricos en activadores del plasmingeno (pncreas, pulmn, prstata, tero).

Mtodo de Ivy
Se coloca el esfigmomanmetro en brazo y Se insufla a 40 mmHg

Con bistur se hace una incisin de 5 10 mm de longitud y de 1 mm de profundidad en la piel de la cara interior de antebrazo

Se vigila el tiempo de sangrado, secando con papel filtro cada 30 segundo sin tocar la herida hasta que cese la hemorragia.

Los limites de referencia fluctan entre 6- 9 minutos