BIOTECNOLOGA Y BIOMEDICINA (TRASPLANTE DE RGANOS, REPRODUCCIN ASISTIDA Y TERAPIA GNICA)

TRASPLANTE DE RGANOS.

De un experimento interesante y luego lleno de fascinacin, se convirti en la terapia ideal para prcticamente todas las enfermedades terminales que atacan a un solo rgano.

Ha sido el estmulo ms importante en el desarrollo de la investigacin inmunolgica, sirviendo como modelo obligado a centenares de investigadores en inmunogentica, inmunologa celular, inmunoqumica, biologa bsica y biologa molecular.

No se incluye dentro del trasplante el uso de prtesis ni aditamentos artificiales que puedan ser fijados en la economa.

Un trasplante es la transposicin de rganos, tejidos o clulas dentro de un mismo individuo o en uno diferente.

Trasplantes ex vivo y post mortem:

trasplantes ex vivo

Trasplantes realizados a partir de muertos enceflicos

Teniendo en cuenta las relaciones genticas entre el donante y el receptor, existen cuatro clases de trasplantes: autotrasplante. isotrasplante. alotrasplante. xenotrasplante.

AUTOTRASPLANTES:
Segn el sitio de la implantacin, los trasplantes son ortotpicos o heterotpicos.

Transferencia de un rgano o parte del mismo de un sitio a otro en el mismo organismo. (piel,
msculo, huesos, nervios, segmentos de arterias y venas, glndulas endocrinas, mdula sea y tambin algunos segmentos del aparato gastrointestinal.)

ISOTRASPLANTES:

Es el trasplante que se realiza entre individuos genticamente idnticos, como son los gemelos univitelinos en el ser humano o en otras especies animales, los individuos pertenecientes a cepas singnicas.

Auto e iso no presentan el problema del fenmeno de rechazo inmunolgico.

ALOTRASPLANTE:

El alotrasplante es un tipo de trasplante que se realiza entre individuos de la misma especie, pero genticamente diferentes.

Provoca el estmulo del sistema inmune del receptor que lo reconoce como extrao y elabora una respuesta cuyo objetivo es destruirlo.

Criterios de compatibilidad inmunitaria:

Si un trasplante ser beneficioso o no depende de la compatibilidad entre el rgano disponible y el organismo del paciente receptor.

La reaccin de rechazo se debe centralmente a los antgenos leucositarios (llamados internacionalmente HLA). Molculas determinadas genticamente por una seccin del cromosoma 6 que est constituida por una serie de genes (denominados, en su conjunto, sistema mayor de histocompatibilidad), los cuales se designan mediante letras (HLA-A, HLA-B, etc.).

Los alelos en genes de un individuo determinado pueden manifestarse de mltiples formas y, por lo tanto, desarrollar numerosos antgenos. Estos antgenos han sido numerados (HLAA1, HLA-A2, etc.).

Como puede observarse claramente, el nmero de posibles combinaciones es inmensa, por lo cual, la coincidencia de los antgenos es muy improbable.

El rechazo puede ser clasificado en: hiperagudo: existencia de anticuerpos preformados en gran cantidad en el receptor frente a antgenos ABO o a antgenos codificados por el complejo mayor de histocompatibilidad del donante. Agudo: se produce mediante una respuesta de inmunidad celular que aparece a consecuencia del trasplante. Suele aparecer entre la primera o tercera semana.

Crnico: de desarrollo muy lento, ha sido descrito en los trasplantes de rin despus de los 3 meses postrasplante.

Un posible mecanismo para evitar estos dos ltimos tipos de rechazo es disminuir la respuesta inmune mediante tratamiento inmunosupresor.

Prednisona: que inhibe la produccin de IL-1 por los macrfagos con la siguiente inhibicin de la activacin de linfocitos T y su subsiguiente produccin de IL-2, y bloquea la sntesis de cidos nucleicos con la consiguiente disminucin de proliferacin celular incluyendo linfocitos T y B, clulas efectoras del rechazo. globulina antilinfocitaria: la cual suprime de inmediato a las clulas T que responden contra el injerto.

ciclosporina-A: (obtenida de Tolypocladium inflatum). Su accin de ejerce casi exclusivamente sobre los linfocitos T inhibiendo los linfocitos CD4, inhibe la produccin de IL-2 y evita la aparicin de receptores para IL-2.

XENOTRASPLANTE:

Consiste en un trasplante en el cual el donante y receptor son de diferente especie.

Puede ser concordante cuando se realiza utilizando como donantes babuinos o chimpancs y como receptor el ser humano, o divergente si se realiza por ejemplo entre cerdos y humanos.

REPRODUCCIN ASISTIDA

La ciencia y las tecnicas mdicas han desarrollado un conjunto de intervenciones destinadas a vencer dificultades que se presentan en la procreacion.
Reproduccion

asistida

OBJETIVO DE ESTAS TCNICAS

Fertilizacin mediante procesos que incluyen la manipulacin de los gametos, de uno o ambos sexos Biotecnologias reproductoras

Innovadoras Ms utilizadas

Control

de ciclo estral Hiperovulacion Sexado TE

Todas ellas han revolucionado el inters y objetivos de la reproduccin animal

ABARCA
Inseminacin artificial Fecundacion in vitro Procesos equivalentes

CLASIFICACIN DE LAS MTODOS DE REPRODUCCIN ASISTIDA

Todos los mtodos se incluyen en uno de los tres grupos fundamentales

Obtencin

de uno de los gametos y su transferencia al cuerpo humano Obtencin de ambos gametos y su transferencia al cuerpo humano donde se lleva a cabo la fecundacin Fecundacin in vitro y posterior transferencia de los embriones al cuerpo humano

Las tcnicas correspondientes a c/u de estos grupos son los siguientes

GRUPO 1

Inseminacin artificial
Procedimiento

mediante el cual, se introduce el esperma en la vagina, canal cervical o el tero de la mujer, sin recurrir a la relacin sexual
Homologa Heterloga

GRUPO 2

Transferencia transabdominal intratuberica de gametos (GIFT)

Tcnica

de fecundacin asistida que tiene lugar en las trompas de Falopio, pero que tanto el ovocito como los espermatozoides son introducidos artificialmente a travs del pabelln tubrico

Via

laparoscopica o minilaparotomia

GRUPO 3

Fecundacion in vitro y la transferencia del ovulo fecundado (FIV-TE)

Fecundacin

extrauterina Consiste en permitir el encuentro del espermatozoide en el ovulo fuera del cuerpo de la mujer Consta de tres etapas

1) recuperacion de ovocitos - aspiracion de foliculos - clasificacin del ovulo 2)inseminacin, fertilizacin y cultivo de embriones - se espera la maduracion del ovocito - se agregan los espermatozoides al cultivo - los ovulos fecundados son cultivados 2448 hrs 3) transferencia de embriones - cuando los embriones se han desarrollado normalmente, se transfieren al tero materno

OTROS MTODOS

Inyeccin de espermatozoide dentro del ovocito

FIV

con micromanipulacin
Un espermatozoide Un ovocito

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

Tcnica de ovulacin mltiple MOET

Estimulacin

para la produccin mltiple de

ovocitos Son fecundados artificialmente Despus de 6-8 das los blastocistos son extraidos de la hembra donante Se transfieren a la hembra receptora
Eleccion

de hembras donantes

1)superovulacion de la donante con gonadotropinas 2)inseminacin artificial (5 dias despus de la superovulacin) 3)recogida no quirrgica de los embriones 4) sonda catter para la recogida de embriones 5) aislamiento y clasificacin de los embriones 6)almacenamiento de los embriones indefinidamente en nitrgeno lquido o a 37 C o a la temperatura ambiente durante un da 7) transferencia de embriones a las receptoras quirrgica o no quirrgicamente 8) diagnostico de gestacin por palpacin rectal 1 a 3 meses despus de la transferencia de los embriones 9) nacimiento

ESPECIES DE IMPORTANCIA AGROPECUARIA

Bovinos Cerdos Caprinos Ovinos

FECUNDACION IN VITRO TRASPLANTE DE EMBRIONES

TERAPIA GNICA

Transferencia de cidos nucleicos (DNA o RNA) a la clula con finalidad teraputica: Incrementar la expresin de un gen endgeno con efecto teraputico.

Inhibir la expresin de un gen endgeno con efectos patolgicos.

Restaurar la expresin de un gen funcional cuando el gen endgeno es disfuncional.

EXISTEN DOS MODALIDADES

Terapia gnica somtica (transferencia de DNA a clulas somticas)

Modificar la dotacin gentica en clulas no germinales No se transmite a la descendencia

Terapia gnica de la lnea germinal (transferencia de DNA a clulas que producen ovocitos o esperma)

Corregir de forma definitiva las enfermedades congnitas, una vez que la tcnica sea eficaz y segura

TAMBIN
In vivo El material se introduce directamente en las clulas del organismo Ex vivo clulas extradas del paciente, aisladas, crecidas en cultivos. Transferencia in vitro

La terapia gnica requiere que se transfieran eficientemente los genes clonados a clulas enfermas, de manera que los genes introducidos sean expresados en cantidad adecuada. Tras la transferencia gnica, los genes insertados se pueden llegar a integrar en los cromosomas de la clula, o bien quedar como elementos genticos extracromosmicos (episomas).
Genes integrados en cromosomas
Puede perpetuarse por replicacin cromosmica tras la divisin celular. Como las clulas de la progenie tambin contienen los genes introducidos, se puede obtener una estable a largo plazo. No obstante, la integracin cromosmica tiene sus inconvenientes debido a que la insercin suele ocurrir casi al azar: la localizacin de los genes insertados puede variar enormemente entre clulas.

Genes no integrados
No tienen una expresin a largo plazo. El resultado es que la posibilidad de curar un trastorno gentico puede ser remota. Sin embargo en algunos casos puede ser que no haga falta una expresin estable a largo plazo.

MTODOS DE TRANSFERENCIA GNICA

Introducir de manera eficaz la secuencia gnica de inters en la clula diana (transferencia gnica, transduccin o transfeccin) y conseguir su expresin.

Sistema de vehiculizacin o transferencia.

Promotores adecuados.

PRINCIPALES SISTEMAS DE TRANSFERENCIA

Fsico-qumicos:
ADN forneo integrado en un plsmido. Ventajas: Sencillos de preparar.

Inconvenientes:

Baja eficiencia de transduccin.

Algunos slo pueden utilizarse in vitro.
Tabla 1. Mtodos fsico-qumicos de transferencia gnica. oMicroinyeccin oPrecipitacin con fosfato clcico oElectroporacin oBombardeo con microproyectiles oInyeccin directa de ADN desnudo oConjugados ADN-protenas oConjugados ADN-adenovirus oLiposomas

No tienen limitaciones en cuanto al tamao del ADN que pueden transferir. Poco txicos. No son inmunognicos.

Transferencia por virus:

Se obtiene eliminando genes infectivos del virus y sustituyendo por el gen teraputico, manteniendo la capacidad de replicacin intacta.
Ventajas: Ms eficacia en la transferencia. (incluso del 100%)

Limitantes: Puede producirse una transferencia involuntaria del virus nativo patgeno.
Puede activarse un virus patgeno o un oncogn debido a la posibilidad de recombinacin gnica al insertarse un gen forneo en el genoma del husped.

Vectores ms utilizados en terapia gnica.

Tabla 2. Vectores virales de transferencia gnica. oAdenovirus oVirus adenoasociados oVirus vaccinia oHerpesvirus oRetrovirus

HERPESVIRUS

TERAPIAS BLOQUEANTES DE GENES

Terapia antisentido

Los agentes teraputicos antisentido inhiben la sntesis proteica al interferir los procesos de transcripcin y/o traduccin.

RIBOZIMAS:

Los ARN antisentido pueden catalizar enzimticamente la hidrlisis de secuencias especficas de ARNm.

Se disean de forman que combinen dicha actividad cataltica con la posibilidad, aportada por el apareamiento de bases, de reconocer especficamente diversas secuencias de ARN diana.

La terapia gnica fue inicialmente concebida como una forma de tratamiento de enfermedades genticas causadas por mutacin de un slo gen (monognicas).

El tratamiento definitivo de una enfermedad gentica slo es posible mediante la correccin del defecto gentico del gen mutado.

Las enfermedades hereditarias comprenden trastornos de muy diversa ndole.

La terapia gnica permite la introduccin en el organismo del gen normal, el cual debe corregir la alteracin gentica del organismo receptor.

TABLA 3. ENFERMEDADES MONOGNICAS EN LAS QUE SE APLICAN PROTOCOLOS CLNICOS DE TERAPIA GNICA.

Enfermedad

Inmunodeficiencia combinada grave Enfisema Citrulinemia Deficiencia de adhesin leucocitaria Fibrosis qustica Hemofilia A Hemofilia B Talasemia Anemia falciforme Enfermedad de Gaucher Mucopolisacaridosis tipo I Mucopolisacaridosis tipo IV Enfermedad de Niemann-Pick Fucosidosis Hipercolesterolemia familiar Hiperamoniemia Fenilcetonuria Distrofia muscular de Duchenne

Gen alterado

Adenosina desaminas a1-antitripsin Arginosuccinato sintetasa CD 18 CFTR Factor VIII Factor IX b-globina b-globina glucocerebrosidasa a-L-iduronidasa b-glucuronidasa Esfingomielinasa a-L-fucosidasa Receptor LDL Ornitina transcarbamilasa Fenilalanina hidroxilasa Distrofina

TG EN ENFERMEDADES NO HEREDITARIAS

Las aplicaciones de la terapia gnica no slo se limitan a las enfermedades hereditarias:

Ej: TG Cncer TG VIH/SIDA