Respuesta inmune contra la infeccin viral

Carlos Espitia Len Jennifer Paola Gonzlez

Contenido
1. Introduccin 2. Respuesta inmune innata
2.1 Clulas de vigilancia 2.2 Clulas natural killer (NK) 2.3 Complemento 2.4 Respuesta inflamatoria

3. Respuesta inmune adaptativa

3.1 Clulas del sistema inmune adaptativo 3.2 Presentacin antignica y activacin de clulas inmunes 3.3 Clulas mediadoras de la respuesta adaptativa 3.4 Respuesta de anticuerpos (Ac)

4. Lesiones inmunopatolgicas

1. INTRODUCCIN

Rta humoral

Rta celular

2. RESPUESTA INMUNE INNATA

El sistema de defensa inmune innato comprende: Citoquinas Clulas de vigilancia (clulas dendrticas y macrfagos)

Linfocitos citoliticos o clulas NK

Complemento

2.1 CELULAS DE VIGILANCIA

Clulas dendrticas y macrfagos

Activadas rpidamente

Tienen papel central en la clasificacin del agente infeccioso

Pueden transmitir informacin al sistema inmune adaptativo

 La clula madura no tiene capacidad de endocitosis. Muestra un nuevo repertorio de receptores de superficie celular - Receptores de quimioquinas que dirigen la migracin de la clula dendrtica madura a los ganglios linfticos. - Receptores de adhesin a las clulas T y molculas coestimuladoras de clulas T. clulas en dendrticas se Se Las encuentran la periferiamaduras del cuerpo, convierten en potentes centros de alrededor de las cavidades y bajo la superficie de sealizacin las mucosas. mviles. Son expertos en la endocitosis, pueden La maduracin de las clulas sintetizar citoquinas cuando se estimulan. dendrticas proporciona un vnculo Absorben protenas solubles y las retienen esencial entre la inmunidad innata yen endosomas. adaptativa.
Capturan protenas de clulas muertas, desechos y vesculas que se producen por la apoptosis celular

A medida que la clula madura, las protenas internalizadas se transforman en receptores que pueden ser reconocidos por por Linfocitos del sistema inmune adaptativo

Pueden ser infectadas por el virus que detectan HIV-1

Lectina

Infecta a LT CD4

Virus pueden ser transmitidos a LT y LB

Virus de la encefalitis equina venezolana

Virus del dengue

Se replican en las clulas dendrticas

Productos de genes virales modulan funciones de clulas dendrticas

Virus herpes simplex tipo 1 Virus vaccinia

En contraste

clulas dendrticas infectadas con citomegalovirus murino o virus del sarampin

2.2 CELULAS NATURAL KILLER

Primera lnea de defensa: preparadas para reconocer y destruir clulas Eninfectadas. los seres humanos, las clulas NK
TNF

son particularmente importante en el Reconocen la falta de personalidad control de la infeccin primaria por de las clulas infectadas. muchos virus
Son linfocitos que patrullan los tejidos sanguneos y linfoides.

IFN
Contribuyen a la rta inflamatoria Alertan clulas del sistema inmune adaptativo

IL-4 IL-3
Estimulan produccin de Ac

Son granulares, grandes y se distingue de los B y T por la ausencia de receptores pacientes conantignicos. deficiencias de las clulas NK sufren de infecciones graves con el Participan tambin en la defensa virus de la varicela-zoster, citomegalovirus adaptativa la unin a las humano, y mediante virus del herpes simple. clulas infectadas recubiertas IgG y las mata

Protenas MHC de clase I se encuentran en las superficies de la mayora de Clulas del cuerpo.

Pueden reconocer clulas diana que llevan la protena inusual HLA-E.

Un hallazgo: infeccin por citomegalovirus humano induce la sntesis de la protena HLAE, desviando as el potencial de reconocimiento y lisis de las clulas NK

Muchos genomas virales codifican protenas que bloquean o confunden las funciones de las clulas NK .

Moduladores de Nk se han identificado en varias familias de virus incluyendo: Flaviviridae Papillomaviridae Herpesviridae Retroviridae Poxiviridae

Ejemplo de interferencia con la actividad de las clulas NK es proporcionado por la protena E2 del virus de la hepatitis, que se une al CD81, una protena en la superficie de las clulas NK, y bloquea las seales de activacin

2.3 COMPLEMENTO
El sistema del complemento en la sangre es una importante defensa primaria y un componente de eliminacin de las respuestas inmunes innatas y adaptativas

Cascada del complemento

CARACTERSTICAS ESPECIALES

La iniciacin de una defensa local de amplio espectro. Ayuda en el reclutamiento de los monocitos y los neutrfilos Aumento de la permeabilidad vascular

Lisan clulas infectadas e inactivan los virus con envoltura, mientras que fagocitos fagocitan y destruyen viriones recubiertas con protena C3b.
Respuesta inflamatoria local que puede limitar la infeccin y pasar a sistema adaptativo Desempea un papel fundamental en la regulacin de clulas B y de clulas T mediada por respuestas inmunes.

La cascada del complemento tiene cuatro funciones biolgicas importantes

LISIS: la disrupcin y lisis de la membrana se produce cuando los componentes especficos del complemento activados (C6, C7, C8, C9) se polimerizan en una clula extraa o virus con envoltura, formando poros o agujeros.

Activacin de la inflamacin: es estimulada por varios productos peptdicos de las protenas del complemento producidos durante la cascada. Estos pptidos (C3a, C4a y C5a) se unen a las clulas endoteliales vasculares y a linfocitos para estimular la inflamacin y para mejorar las respuestas a antgenos extraos.

OPSONIZACION: Las protenas del complemento (tpicamente C3b y C1q) se pueden unir a las partculas de virus para que las clulas fagocticas los reconozcan y destruya. Receptores del complemento como Cr1 presentes en la superficie del fagocito se une a partculas recubiertas con C3b y estimulan su endocitosis

SOLUBILIZACION DE LO COMPLEJOS INMUNES: las infecciones virales no citopticas dan lugar comnmente a acumulaciones patolgicas de complejos Ag-Ac en rganos linfoides y riones. Las protenas del complemento pueden interrumpir estos complejos, mediante la unin a ambos (AgAc).

La activacin espontnea de cualquiera de las tres vas debe ser bloqueada, y las provocadas por infecciones menores tienen que ser evitadas.

el control se mantiene por las protenas inhibidoras del complemento presentes en el suero y en la superficie de muchas clulas

Muchos genomas virales codifican protenas que interfieren con la cascada del complemento.

Glicoprotena alfaherpesvirus C se une el componente C3b

La protena SPICE del virus de la viruela inactiva C3b y C4b humana

LA RESPUESTA INFLAMATORIA

Respuesta inmune adaptativa

repuesta humoral (anticuerpos)

clulas helper y efectoras

Accin antiviral en conjunto

Baja el numero de clulas infectadas

Destruccin de las clulas infectadas

Respuesta

Efector
IFN- secretado por CTLs CTLs

Actividad
induce estado antiviral Destruyen clulas infectadas Destruye las clulas infectadas por el virus directamente o por la citotoxicidad dependiente de anticuerpos mediada por clulas Inhibe unin virion-hospedero Inhibicin de la fusin de envoltura del virus con la membrana del hospedero Opsonizacin Aglutinacion de viriones

Mediado por clulas

Clulas NK y macrfagos

Principalmente secrecin de IgA Principalmente IgG Humoral Anticuerpos IgG y IgM IgM

Complemento activado via IgG lisis de virus envueltos, y IgM opsonizacion por C3/anticuerpo

 Principalmente debe reconocer clulas infectadas de las no infectadas Receptores de membrana celular de linfocitos T o B y los expresados en membranas de clulas (MHC). MHC

Clase I
Presente en casi todas las clulas

Clase II

superficies de las clulas dendrticas maduras, macrfagos, y clulas B

Clulas T

Clulas B

El receptor se une a pptidos cortos, lineales derivados de protenas proteolticamente procesadas.

El receptor se une a eptopos discretos (contiguos secuencias o conformacin nica) en las protenas intactas

Respuesta dada por produccin de citosinas , sntesis de anticuerpos y destruccin de las clulas infectadas.

Ejemplo de regulacin: las protenas del complemento del sistema inmune innato desempean un papel importante en la iniciacin y regulacin de la respuesta de clulas T ( entre otras)

Caractersticas

Adaptacin especfica a determinado organismo Requiere de un tiempo mayor para ser activa Inmunizacin posterior a la retirada de la partcula viral Modelo para creacin de vacunas

Proliferacin celular de memoria con gran intensidad en la segunda infeccin y en menor tiempo.

CLULAS DEL SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO

Linfocitos

Clulas presentadoras de antgeno

Clulas T

Clulas B

T helper

Citotxicas

Clula reconoce Ag
Sitio de entrada

Nodo linftico

Presentacin de Ag

Proliferacin y produccin de citosinas

Linfocitos

SISTEMA INMUNE Y LINFTICO EN LAS MUCOSAS sistema inmune de la mucosa suele ser la primera defensa de adaptacin luego de la infeccin

Placas de peyer, las amgdalas en la faringe, los folculos submucosa de las vas respiratorias superiores, y el apndice.

 En mucosas, las clulas M presentan antgenos al sistema linftico subyacente IgA secretada por clulas B acumuladas en cercanas a las clulas M En piel , clulas de langerhans son importantes en la respuesta inicial como funcin de los centinelas. Migran a los ganglios linfticos regionales para transferir la informacin a las clulas T y para activar directamente los linfocitos B. Algunas clulas T de la piel desempean erupciones caractersticas de la viruela, virus del sarampin y la infeccin por el virus varicela-zoster.

 Una forma de reprimir la respuesta inmune es la interaccin y destruccin de clulas inmunitarias de la piel directamente con el agente infeccioso.
Las clulas M en el epitelio de la mucosa han sido implicados en la propagacin de la faringe y el intestino al sistema linfoide de una variedad de virus

Accin de los linfocitos que llevan receptores de antgenos distintos

No todos los linfocitos en su primer encuentro son sensibilizados. Los pocos que reaccionan se multiplican casi 1000 veces dejando sus progenies con reaccin inmunolgica Al tener muchas generaciones reactivos a diferentes eptopes las reservas de linfocitos se mantiene por periodos prolongados.

Clulas Th

IL12

Th1 Efecto inhibitorio de Th2 (IL-4 e IL-5)

IL2

Th2 Estimulacin de maduracin de clulas B y MCRs Citosinas antiinflamatorias

IL4

NK, INF

Clulas Th y CTL se distinguen por las protenas nicas de superficie celular

 T CD4 + son generalmente clulas Th capaces de interaccionar con las clulas B y las clulas presentadoras de antgeno que tienen las protenas MHC de clase II en sus superficies. T CD8 + se diferencian en CTL s que puede interactuar con casi todas las clulas del cuerpo que expresan el MHC de clase I Clulas T citotxicas reconocen pptidos extraos (MHC de clase I) y destruyen activamente la clula que presenta los pptidos. Clulas T citotxicas maduras juegan un papel importante en la eliminacin de clulas infectadas por el virus del cuerpo por la lisis celular y por la produccin de IFN-gamma y TNF-alfa

Infeccin de las clulas B por Epstein-Barr virus y herpesvirus equino tipo 2 modulan la respuesta Th1

Clulas Th17
Clulas auxiliares CD4 + con papel central en el control de la respuesta inflamatoria. Presentan antgenos a CDs en presencia de TGF- y la IL-6, Th17 clulas secretan IL-17 e IL-21. Adems, las clulas Th17 estimuladas expresan el receptor para IL-23 Secretan defensinas, y llaman neutrfilos al sitio de activacin. Clulas Th17 han sido implicados en enfermedades autoinmunes que implican inflamacin crnica y en el control de las infecciones bacterianas. Los individuos con un gran nmero Th17 en su mucosa intestinal son capaces de controlar las infecciones por lentivirus mucho mejor que los individuos con un nmero reducido de estas clulas auxiliares.

Clulas T de memoria

Pueden tener receptores CD8 o CD4 Son de larga vida Unin Ag-Ac en ganglios para mantener la respuesta y desprender respuesta ante baja de AC Blanco principal y poderosamente efectivo de virus inmunosupresores

Clulas NKT

Diferenciados por el receptor T Clula NK reconocen molculas glicolpidos unidos a protenas CD1d, molcula cercana al MHC de clase I. Puede actuar como una clula TH o una clula citotxica. Capaces de liberacin de IFN-gamma despus de la infeccin viral.

Clulas T reguladoras

Conocidas tambin como T supresoras Funcin principal poner fin a la respuesta inmune y llevar el sistema inmune de nuevo a estado fundamental La accin de T reg puede limitar la eficacia de las vacunas, ya que cierran la respuesta inmune.

PRESENTACIN ANTIGNICA Y ACTIVACIN DE CLULAS INMUNES.

Activacin por interaccin con MHC clase I Identificacin de pptido expuesto en superficie El encuentro de clulas T produce diferenciacin en CTLs Unin a INF aumenta la expresin de MHC tipo I y tipo II en Clulas endoteliales y astrocitos Ambas respuestas de anticuerpos y CTL son controlados con precisin por las citoquinas producidas por las clulas Th (efecto del MHC II)

Procesamiento de protenas virales

Muchas se hacen de manera exgena Entran por endocitosis y son destruidas en los endosomas Se presentan en el MHC clase II para ser reconocida por celulas T CD4 en ganglio Desencadenamiento de respuestas Th

 Th secretan IL-2 y se une a los receptores recin sintetizados para inducir la auto-estimulacin y proliferacin de la clula Th La autoactivacin y proliferacin ya sea de Th1 o Th2 aumenta la accin de CTL o LB Posibilidad de presentacin cruzada de MHC clase I Infecciones por virus neurotrficos tales como herpesvirus alfa o en las infecciones por los virus que infectan a las clulas inmunes (infecciones por lentivirus y paramixovirus) pueden ser detenidas slo por citosinas y efecto de CTLs.

CLULAS T CITOTOXICAS Especializadas en muerte celular por invasin de virus Al menos dos reacciones son necesarias para la realizacin de su efecto Sinapsis inmunolgica por periodos prologados para activacin de genes

Una interaccin requerida para producir la seal 2 es la unin de la protena de CTL CD8 con la protena CD80 de clulas diana.

 Infeccin por varios miembros de las familias Herpesviridae y Retroviridae conduce a la reduccin de la funcin del receptor de clulas T. Formas de asesinar: por induccin a la apoptosis y transferencia de grnulos a clulas diana (perforinas, granzimas). Perforina, hace agujeros en la membrana endosomal. Permite liberacin de granzimas que inducen la apoptosis de la clula. Induccin de apoptosis por ligando FAS (ms lento).

La magnitud de la respuesta de CTL depende de variables tales como el ttulo de viriones infecciosos, ruta de la infeccin, y la edad del hospedador.
El dao heptico causado por el virus de la hepatitis es en realidad debido a efecto de CTLs en las clulas hepticas infectadas.

Las protenas virales pueden bloquear la respuesta CTL con efectos de largo alcance como la muerte rpida del hospedero VIH tipo I codifica 3 protenas que interfieren con la accin de CTL: Nef y Tat inducen la produccin de ligando Fas y posterior apoptosis mediada por Fas de los CTL, mientras Env se acopla con el receptor de quimioquinas CXCR4, lo que provoca la muerte de los CTL

En algunos casos Si los rganos vitales como el cerebro o el hgado estn infectados, la muerte celular puede hacer ms dao que bien. Cuando los CTL especficos para el virus de hepatitis B se transfieren a otro animal (transferencia adoptiva), el INF-gamma y TNF-alfa producido aparecer para eliminar la infeccin de miles de clulas sin su destruccin. Investigado en infecciones de: lentivirus de primates, arenavirus, coronavirus, hepadnavirus, y picornavirus Clulas T CD4 + tambin pueden lograr compensacin no citoltica de algunas infecciones por virus vaccinia, virus de la estomatitis vesicular y el virus Semliki Forest. Produccin y secrecin de citoquinas antivirales CTL proporciona una explicacin sencilla de cmo CTL son capaces de controlar un nmero masivo de las clulas infectadas.

Hipersensibilidad de tipo retardado mediado por clulas T

Algunos ejemplos: Virus del Sarampin Virus de la viruela Virus varicela-Zoster

La respuesta por Anticuerpos

Clulas plasmticas (Clulas B activadas con Ac especficos)

Ligando CD40 CD40

Anticuerpos (Ac)

5 tipos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, definidas por sus cadenas pesadas distintas , , , y

Neutralizacin de virus por Anticuerpos

El mejor ejemplo de la importancia de los Ac en la defensa antiviral es el xito de la vacuna antipoliomielitica en la prevencin de la poliomielitis IgA puede neutralizar el poliovirus directamente en el intestino

En estudios de humanos infectados por el virus de la encefalitis equina oriental y occidental (alfavirus de la familia Togaviridae) pacientes con ttulos altos de Ac se recuperaban, mientras que aquellos con bajos ttulos de Ac eran mas propensos a morir de la encefalitis viral.

IgA, es fundamental para la defensa antiviral en las superficies mucosas

Se asume que el mecanismo primario de neutralizacin viral mediado por Ac es a travs del bloqueo de la interaccin virus-receptor

INMUNOPATOLOGIA

Las lesiones pueden ser causadas por: LTC LT CD4+ (Th1 y Th2)

LB

Linfocitos T citotxicos

Produccin protenas del virus de la hepatitis B en ratones transgnicos no tienen efecto en los animales

Infeccin de ratones con virus de la coriomeningitis linfoctica. La infeccin no es citopatico

CTLs especficos para el virus de la hepatitis B

Lesiones hepticas Induce dao en el tejido solo en animales inmunocompetentes

Linfocitos T CD 4+

LT CD4+ Th1

LT CD4+ Th2

Ratn es infectado con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler.

Ratones inmunosuprimidos infectados

citoquinas proinflamatorias

lesiones menores de las vas respiratorias

activan los macrfagos, y clulas microgliales que median la desmielinizacin de las neuronas.

transferencia adoptiva LT Th2 para Ag especficos virales -> Se agravan

Destruccin de oligodendrocitos

Las lesiones del tracto respiratorio contienen muchos eosinfilos.

Linfocitos B Acumulacin de complejos Ac-virus a altas concentraciones.

Tales complejos no se eliminan de manera eficiente por el sistema retculo-endotelial y continan circulando en sangre

Se depositan en capilares pequeos y causan lesin que se agrava cuando se activa el sistema del complemento

Vasos sanguneos, los riones y el cerebro puede resultar en vasculitis, glomerulonefritis, y confusin mental.

sndrome de respuesta inflamatoria sistmica

Respuesta inmune no proporcional a la infeccin

Tormenta de citoquinas."

Produccin a gran escala y liberacin de citoquinas inflamatorias y mediadores de estres

Muerte del hospedero infectado

Es ingenuo y no ha coevolucionado con el virus invasor. Es muy joven, esta en estado de desnutricin, o cualquier otra anomala.

Los efectos letales del virus de la influenza 1918 se han atribuido a esta respuesta.

Enfermedades autoinmunes

Causada por una respuesta inmune dirigida contra los tejidos del husped

Replicacin viral que conduce a la liberacin y posterior reconocimiento de los antgenos propios

Infeccin conduce a la exposicin de antgenos propios celulares que normalmente estn ocultos desde el sistema inmunolgico Hiptesis popular para la autoinmunidad inducida por el virus establece que las protenas comparten determinantes antignicos virales y del hospedero. Esta idea es a menudo llamado mimetismo molecular

La inmunidad heterloga clulas T

Clulas de memoria del sistema inmune adaptativo permiten una respuesta rpida y especfica posterior a las infecciones encontradas previamente

clulas de memoria no siempre son tan especficas como se pensaba.

Pacientes que sufren de Epstein-Barr virus inducida por la mononucleosis pueden tener una respuesta de clulas T fuerte para un eptopo de virus de la influenza particular en lugar de la respuesta tpica a un eptopo inmunodominante del virus de Epstein-Barr.

Infeccin por virus de la coriomeningitis linfoctica, un areanavirus, proporcionado una proteccin sustancial contra el virus de la vaccinia, un virus de la viruela, pero no viceversa

SUPERANTIGENOS

Protenas virales son extremadamente potentes mitgenos de clulas T. Se unen a molculas de MHC de clase II en las CPAs, e interactan con la cadena V del receptor de clulas T.

En lugar de la activacin de un pequeo subconjunto especfico de clulas T, todos los subconjuntos productoras de la cadena V se activan y proliferan.

Mecanismos mediados por radicales libres Se producen durante la respuesta inflamatoria y puede desempear un papel importante en la patologa inducida por virus

Superxido y oxido ntrico

Producido por la enzima xantina oxidasa, presente en los fagocitos.

Se ha demostrado que inhiben la replicacin de muchos virus en clulas cultivadas y en modelos animales Es probable que acta intracelularmente para inhibir la replicacin viral.

La produccin de O2 se incrementa significativamente en los pulmones de ratones infectados con virus de la influenza o citomegalovirus

Bajas concentraciones tienen un efecto protector. Altas concentraciones o la produccin prolongada contribuye al dao tisular.

Th1 and Th17 hypercytokinemia as early host response signature in severe pandemic influenza
Jesus F Bermejo-Martin1,2, Raul Ortiz de Lejarazu1,2, Tomas Pumarola3, Jordi Rello4, Raquel Almansa1,2, Paula Ramrez5, Ignacio Martin-Loeches4, David Varillas1,2, Maria C Gallegos6, Carlos Sern7, Dariela Micheloud8, Jose Manuel Gomez8, Alberto Tenorio-Abreu9, Mara J Ramos9, M Lourdes Molina10, Samantha Huidobro11, Elia Sanchez12, Mnica Gordn5, Victoria Fernndez6, Alberto del Castillo13, Ma ngeles Marcos3, Beatriz Villanueva14, Carlos Javier Lpez14, Mario Rodrguez-Domnguez15, Juan-Carlos Galan15, Rafael Cantn15, Aurora Lietor16, Silvia Rojo1,2, Jose M Eiros1,2, Carmen Hinojosa17, Isabel Gonzalez17, Nuria Torner18, David Banner19, Alberto Leon20, Pablo Cuesta21, Thomas Rowe19,22 and David J Kelvin19,20,22

Received: 4 Nov 2009 Revisions requested: 2 Dec 2009 Revisions received: 3 Dec 2009 Accepted: 11 Dec 2009 Published: 11 Dec 2009

Introduccin

Infeccin por nvH1N1

Nueva variante

Leves

Hospitalizacin (UCI)

Termino del proceso de manera natural

Pacientes adultos jvenes sanos

Embarazo y enfermedades metablicas (incluyendo la obesidad y la diabetes) se han identificado como factores de riesgo para la enfermedad nvH1N1 severa, del 40 al 50% de los casos mortales no han documentado condicin mdica anterior

 Sndrome respiratorio agudo severo por coronavirus ( SARS CoV ) y H5N1, actan principalmente quimiocinas y citoquinas en situaciones leves y graves. Presencia inicialmente de CXCL10 indican respuestas innatas . Quimiocinas y citoquinas indicativo de respuesta adaptativa.

Hipercitoquinemia, asociado a casos fatales y graves de H5N1

Mtodos

Pacientes y controles

Criterios de inclusin Criterios de exclusin

Pacientes hospitalizados y sintomticos respiratorios (insuficiencia respiratoria) 10

Signo de infeccin bacteriana Menores de 16 aos y mayores de 80 aos Mujeres en estado de embarazo

Hospitalizados no crticos (10)

ambulatorios leves sin insuficiencia respiratoria pero nvH1N1 confirmada (15)

Controles sanos fueron reclutados entre trabajadores de la salud en el Hospital Clnico Universitario de Valladolid y sus familiares. Ninguno con signos de infeccin respiratoria u otro ni condiciones inflamatorias en el momento de la recogida de muestras.

Toma de muestras

1 sola muestra de suero

Muestra de hisopado nasofarngeo

Almacenadas -70C

Enviadas a la OMS

Anlisis del estudio Perfil inmunolgico Inhibicin de hemaglutinacin Carga viral

Diagnostico viral

Diagnostico viral Hisopados nasofarngeos

Diagnostico viral por mtodos automatizados de extraccin de ARN viral (Biomerieux (Marcy l'Etoile, Francia), Roche (Basilea, Suiza

Evaluacin de presencia viral mediante mtodos basados en PCR en TR

Medicin de carga viral Muestras de suero

ARN extrado de sueros de pacientes y procesado en PCR TR

Gen de la neuraminidasa nvH1N1 amplificado mediante PCR-RT en cada muestra Anlisis de las muestras y la curva estndar se llev a cabo utilizando el software de 7500 v2.0.3 rpido (Applied Biosystem ).

Neuraminidasa nvH1N1 : 5'-TCAGTCGAAATGAATGCCCTAA-3' (hacia adelante) y 5 'N1R -CACGGTCGATTCGAGCCATG-3 '(al revs).

Cuantificacin de citoquinas y quimiocinas

Evaluacin de quimiocinas en suero y los niveles de citoquinas utilizando multiplex Biorad 27

Este sistema cuantifica citocinas inflamatorias, citocinas Th1, T17 y Th2 , tambin quimiocinas Th17 , lo que permite la prueba de niveles diferenciales de citoquinas reguladoras en el suero de los pacientes graves y leves.

El interfern , la adiponectina y la leptina se midieron mediante el uso de un ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA) de R & D Systems (Minneapolis, MN, EE.UU.).

Ensayo de inhibicin de hemaglutinacin

Ensayos de HI se realizaron en placas de fondo de microtitulacin de 96 pocillos (Corning Costar Co., Cambridge, MA, EE.UU.)

Los sueros se trataron con enzima destructora del receptor (RDE) de V. cholerae diluyendo una parte de suero con tres partes de enzima y se incubaron durante la noche en un bao de agua a 37 C.

Los eritrocitos usados en el ensayo de IH fueron de pavo al 0.5%

Los datos fueron analizados con el programa SPSS 15.0. el valor de Significancia se fij en el valor de p <0,05

Resultados

Caractersticas de los pacientes Hospitalizados crticos (%) Hospitalizados no pacientes crticos (%) ambulatorios (%)

Fiebre
Tos Dolor de cabeza Cansancio Mialgia Disnea Insuficiencia respiratoria

100
100 90 100 50 90 100

100
90 80 80 80

80
80 40 66 46

Sexo

60% varones (n = 12) y mujeres 40% (n = 8).

53% varones (8) y 47% mujeres (7)

Crticos Ingreso a UCI otros servicios hospitalarios especializados diferentes Antecedentes patolgicos Esquizofrenia Infeccin obstructiva pulmonar crnica Diabetes Asma Infeccin obstructiva pulmonar crnica + VIH Enfermedad crnica del tejido conectivo 10 pacientes 0 pacientes

hospitalizados no crticos 0 pacientes 10 pacientes

pacientes ambulatorios 0 pacientes 0 pacientes

Crticos 1/10 1/10 2/10 ---

hospitalizados no crticos ---2/10 1/10

--

1/10

Antecedentes patolgicos Dislipidemia Cardiopatas Hipertensin Obesidad ( IMM 30) Examen de opacidad en trax por Rx

Crticos 1/10 1/10 1/10 5/10 10/10

hospitalizados no crticos ---3/10 6/10

Los niveles de LDH se aumentaron en los pacientes hospitalizados, sobre todo en los enfermos crticos.

Los pacientes crticos tambin mostraron altos niveles de: CPK GOT GPT Glucosa en la sangre venosa.

Actividad Inhibicin de la Hemaglutinacin

Presente en 2 pacientes crticos de 50 y 51 aos de edad con ttulos de los ttulos de 1/1280 y 1/160, respectivamente Presente en 1 paciente ambulatorio de 25 aos de edad (ttulo 1 / 160) 3 sueros presentaron la misma caracterstica pero por mtodo de microneutralizacin.

Perfiles de mediadores inmunitarios

Elevacin sistmica de quimiocinas que se presentan en la infeccin primaria viral: CXCL-10 (IP-10) CCL-2 (MCP-1) CCL-4 (MIP -1)

crticos

Hosp. No crticos
6.3 [2.3]

ambulatorios

controles

IL-10

22.1 [39.1]

3.8 [1.5]

1.7 [0.6]

Los niveles de mediadores inmunes en los cuatro grupos. * Diferencias significativas con el control p<0,05

Los niveles de mediadores inmunes en los cuatro grupos. * Diferencias significativas con el control p<0,05

Los niveles de mediadores inmunes en los cuatro grupos. * Diferencias significativas con el control p<0,05

Carga viral (+) en suero 57% crticos 50% no crticos 93% Leves

La carga viral en el suero. (De izquierda a derecha: 0: pacientes crticos; 1: hospitalizados (no crtica) de los pacientes; 2: ambulatorios leves).

Se encontraron correlaciones inversas entre la carga viral y la IL-13, IL-17 en pacientes que requieren ingreso en el hospital.

Cuando los niveles de mediadores se correlacionaron con los parmetros clnicos, se encontr una asociacin inversa significativa entre IL-6 y la PaO2 en los pacientes hospitalizados

Discusin
La expresin temprana de CXCL10, CCL2 y CCL4 es indicativo de respuestas antivirales innatas. Aumento de mediadores que estimulan las respuestas de Th-1 (IFN-, TNF-, IL-15, IL 12p70) y Th17 (IL-8, IL-9, IL-17, IL-6) en los pacientes graves.

 Th-17 participa en la limpieza de patgenos durante las reacciones de defensa del hospedero, pero tambin est implicada en la inflamacin del tejido en varias enfermedades autoinmunes, enfermedades alrgicas y el asma
El aumento de citoquinas mediadoras (IFN, IL-8, IL-9, IL-10, IL-13) son indicativo de enfermedad severa IFN- y IL-8 respiratoria mediadores de la respuesta inmune viral y de inflamacin

IL-9 es una citoquina Th2 que induce la diferenciacin de las clulas Th-17 IL10 y IL13 efecto modulatorio, IL13 atena la produccin de citoquinas Th17 IL-17 y TNF- juegan un pape importante cuando se encuentran elevadas.

 Fallecimiento de un paciente despus de la infeccin, con alta carga viral en deteccin de IL17 IL-15, IL-12p70, IL-6 citoquinas claves en la parte critica Altos niveles de mediadores dan respuesta inflamatoria Th1 + Th-17 en el origen de la enfermedad respiratoria grave causada por la infeccin nvH1N1 Un aumento de Th-1 y citoquinas Th17 refleja una respuesta antiviral fuerte necesaria para la eliminacin del virus durante las infecciones respiratorias bajas graves

Capacidad de los virus de influenza A para inducir quimiotxis por produccin (RANTES, MIP-1, MCP-1, MCP-3, e IP-10) y pro-inflamatoria (IL-1, IL-6, IL-18, y TNF-) mediadores relacionados Th1 en gripes estacionales.
Respuesta Th17 como indicativo de la gripe severa en los seres humanos

Conclusiones

Es importante el estudio de la relacin de mediadores Th1 y 1h7 en la respuesta inmune viral Se debe avanzar mas en el estudio de Th17 y su inherencia en la respuesta frente a la infeccin por nvH1N1

La respuesta poco satisfactoria de Th1 en respuesta a infecciones tipo VIH merecen mas atencin
El impacto de otras citoquinas reguladoras (IL-10, IL-13) en la enfermedad grave y en la evolucin de la respuesta inmune del husped a las infecciones nvH1N1 puede representar agentes teraputicos alternativos para el control de una enfermedad grave.