Celulases

Disciplina: Enzimologia Apresentao: Sandy Emilly

1. Introduo

Cerca de 1,8x10 MegaToneladas de biomassa gerada

anualmente.
60% lignocelulose 30-60% celulose
o

Resduos agroindustriais:
o o o o

Bagao de cana Palha de cana Palha de arroz Sabugo de milho

Lignocelulose

Constitudas
polimricas:
o o o

por

trs

principais

fraes

Lignina

Hemicelulose
Celulose

Lignocelulose

Constitudas polimricas:
o

por

trs

principais

fraes

Lignina

Polmero aromtico heterogneo formado por ligaes ter biologicamente estveis, cuja funo aumentar a resistncia da estrutura a ataques qumicos e enzimticos.

Lignocelulose

Constitudas polimricas:
o o

por

trs

principais

fraes

Lignina Hemicelulose

Atua como um elo qumico entre a celulose e a lignina, apresentando natureza, formada, principalmente, por blocos de construo de pentoses, hexoses , cidos urnicos e radicais acetila.

Lignocelulose

Constitudas polimricas:
o o o

por

trs

principais

fraes

Lignina Hemicelulose

Celulose

Polissacardeo composto por glicose, conferem fora e flexibilidade ao material. Encontra-se envolvida pela lignina

Lignocelulose

Constitudas
polimricas:
o o o

por

trs

principais

fraes

Lignina

Hemicelulose
Celulose

Celulose

Potentes

organismos

celulolticos,

tais

como

Trichoderma

produzem

misturas

complexas

de

enzimas necessrias para a solubilizao eficiente desse substrato;

O sistema de enzimas extracelulares produzidas por T. reeset composto por trs componentes principais:
o

Endoglucanases, exoglucanases ou celobiohidrolases e

B-glucosidases ou cellobiases.

A classificao das celulases, de acordo com seu local de atuao no substrato celulsico, as divide em trs grandes grupos:

Endoglucanases
o

Hidrolisam as ligaes glicosdicas ao acaso na fibra de celulose.

Exoglucanases ou celobiohidrolases
o

Agem nas extremidades redutoras e no redutoras de polmeros

gerados pela ao das endoglucanases, liberando celobiose.

B-glucosidases ou cellobiases
o

Hidrolisam oligossacardeos e celobiose glicose.

Celulase

Complexo de enzimas capazes de hidrolisar a celulose at

molculas de glicose e pequenos oligossacardeos;

Produzidas na natureza por vrios organismos terrestres e marinhos; Os mais importantes para sua produo industrial so fungos

filamentosos:
o

Trichoderma

viride,

T.

reesei,

Penicillium

Pinophilum,

P.

funiculosum, Sporotrichum pulverulentum, Fusariurn solani , Aspergillus niger, etc.

Modificados geneticamente

Algumas bactrias tambm so fontes potenciais para a produo em larga escala.

Aplicaes:
Na indstria alimentar, so utilizadas para a extrao e/ou clarificao de sumos de frutas e vegetais, tratamento de vinhos.

Na indstria txtil, utilizada para desbotamento de jeans e para o polimento de tecido celulsico.

Reutilizao de papel usado na indstria da pasta e do papel.

3. Produo

tecnologia

de

produo

depende

do

uso

pretendido para a preparao de celulase!

Para a indstria da polpa, txtil e de papel e algumas aplicaes da indstria de produtos alimentares, pode ser necessrio componentes especficos do complexo parcialmente ou altamente purificados.

3. Produo

tecnologia

de

produo

depende

do

uso

pretendido para a preparao de celulase!

Para aplicaes agro-biotecnolgicas, um complexo de enzima em bruto, contendo celulases, hemicelulases e

pectinases pode ser adequado.

As celulases so produzidas comercialmente por vrias

empresas que utilizam a tecnologia da fermentao

submersa (FSm);

O custo relativamente alto das celulases impulsiona esforos contnuos para reduzir os custos de produo;

O custo de produo pode ser reduzido por uma

tecnologia alternativa, fermentao em substrato slido (FSS).

3.1 Substratos

A seleo de substrato depende da utilizao pretendida para a preparao de celulase.

Se a celulase pura ou um componente da celulase o produto final desejado, fontes de carbono solvel e de azoto, (por

exemplo, lactose e sais amonio) ou celulose pura pode ser

selecionado, pensando de facilitar o processo downstream de purificao.

3.1 Substratos

A seleo de substrato depende da utilizao pretendida para a preparao de celulase.

Para

grande

volume

de

massa

mercadoria,

materiais

lignocelulsicos naturais podem ser utilizados. Resduos vegetais, como subprodutos do milho, bagao de cana, palha de trigo, farelo de trigo, resduos da indstria florestal, madeiras macias e duras, gramneas so adequados para a produo de celulase

Os substratos naturais lignocelulsicos tm de ser pr-tratados para a produo de celulase tima.

cido ou o pr-tratamento alcalino; Vapor; Vapor de NH3; Em alguns casos deslignificao.

Na seleo do substrato, o seu efeito sobre o perfil de enzima produzida deve ser considerado, uma vez que o complexo

de celulase induzvel.

3.2 Inculo

Inculos

miceliais

rpido

crescimento

produo da enzima aps a inoculao;

Desvantagem: produo.

Necessidade

de

conhecimentos

microbiolgicos e controles precisos na instalao de

3.2 Inculo

Inculos de esporos = podem ser preparados numa instalao central, e distribudos para os utilizadores em embalagens estreis.

Inculo de esporos pr-germinados

esporos dos

fungos so revestidos em sabugo de milho e prgerminados em um reator de leito fluidifizado.

Fluxograma
Caldo Fermentado Enzima extracelular Separao slidolquido Concentrao

Purificao

3.3 Biorreatores
3.3.1
o o

Reatores FSm

Geralmente em reatores convencionais (STR); Fementadores de at 230m, meios simples e de baixo custo;

Materiais tais como soro de leite e outros resduos de

vrias plantas;

T. Reesei Rut C30: temperatura tima de fermentao

32-33C e PH 3,5-4,0

O modo operacional mais comum a fermentao descontnua, como o modo mais adequado para

uma pasta altamente viscosa de um substrato

lignocelulsico;

Fermentao descontnua alimentada mais eficiente

Rendimento Produtividade

Fermentao contnua menos eficiente

 3.3.2
o o

Reatores FSS
Reator com oscilao de presso de celulose duplicada em

Reator tipo bandeja o mais utilizado; Promissor

produo

comparao com um reator de bandeja esttico.

3.4. FSm x FSS para a produo de celulose

Celulases

atualmente

so

produzidas

comercialmente por FSm.

Produo por FSS vem ganhando terreno!

FSm prefervel quando as enzimas puras ou componentes de enzimas especficos so

necessrios, e em que a aplicao pretendida pode

suportar o custo elevado da enzima.

FSS prefervel quando o produto bruto fermentado

pode ser utilizado diretamente, por exemplo como

suplemento alimentar, aditivo de silagem, ou fonte de enzima bruta para produo de biocombustvel.

4. Ensaio
Os ensaios so concebidos para detectar atividade
hidroltica geral em substratos selecionados, ou para detectar a actividade de um componente individual da enzima em substratos seleccionados. Os ensaios em uso no medem diretamente a quantidade de enzimas e so, portanto, relativos e diferem marcadamente na sensibilidade e especificidade, dependendo dos substratos utilizados para o ensaio, as condies do ensaio e o sistema de celulase microbiana estudados.

Os principais mtodos utilizados para detectar

a atividade da enzima incluem:

Reduo da viscosidade de uma soluo de um

derivado de celulose;

Produo de acar redutor a partir de um derivado de celulose solvel;

Produo de acares redutores ou a perda de

peso do resduo slido a partir de celulose;

Liberao de um corante de celulose tingido.

O ensaio mais amplamente aceito e utilizado para a

atividade celulase geral a atividade enzimtica

sobre papel filtro (FPA).

Ele

mede

capacidade

de

uma

preparao

enzimtica hidrolisar papel filtro Whatman nmero 1 (1X6 cm, aprox. 50 mg) em acares redutores.

5. Purificao

Depende da utilizao da enzima;

Para aplicaes especficas, necessrio que os

componentes purificados; da enzima sejam altamente

Para

maioria

das

aplicaes

da

agro-

biotecnologia, a enzima bruta ou parcialmente purificada do fluido de cultura desejvel.

1. Centrifugao; 2. ultrafiltrao do lquido (sobrenadante) ultiliza a tecnologia de processos com membranas Se as enzimas forem comercializadas como

concentrados lquidos (por exemplo, Celluclast 1,5 L), a estabilizao do lquido para um armazenamento a longo prazo deve ser providenciado.

Adio de lcoois tais como sorbitol ou acares, tais

como lactose em maior concentrao. Conservantes para suprimir contaminao bacteriana e fngica, tambm tem de ser aplicada.

6. Caracterizao
6.1
o

Indutores
Celulase um complexo de enzima induzvel pela celulose, e outros oligossacridos, celobiose, lactose, soforose, e outros hidratos de carbono facilmente metabolizveis que atuam como indutores aparentes para praticamente todos os organismos que sintetizam celulase.

6.2 Inibidores

As celulases so muitas vezes inibidas pela presena de elevadas concentraes dos seus produtos de hidrlise.

Por exemplo, a maioria dos celobiohidrolases so inibidas

pela celobiose, apesar de a celobiose (> 10 mM) estimular

a atividade da celobiohidrolase II a partir de P. pinophilun.

Presena de quantidades mais elevadas de glucose provoca represso catablica na biossntese de celulase.

7. Concluses e perspectivas

Celulase uma das mais importantes enzimas industriais,

porque torna possvel a utilizao racional da maior

recurso renovvel na Terra, a lignocelulose;

O preo elevado da enzima ainda um dos fatores limitantes no custo de lignocelulose.

O uso generalizado de suplementos alimentares para

animais, contendo parede celular de enzimas de digesto requer um complexo multienzimtico barato, contendo celulases, hemicelulases e pectinases.

Em concluso, a demanda para o uso racional de

lignocelulose ir conduzir a produo de celulases

microbianas no futuro prximo. Melhoramento gentico de fungos e tecnologias mais eficientes, com maior nfase no FSS vo conduzir o preo de celulase para baixo, aceitvel para aplicaes agro-biotecnolgicas. Celulase ter uma parte importante da produo industrial de enzimas.

Obrigada!