CARACTERES DE LAS BACTERIAS

ANATOMIA DE LAS BACTERIAS Ente las principales caractersticas de las clulas bacterianas se encuentran en tamao, la forma, la estructura y la forma de agrupacin. Estos caracteres constituyen la morfologa de la clula. FORMA Y AGRUPACION DE LAS CELULAS BACTERIANAS Los organismos individuales presentan una de las tres formas generales siguientes: elipsoidal, o esfrica; cilndrica, o en forma de barra; y espiral o helicoidal. Las clulas bacterianas esfricas o elipsoidales, se denominan cocos (del griego kkkos, grano). Segn su modelo de agrupacin son: Diplococos: pareja de clulas. Estreptococos: hileras de clulas, semejante a cuentas ensartadas o cadenas. Tetradas: cuatro clulas dispuestas en cuadro. Estafilococos: grupos irregulares, semejante a un racimo de uvas. Sarcinas: agrupamiento en cubo, o sarcia, con ocho o ms clulas.

Las clulas bacterianas cilndrica o en forma de barra (bacillus; plural, bacilli) no se disponen entre s segn la variedad de modelos caractersticos de cocos. A veces se presentan en pareja (diplobacilli) o en cadenas (streptobacilli). Las bacterias de forma helicoidal (spirillum; plural: spirilla) se presentan, en general, como clulas individuales, independientes. Pero las clulas de las diversas especies ofrecen notables diferencias en longitud, en el nmero y amplitud de las espiras, y en la rigidez de las paredes celulares. Algunos de estos organismos son cortos, con vuelta de espira muy prxima; otros son muy largos y presentan una serie de retorcimientos y curvas. Los que son cortos, de espira incompleta, se denominan bacterias comma, o vibrones.

BACTERIAS DE IMPORTANCIA

Familia Pseudomonadaceae 1) Pseudomonas

Bacilos Gram (-), rectos o curvados, mviles, aerobios estrictos. Crecen en un amplio rango de temperatura (refrigeracin hasta 42C). Producen pigmentos. Alterante de alimentos crnicos, leche, hortalizas.

2) Gluconobacter

Bacilos Gram (-), aerobios estrictos. Alteran la cerveza oxidando el etanol a cido actico. En la cerveza, producen turbiedad y viscosidad.

Familia Halobacteriaceae 1) Halobacterium

Son halfilas obligadas (crecen en pescado seco-salado) y casi siempre son cromgenas. H. salinarium produce coloracin roja en los alimentos.

Familia Vibrionaceae 1) Photobacterium

Son cocobacilos y a veces bacilos. Gram (-). A pesar de nos ser frecuente, P. phosphoreum, causa fosforescencia en carnes y pescados

2) Vibrio

Vibrio cholerae Bacilos cortos, Gram (-), curvados o rectos, mviles, anaerobios facultativos. Responsable del clera. Produce una potente toxina. Vibrio parahaemolyticus Causante de gastroenteritis.

3) Campylobacter jejuni

Bacilo Gram (-), no esporgeno. Pleomrfico, mviles. T ptima: 42 45. Reservorio: tracto digestivo de aves, gatos, ovejas, vacas. Causa enterocolitis aguda. Alimentos: carnes, leche, agua.

Familia Enterobacteriaceae 1) Escherichia

Bacilo corto, Gram (-), anaerobio facultativo. T ptima: 37C pH: casi neutro. Aw mnima de cto: 0,95. Cepas productoras de cuadros diarreicos: ECEP, ECEI, ECEH, ECET. Alimentos implicados: Derivados lcteos, carne y sus productos, bolleras, mantequillas, cremas, quesos frescos, etc. Forma parte del grupo coliforme.

2) Enterobacter

Enterobacteria. Bacilos cortos Gram (-). Ampliamente difundido en plantas, granos, aguas y tracto intestinal. Fermentan glucosa y lactosa con produccin de gas. Produce mucosidad y viscosidad en alimentos. Forma parte del grupo coliforme.

3) Serratia

Gram negativo Anaerobio facultativo. Mvil. Muchas de estas especies produce coloraciones rojizas en la superficie de los alimentos. S. marcescens es la especie ms comn

4) Erwinia

Patgenos de vegetales, causan necrosis, agallas, marchitamiento y podredumbre, que lesionan frutas, hortalizas, etc. E. carotovora, causa la podredumbre blanda bacteriana

5) Yersinia
Y. enterocolitica, es patgena para el hombre (enterocolitis). Crece a temperaturas de -1C hasta 40C. Se le relaciona con el consumo de carne de cerdo y leche contaminada.

6) Proteus
Responsable de la alteracin de carnes, productos pesqueros y huevos. Su presencia en alimentos no refrigerados las ha hecho sospechosas de ser causantes de intoxicaciones alimentarias. P. vulgaris es la especie ms comn.

7) Shigella
Varias especies: Sh. Flexneri, Sh. Boydii, Sh. Dysenteriae, Sh. Sonnei. Agente de la disentera bacilar. Hbitat: intestino de hombre y primates. Son muy lbiles. Transportados por alimentos: leche, ostras, salsas, etc. Transmisin: Manipuladores de alimentos.

8) Klebsiella
Presentan cpsula. En tracto respiratorio e intestinal del hombre. Asociado con alteracin de alimentos. Causantes de intoxicaciones alimentarias.

9) Salmonella

La mayora son mviles. Algunos son inmviles. Agentes causantes de la fiebre tifoidea, paratifoidea y gastroenteritis. Contamina quesos, chocolate, mayonesas, leche, agua, alimentos preparados diversos, etc.

Familia Micrococcaceae 1) Micrococcus

Clulas esfricas en masas irregulares, racimos, ttradas. Gram (+), aerobias. Hay especies pigmentadas. Algunos pueden fermentar azucares. Otros son acido-proteolticos. Hay especies halfilas. Muchos son termodricos. Resisten la pasteurizacin de la leche Otros crecen a temperaturas alrededor de 10C A menudo se encuentran en utensilios y equipos usados en alimentacin que no han sido adecuadamente limpiados e higienizados.

2) Staphylococcus

Cocos Gram (+), inmviles, anaerobios facultativos. Crecen en masas irregularmente agrupadas como racimo de uvas Criterio de seleccin: Produccin de coagulasa. Hbitat: Piel, glndulas anexas, mucosas de animales de sangre caliente. Produce intoxicacin alimentaria (enterotoxina). Asociado con muchos alimentos.

Familia Lactobacillaceae 1) Lactobacillus

Son bacilos, largos y delgados. Microaerfilos, Gram (+). Fermenta los azucares dando acido lctico. Homofermentativos: L. vulgaricus. Heterofermentativos: L. brevis. Se encuentran sobre vegetales estircol y producto de lechera. Termodricos. Se han encontrado en carnes refrigeradas. L. viridescens causa enverdecimiento de embutidos.

Famillia Streptococcaceae 1) Streptococcus

Gram (+). Crece en pares o cadenas cortas o largas. Los mas importantes en los alimentos se dividen en 4 grupos: pigenos, viridans, lcticos y enterococos. Grupo pigeno: S. agalactiae, que ocasiona mastitis en vacas y no crecen a 10 ni a 45 C. Grupo viridans: S. thermophilus, importante en la elaboracin de quesos y leches fermentadas. Es termodrico. Crecen a 45C pero no a 10C Grupo lctico: S. lactis se emplea como fermento para quesos, mantequilla. crecen a 10C pero no a 45 C. Grupo enterococos: S. faecalis, crecen tanto a 10 como a 45C. Son termodricos. Toleran 6.5% de sal. Indicadores de contaminacin fecal.

2) Pediococcus

P. cerevisiaea, son cocos aislados, en parejas, en cadenas cortas o en ttradas. Gram (+) y microaerofilos Homofermentativos: cido lctico. Crece bien en salmueras, 5.5% de sal (en encurtidos). crecen a temperaturas de 7 a 45 C. Altera la cerveza donde produce diacetilo que es perjudicial.

3) Leuconostoc

Gram (+), esfrico u oval. Habita superficie de vegetales. Algunos causan problemas en refineras de azcar. Algunas sintetizan dextranos. L. mesenteroides, tolera concentraciones azucaradas de hasta 55 a 60%, altera jarabes, caramelo lquido. L. dextranicum, produce diacetilo, sabor agradable a mantequillla. Heterofermentativo, produce cido lctico y altas cantidades de acido actico, alcohol etlico y dixido de carbono.

Familia Bacillaceae 1) Bacillus

Bacilo esporulado, Gram (+) termorresistente, aerobio o facultativo. Se encuentra en el suelo. Hay especies mesfilas y termfilas B. cereus, produce coagulacin dulce de la leche. Proteoltico. Causante de intoxicacin alimentaria. B. coagulans, puede emplearse en la fabricacin de acido lctico.

2) Clostridium

Bacilos Gram (+), anaerobios estrictos, esporulados, mviles o inmviles. Agentes causantes de intoxicacin alimentaria. Clostridium botulinum, C. perfringens. Hbitat: Suelo, piensos y estircol. Alimentos: Productos crnicos. Alteran conservas vegetales.

Familia Streptomycetaceae 1) Streptomyces

En alimentos, determinan la aparicin de sabores anormales (sabores y olores a moho o a tierra). Aerobios.

Familia Mycobacteriaceae 1) Mycobacterium

M. tuberculosis, causa la tuberculosis. Bacilo cido alcohol resistente. Difundido por alimentos, especialmente por la leche cruda procedente de vacas infectadas.

Genero de clasificacin incierta 1) Alcaligenes

A. viscolactis, Gram (-), causa viscosidad de la leche. Provienen del estircol, piensos, agua y polvo.

2) Flavobacterium

Producen coloraciones (amarillas o anaranjadas) anormales en superficies de carnes. Altera mariscos, aves, huevos, mantequilla y leche. Algunos miembros son psicrtrofos..

3) Acetobacter

Bacilos Gram (-), aerobios estrictos. Mviles. Se encuentran en granos de cereales, vinagre, cerveza, vinos y en frutos y verduras deterioradas. A. aceti oxida el etanol a cido actico.

4) Microbacterium

Bacilos Gram (+), inmviles, aerobios. Homofermentativos, producen cido lctico. M. lacticum es la especie mas abundante. Son resistentes al calor (80 85C durante 10`) Se encuentran en productos lcteos, tales como leche pasteurizada y en polvo.

5) Corynebacterium

Bacilos finos, presentan agrupamiento en empalizada. C. diptheriae (produce la difteria) puede ser vehiculizado por alimentos. C. bovis, es un comensal de la ubre del ganado vacuno, se encuentra en leche, causa mamitis bovina

Familia Brucellaceae 1) Brucella

Bacilo Gram (-), inmvil. T: 37 C. Causa la brucelosis. No crecen en medios de cultivo ordinarios. Crecimiento lento. Serologa (sangre de bvidos: Prueba del anillo) Se le encuentra en carne de animales infectados, leche, queso preparado con leche no pasteurizada.

TAMAO DE LAS CELULAS BACTERIANAS Aunque las bacterias son pequesimas, es posible medir sus dimensiones con relativa facilidad y exactitud. Con este fin, se provee el microscopio con ocular micromtrico. Al observar las bacterias por el microscopio equipado con el ocular micromtrico, las lneas rayadas en este aparecen proyectadas sobre el campo de visin, junto a los microorganismos, con lo que pueden determinarse la longitud y anchura de las clulas. La unidad de medida de las bacterias es la micra (), que equivale a 1/ 1.000 mm. la mayora de las bacterias miden aproximadamente 0.5 a 0.10 por 2.0 a 5.0 .

ESTRUCTURAS BACTERIANAS FLAGELOS Apndices foliformes, sumamente delgados, que sobresalen a travs de la pared celular, y se originan, al parecer, en una formacin granular situada inmediatamente debajo de dicha pared, en el citoplasma Generalmente la longitud del flagelo es varias veces la de la clula, pero su dimetro es slo una pequea fraccin del dimetro de la clula. No todas las bacterias poseen flagelos. Por la fijacin de los flagelos se clasifican en: Pseudomonadales: bacterias con flagelos polares. Eubacteriales: llevan flagelos pertricos. El anlisis qumico de los flagelos sugiere que estan compuetos por una sola protena homognea, llamada flagelina. Como la motilidad de bacterias se debe a los flagelos, y no todas las bacterias son flageladas, se deduce que hay especies mviles y especies no mviles. Los flagelos se mueven con velocidad muy elevada, lo que hace que las bacterias puedan desplazarse con rapidez de muchas veces su longitud por segundo.

FIMBRIAS Muchas bacterias tienen apndices filamentosos diferentes de los flagelos. Estos apndices denominados fimbrias (pelos), son ms pequeos, ms cortos u ms numerosos que los flagelos, y no forman ondulaciones regulares como hacen estos. Se encuentran tanto en las bacterias que no se mueven como en las mviles, y por consiguiente no tienen funcin motora. Se supone que estos pelos sirven como rganos de adherencia. CAPSULAS Algunas clulas bacterianas estn rodeadas de una sustancia viscosa que forma una capa que cubre o envuelve la clula. Esta formacin se denomina cpsula o cubierta mucilaginosa, siendo al parecer la cpsula una estructura ms definida que la cubierta. Las cpsulas tienen importancia, por muchos motivos, para las bacterias y para el hombre. A las bacterias las provee de una cubierta protectora, que puede servir, adems, como depsito de alimentos de repuesto, o como lugar de eliminacin de sustancias de desecho. Para el qumico, la materia capsular ofrece algunos compuestos interesantes y poco frecuentes.

PARED CELULAR Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cpsulas y cubiertas, micilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que est en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la pared celular, que es una estructura rgida que da forma a la clula. Las paredes celulares pueden romperse o destruirse en condiciones especiales. El espesor de la pared celular se ha calculado que es de 10 a 25 m , o sea 100 a 250 A. En la pared celular de las bacterias se han encontrado sustancias antes desconocidas: cido diaminopimlico, cido murmico y cido teicoico.

TABLA N 1 COMPOSICION DE LA PARED CELULAR Y REACCION DE TINCION AL GRAM DE BACTERIAS Y LEVADURAS

ORGANISMO REACCION GRAM COMPONENTES QUIMICOS PRINCIPALES DE LAS PAREDES CELULARES Polisacridos, protena y grasa Polisacridos, protenas Mucopptidos, cidos teicoicos Mucopptidos, cidos feicoicos Mucopptidos, mucopolisacridos, cidos teicoicos Mucopptidos Protenas, polisacridos, grasas, mucopptidos Como E coli Como E coli Como E coli

Saccharomyces cerevisiae Candida spp Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Streptococcus faecalis

+ + + + +

Micrococcus lysodeikticus Escherichia coli Salmonella gallinarium Proteus vulgaris Spirillum serpens

+ -

LA MEMBRANA CITOPLSMICA (PROTOPLSMICA) Se trata de una membrana semipermeable, selectiva, que controla el paso de los elementos nutritivos dentro de la clula y la salida de los productos de desecho. CITOPLASMA Material celular contenido dentro de la membrana citoplsmica, puede dividirse en tres partes: Regin Citoplsmica, de apariencia granular la cual es rica en ARN. Regin Nuclear o Cromatnica, que es rica en ADN y La parte lquida que contiene disueltos los elementos nutritivos.

a. b. c.

RIBOSOMAS Partculas o corpsculos macromoleculares de unos 200 A de dimetro. Contiene numerosas enzimas, especialmente aquellas que intervienen en las sntesis de las protenas. INCLUSIONES CITOPLSMICAS Depsitos de ciertas sustancias(azufre, grasa, polisacridos, etc.) y vacuolas. En muchas bacterias se encuentra tambin grnulos de volutina o grnulos metacromticos (principal componente polimetafosfato).

EL NUCLEO O CUERPO CROMATINICO Las clulas bacterianas no poseen el ncleo caracterstico de las clulas de las plantas y animales superiores. Sin embargo, contienen en el citoplasma cuerpos que se consideran como una estructura nuclear, y el DNA de la clula se encuentra confinado en este espacio. Como no se trata de un ncleo discreto, se ha sugerido que se d a estas estructuras la denominacin de cuerpo cromatnico, nucleoides, equivalentes nucleares y aun cromosomas bacterianos

ENDOSPORAS Algunas bacterias pueden transformarse en pequeos ovoides o esferas, que son formas celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas, por que se producen intracelularmente. Todos los organismos de los gneros bacillus y clostridium se caracterzan, en parte, por su propiedad de producir esporas. Tambin tiene esta propiedad otros gneros bacterias verdaderas, pero slo en casos aislados. de

Entre los caracteres especficos de las esporas hay que considerar su constitucin qumica. Todas las esporas contienen gran cantidad de cido dipicolnico, compuesto que no se encuentra en las clulas vegetativas. La presencia de dicha sustancia parece, pues, restringida a las esporas, donde supone del 5 al 10% del peso de la espora seca. La localizacin dentro de la clula, y su tamao, no es igual en todas las especies de bacterias, ciertas esporas son centrales, otras terminales, y algunas subterminales. En comparacin con las clulas vegetativas, las esporas

PROTOPLASTOS, ESFEROPLASTOS, FORMAS L En los ltimos aos se han ideado procedimientos que permiten separar la pared de la clula bacteriana sin afectar la viabilidad del resto de la clula. Esta estructura viable,procedente de una clula vegetativa, por separacin de la pared celular ntegra (Tratamiento con enzima, lisozima o cultivando el organismo en un medio que evita la sntesis de algn componente de la pared, penicillina) se denomina protoplasto. Si se sintetiza parte del material de la pared celular, las clulas resultantes se denominan esferoplastos. Las formas L son elementos bacterianos no rgidos,elemenos protoplasmicos blandos, sin morfologa definida, que pueden propagarse

CULTIVO DE LAS BACTERIAS El estudio adecuado de los microorganismos exige, como requisito previo, poder cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocer los elementos nutritivos y las condiciones fsicas que necesitan para su crecimiento. EXIGENCIAS NUTRITIVAS Todos los sistemas biolgicos, desde el microorganismo hasta el hombre, comparten una serie de exigencias nutritivas con respecto a los compuestos qumicos necesarios para su crecimiento y funcionamiento normal. * todos los organismos vivos requieren una fuente de energa, ciertas formas de vida, las plantas verdes, pueden utilizar la energa radiante, y se denominan fototrofas. Las que de penden de oxidaciones de compuestos qumicos, se llaman quimiotrofas. * todos los organismos requieren carbono en forma de CO2, y algunas necesitan, adems, compuestos orgnicos de carbono, como los azcares y otros hidratos de carbono.

* todos los organismos vivos necesitan nitrgeno de alguna precedencia. Las bacterias varan mucho en este aspecto; ciertas bacterias pueden utilizar el nitrgeno atmosfrico; algunas lo toman de compuestos inorgnicos, y otras lo derivan de las protenas o prcticamente de todo compuesto nitrogenado que se encuentra en la naturaleza. * todos los organismos vivos necesitan azufre y fsforo. Ciertas bacterias requieren compuestos orgnicos de azufre, otras son capaces de utilizar compuestos de azufre inorgnico, y algunos tienen la singular propiedad de utilizar el azufre elemental. * todos los organismos vivos necesitan para su desarrollo normal varios elementos metlicos, como son: sodio, potasio, calcio, manganeso, magnesio, hierro, cinc, cobre y cobalto. Las

aunque todas las bacterias necesitan vitaminas para el desarrollo de sus procesos fisiolgicos normales, algunas de ellas son capaces de elaborarlas (sintetizarlas) en su totalidad, partiendo de los componentes del medio en que crecen. Otras no crecen cuando el medio no tiene preformadas una o dos vitamina.
*

* todos los organismos necesitan agua para su crecimiento. En las bacterias, como en los vegetales, todos los elementos nutritivos tienen que estar disueltos en agua para que puedan penetrar en el organismo y puedan ser aprovechados.

BACTERIAS AUTOTROFAS Y HETEROTROFAS La divisin ms importante son los dos grupos mencionados. Las auttrofas tienen exigencias ms sencillas en lo referente a sustancias nutritivas. Las bacterias hetertrofas, en este grupo se encuentran todas las bacterias patgenasa para el hombre, los animales y las plantas y los que forman la mayor parte de la poblacin microbiana en su ambiente inmediato.

TABLA N 2 EXIGENCIAS NUTRITIVAS DE ALGUNAS BACTERIAS HETEROTROFAS

BACTER IA Sales inorgnic as X X Carbono orgnico Nitrgeno inorgnic o X X X Un aminoci do Dos o ms aminoci dos Una vitamina Dos o ms vitaminas

Escherich ia coli Salmonell a typhosa Proteus vulgaris Staphyloc ocos aureus Lactobaci llus acidophil us

X X

X X

X X

X X

X X

X X

MEDIOS BACTERIOLOGICOS Para el cultivo de bacterias que tienen exigencias nutritivas tan amplias como los lactobacilos, se necesita una gran cantidad de productos qumicos puros. Pero el cultivo corriente, en el laboratorio de las bacterias hetertrofas, ya sean semejantes a la Escherichia coli o lactobacillus, no se emplean, por lo general, medios sintticos. En vez de estos se utilizan medios compuestos de ciertas materias primas complejas o principios inmediatos como peptonas, extract de carne y extracto de levadura, que puede proveer el crecimiento de gran variedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando hay que utilizar medios sldos se aade agar a los medios lquidos, como agente coagulante o solidificante. Tipos de medios:

Medios enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales Medios para ensayo Medios para contar las bacterias Medios para caracterizar las bacterias.

Preparacin de los medios: Los medios bacteriolgicos se preparan del modo siguiente:

Cada ingrediente, o el medio completo deshidratado, se disuelve en el volumen apropiado de agua destilada. Se determina el pH del lquido y se ajusta si es necesario. Se distribuye el medio en recipientes adecuados, tobos, matraces o frascos, y se obtura la boca de estos recipientes con tapones de algodn o capuchas de plstico o de metal. Se esteriliza el medio, por lo general en

CONDICIONES FISICAS PARA EL CRECIMIENTO TEMPERATURA

La temperatura determina, en parte, el ndice y la magnitud total del crecimiento, as como el metabolismo y morfologa del organismo. Segn este criterio las bacterias pueden dividirse en los grupos siguientes:

Psicrfilas: crecen a 0 C, o menos. Mesfilas: crecimiento ptimo entre 25 y 40 C. Termfilas: crecimiento ptimo entre 45 y 60 C.

NECESIDADES GASEOSAS
En relacin con su respuesta al oxgeno gaseoso, pueden considerarse cuatro tipos bacterianos:

Aerobios: crecen en presencia de oxgeno libre. Anaerobios: crecen en ausencia de oxgeno libre. Anaerobios Facultativos: crecen en presencia o en ausencia de oxgeno libre. Microaerfilos: crecen en presencia de cantidades mnimas de oxgeno libre.

ACIDEZ O ALCALINIDAD (pH) El pH ptimo para el crecimiento de la mayor parte de las bacterias se encuentra entre 6.5 y 7.5. Aunque algunas bacterias pueden crecer en los extremos de la escala de pH, la mayora de las especies tiene los lmites mnimo y mximo entre 4 y 9 aproximadamente. NECESIDADES FISICAS DIVERSAS Los organismos auttrofos fotosintticos, tienen que estar expuestos a un foco de iluminacin, por que la luz es la nica fuente de energa. Las bacterias halfilas slo se desarrollan en medios que contienen concentraciones salinas excepcionalmente elevadas (10 a 15%). ELECCION DE INCUBACION MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE

Para poder elegir en forma conveniente los medios y las variables fsicas, hay que considerar las cuestiones siguientes:

Si las bacterias que se pretende aislar son aerobias o anaerobias.

CRECIMIENTO Y REPRODUCCION
El trmino crecimiento, aplicado a las bacterias y otros microorganismos, se refiere comnmente a las variaciones en la produccin total de clulas, y no a los cambios que experimentan los organismos individuales. REPRODUCCION PROCESOS REPRODUCTORES La modalidad ms comn, y sin duda la ms importante desde el punto de vista del ciclo normal de crecimiento de las poblaciones bacterianas, es la que se conoce como fisin binaria o fisin transversal. Otra forma de reproduccin observada en algunas bacterias es la formacin de un elemento vegetativo filamentoso, que se fragmenta en pequeas unidades, las cuales evolucionan despus dando clulas de tamao normal. Algunas bacterias son capaces de reproducirse por gemacin.

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO Tomando como punto de partida una sola bacteria, el incremento de la poblacin se hace en progresin geomtrica: 1 2 4 8 16 32, etc. No todas las bacterias tienen el mismo tiempo de generacin; para algunas, como la Escherichia coli, es de 15 a 20 minutos, para otras puede ser de varias horas. La calidad y cantidad de los elementos nutritivos disponibles en el medio y en las condiciones fsicas ambientales predominantes dan lugar a variaciones en el tiempo de generacin

TABLA N 3 TIEMPOS DE GENARCION DE VARIAS ESPECIES DE BACTERIAS Bacteria Medio Temperat ura C 37 55 37 37 37 37 25 37 37 37 37 Tiempos de generacin Min. 28 18.3 17 12.5 66 87 792 932 344 461 27 30 48 26 1.980

Bacillus mycoldes Bacillus thermophilus Escherichia coli Lactobacillus acidophilus Mycobacterium tuberculosis Rhizobium japonicum Staphylococcus aureus Streptococcus lactis Treponema pallidum

Caldo Caldo Caldo Leche Leche Sinttico Sales minerales levadura + manita Caldo Caldo lactosado Leche Testculo de conejo

CURVA DE CRECIMIENTO DE LA POBLACION BACTERIANA

Fase retardada, o fase lag. Fase logartmica o exponencial Fase estacionaria Fase descendente o de mortalidad

CULTIVO CONTINUO DE BACTERIAS Por muchos motivos, experimentales o prcticos, conviene mantener constante la poblacin en la fase experimental o log del crecimiento en ambiente uniforme. Los dispositivos que se utilizan para conseguir esto son el turbidostato y el quimiostato. En el turbidostato se estima la cantidad de crecimiento en funcin de la turbidez u opacidad del cultivo. El quimiostato funciona tambin aadiendo y retirando simultneamente el medio de la vasija de cultivo.

CRECIMIENTO SINCRONICO La poblacin total se conserva as uniforme con respecto al crecimiento y divisin, condicin que se llama crecimiento sincrnico. Este estado puede conseguirse actuando sobre las condiciones fsicas o sobre la composicin qumica del medio de cultivo. DETERMINACION CUANTITATIVA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

Determinacin del nmero de clulas por enumeracin microscpica directa en un frotis teido o en una suspensin bacteriana contenida en una cmara de recuento. Determinacin del nmero de clulas con capacidad de multiplicacin en determinadas condiciones, por el recuento en placa. Determinacin de la densidad de una suspensin de clulas por medidas pticas, utilizando el colormetro o el espectrofotmetro: determinaciones turbidimtricas. Determinacin de la concentracin celular por valoracin del contenido de nitrgeno. Determinacin del peso de las clulas en seco. Determinacin de la masa de clulas por valoracin de la transformacin qumica especfica producida en un componente del medio.

CULTIVOS PUROS Y CARACTERES DEL CRECIMIENTO CULTIVOS PUROS Se entiende por cultivo puro una poblacin de clulas, todas las cuales proceden de una sola. METODOS DE AISLAMIENTOS DE CULTIVOS PUROS

Tcnicas de siembra en placa, en estras y en superficie: Sobre la superficie de un medio slido se deposita con un asa de inoculacin una pequea cantidad de la muestra bacteriana, y se distribuye rayando la superficie o extendindola sobre ella. Para hacer la extensin en superficie se utiliza comnmente una varilla de vidrio encorvada esterilizada. En esta operacin se va extendiendo las bacterias sobre la superficie del agua; las bacterias individuales se separan unas de otras. Tcnica de vertido en placa: En este caso, la dilucin de la muestra, con la consiguiente extensin de la poblacin bacteriana, se realiza en tubos de medio de agua fundidos. Tcnica de enriquecimiento del cultivo: En principio, se trata de proporcionar un medio ambiente de cultivo (medio nutritivo de composicin conocida y condiciones especficas de incubacin) destinado a favorecer el crecimiento del tipo particular de bacteria que se busca, e impropio para el desarrollo de otros tipos. Tcnica de dilucin en serie: Tambin en este caso es recomendable confirmar con la siembra en placa la pureza del cultivo aislado. Tcnica de aislamiento de una sola clula: En este procedimiento se utiliza, asociado al microscopio, un instrumento especial el

MANTENIMIENTO Y CONSERVACION DE LOS CULTIVOS PUROS

METODO DE CONSERVACION

El mtodo de conservacin y mantenimiento debe conservar todos los caracteres de la especie tal como son en el original. Algunas de las tcnicas que se emplean son las siguientes:

Transferencia peridica a un medio reciente. Conservacin cubriendo los cultivos con aceite mineral. Conservacin de los cultivos por desecacin rpida en estado de congelacin (liofilizacin).

CARACTERISTICAS DE LOS CULTIVOS (CRECIMIENTO)

Para determinar las caractersticas de crecimiento de un cultivo puro es costumbre observar los siguientes tipos de cultivos:

Colonias en agar nutritivos (cultivos en placas). Crecimiento en agar inclinado. Crecimiento en caldo. Crecimiento del picado en gelatina

METODOS DE INOCULACION

Crecimiento en estras sobre agar (inclinado) Crecimiento en caldo nutritivo. Crecimiento de picado en gelatina.

ENZIMAS La palabra enzima fue adoptada en 1878 por Kuhne, y es un vocablo derivado del griego, que significa en la levadura. Se consideran dos tipos de enzimas, segn el lugar en que actan: enzimas intracelulares o endoenzimas y enzimas extracelulares o exoenzimas. La funcin principal e las enzimas extracelulares es realizar sobre las sustancias alimenticias que se encuentran en el medio externo de las transformaciones necesarias para que los elementos nutritivos puedan penetrar en la clula. Las enzimas intracelulares sintetizan el material celular, y adems, activan las reacciones catablicas que proveen las demandas energticas de la clula.

ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS Las enzimas son protenas o combinaciones de protenas con otros grupos qumicos. Poseen las propiedades caractersticas de las protenas; esto es, se desnaturalizan por el calor, precipitan por el etanol o con concentraciones elevadas de sales inorgnicas, como el sulfato amnico, y no se dializan a travs de membranas semipermeables. ESPECIALIDAD Las dos propiedades ms notables de las enzimas son: (1) la elevada actividad cataltica, y (2) su alto grado de especificidad para los sustratos.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS

1.Nomenclatura basada en el nombre del substrato activado. Las enzimas se designan por el sufijo asa. a Substrato: clase de compuesto
Enzima Protena Hidrato de carbono Grasa Acido ribonucleico b. Proteinasa Carbohidrasa Lipasa Ribonucleasa

Substrato: compuesto especco Enzima Lactosa Sacarosa Urea Celulosa Lactasa Sacarasa (o invertasa) Ureasa Celulasa

2. Nomenclatura basada en el tipo de reaccin catalizada. Las enzimas se designan por el sufijo asa
Reaccin Oxidacin Reduccin Descarboxilacin Separacin de hidrgeno Oxidasa Reductasa Descarboxilasa Deshidrogenasa Enzima

NATURALEZA DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS La ecuacin que se utiliza para explicar una reaccin enzimtica general es la siguiente: Enzima (E) + substrato Complejo enzima-substrato (ES) Producto(P) + enzima (E) De este esquema de reaccin puede decirse que: El trmino substrato se refiere al compuesto o sustancia sobre el que acta la enzima. La transformacin del substrato se efecta despus que se realiza la unin entre la enzima y el substrato. Los compuestos resultantes de la transformacin del substrato se denominan productos de la reaccin. La enzima no se consume en la reaccin, sino que queda libre despus de formarse los productos finales, y dispuesta para combinarse con dems substratos y producir nuevas transformaciones. El proceso es reversible, segn se muestra en el siguiente resumen de la reaccin completa: E S P

MECANISMO DE LA ACCION ENZIMATICA La activacin de la molcula del substrato tiene por causa la elevada afinidad qumica (electrnica) de dicho substrato por ciertas zonas en la superficie de la enzima o centros activos. MECANISMOS QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS La actividad de las enzimas est influda, entre otras por, por las condiciones siguientes:

Concentracin de la enzima. Concentracin del substrato. pH Temperatura.

INHIBICION DE LA ACCION ENZIMATICA Inhibicin de las enzimas sucenico deshidrogenasa. La enzima succnico deshidrogenasa cataliza la transferencia de hidrgeno a un compuesto aceptor apropiado. Inhibicin de las enzimas que contienen metales. Ciertos agentes qumicos presentan gran afinidad por los iones metlicos, formando compuestos complejos con el metal.

TIPOS DE REACCIONES ENZIMATICAS

Reduccin: incorporacin de hidrgeno o electrones. Oxidacin: separacin de hidrgeno o electrones. Deshidratacin: separacin de una molcula de agua del substrato. Hidrlisis: introduccin de los elementos del agua en algn enlace especfico del substrato, seguida de la escisin del substrato por dicho enlace. Desaminacin: separacin del grupo NH2 (amino). Descarboxilacin: separacin de CO2 del grupo COOH (carboxilo). Fosforilacin: adicin de un grupo fosfato a una molcula orgnica. Transferencias de grupo: transferencia de un grupo qumico de una molcula a otra, como en la transaminacin y en la transmetilacin. Isomerizacin: conversin del sustrato en una forma isomrica; como la conversin de la L D alamina en una mezcla de iguales cantidades de ambas formas (mezcla racmica).

CONDICIONES QUE AFECTAN A LA FORMACION DE LAS ENZIMAS Con respecto a la naturaleza del substrato y la formacin de enzimas, Karston, en 1930, dividi las enzimas bacterianas en dos grupos:

Enzimas constitutivas: las que la clula produce siempre, con dependencia de la composicin del medio en que crece. Enzimas adaptativas (inducidas): las que la clula produce nicamente como respuesta a la presencia de un substrato particular.

DETECCION Y MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Examinemos la reaccin: Substrato == Producto (S) Segn la naturaleza del substrato, puede comprobarse la existencia de reaccin por: 1. a. Determinacin de un cambio fsico en el substrato. b. Estimacin cuantitativa del substrato antes y despus de la reaccin, para averiguar si su cantidad ha disminuido. 2. a. Determinacin de la presencia de producto (S).

METODOS DE ESTUDIO DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS

Espectofotmetro: una de las propiedades que caracterizan algunos compuestos orgnicos es la absorcin especfica de la luz de una longitud de onda determinada. Respirmetro de Warburg: el aparato de Warburg se utiliza para seguir el desarrollo de las reaccciones enzimaticas en que se producen intercambios gaseosos. Tubo de Thumberg: en esta tcnica se utiliza como aceptor artificial de hidrgeno el azul de metileno, que tiene color azul cuando est oxidado y es incoloro cuando se reduce. Mtodos con radioistopos: por este mtodo pueden determinarse cuales de los tomos del substrato pasan a cada uno de los productos finales. Cromatografa: puede determinarse la identidad de los componentes desconocidos de la mezcla problema comparando el cromatograma experimental con el obtenido con un sistema patrn conocido.

SISTEMAS ENZIMATICOS

La forma de utilizar todos estos materiales es la siguiente: Tcnica del cultivo en crecimiento. Tcnica de clulas en reposo Tcnica de enzimas exentas de clulas.

METABOLISMO BACTERIANO
RELACIONES ENERGETICAS Desde el punto de vista energtico, las reacciones qumicas se consideran exoergnicas (productoras de energa) o endoergnicas (que requieren energa). FUENTES DE ENERGIA Las fuentes de energa para todos los sistemas biolgicos son la energa radiante, que se utiliza en el proceso de la fotosntesis, y la energa qumica, utilizable de la oxidacin de los compuestos muy diversos. FOTOSINTESIS El proceso por el cual las clulas verdes de transforman la energa radiante en energa qumica. OXIDACIONES BIOLOGICAS Oxidacin es la prdida de electrones por un substrato. las plantas

Respiracin: como ejemplo de sistemas aerobios de aporte energtico que se presentan en las bacterias auttrofas pueden citarse las siguientes:

La oxidacin de amonaco a nitrito por los Nitrosomonas. La oxidacin de nitrito a nitrato por los Nitrobacter. La oxidacin del azufre por el Thiobacillus Thiooxidans.

Fermentacin: en los procesos de fermentacin, el substrato es tambin oxidado por deshidrogenacin, pero el hidrgeno liberado no es fijado por oxgeno.

EL ALMACENAMIENTO Y LA UTLIZACIN DE ENERGA La energa liberada en una reaccin ha de quedar captada o incorporada en un compuesto capaz de retenerla, transferirla o desprenderla, segn sea necesario. CAPTACIN Y ACOPIO DE ENERGA La energa liberada de la oxidacin queda captada por algn enlace entre los tomos de una molcula. DESASIMILACION DE LOS HIDRATOS DE CARBONO Las sustancias de esta clase son numerosas y variadas, pero todas estn compuestas de carbono, hidrgeno y oxgeno. Grupo A Monosacridos. Grupo B Disacridos Trisacridos. Polisacridos.

Degradacin de hidratos de carbono ms complejos que los monosacridos: En general, la desarticulacin de los compuestos pertenecientes a los tipos registrados en el grupo B tiene lugar fuera de las clulas por accin de enzimas exocelulares. Los poli, di y trisacridos se escinden en sus componentes monosacridos en reacciones de hidrlisis. Degradacin de los monosacridos (glucosa): Los azcares sencillos despus de penetrar en la clula, experimentan la accin de las enzimas intracelulares, siendo estas reacciones la fuente principal de energa para el organismo. Proteolisis
El proceso de degradacin de las pretenas se denomina proteolisis (hidrlisis de protenas) y se lleva a cabo por enzimas proteolticas exocelulares segregadas por las bacterias. Puede considerarse que la protelisis ocurre en dos fases, como sigue:

Las enzimas llamadas proteinasas degradan las protenas en molculas ms sencillas, cada una de las cuales presenta un fragmento de la protena original. La segunda fase realiza la conversin de los polipptidos en aminocidos, por enzimas denominadas peptidasas.

Degradacin de los aminocidos. Los aminocidos que ingresan en las clulas pueden ser utilizados como piezas fundamentales, para componer las protenas, o pueden ser dometidos a degradacin ms avanzada por uno de los re mecanismo de ataque siguientes: