TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR. APLICACIONES CLNICAS.

Capilla de la Torre Cabrera UGC de Oncologa Mdica Complejo Hospitalario de Jan

3. CONCEPTOS BSICOS
3.1 GEN 3.1.1. EXONES E INTRONES 3.1.2.ONCOGENES 3.1.3.GENES SUPRESORES DE TUMORES 3.1.5.POLIMORFISMOS 3.2 MUTACIONES 3.2.1.TIPOS DE MUTACIONES 3.2.1.AGENTES MUTAGNICOS

HISTORIA
caracteres de padres a hijos.

GEN

Mendel los llam factores y eran los responsables de la transmisin de

Johannsen (1909) acu el nombre de gen a partir de una palabra griega

que significa "generar", refirindose a la unidad fsica y funcional de la herencia biolgica. que formaban parte de los cromosomas.

Primer tercio del siglo XX, Morgan concluy que los genes eran partculas 1950 pruebas definitivas sobre la naturaleza molecular del gen y se descubri que los genes estn constituidos por ADN Actualmente se sabe que algunos genes codifican ms de una protena y
que una protena puede ser codificada por el conjunto de diferentes genes. Adems existen algunos genes que no codifican protenas sino ARN. DEFINICIN MS EXTENDIDA fragmento de ADN que contiene toda la informacin necesaria para la sntesis de una protena o un ARN.

ESTRUCTURA DEL GEN

*secuencia lineal organizada de nucletidos en la molcula de ADN
gen

GEN

*Se disponen a lo largo de ambas cromtidas de los cromosomas ocupando en el cromosoma una posicin determinada llamada locus.

REGIONES
La regin promotora es una porcin del ADN situada al principio del gen y que, sin codificar ningn aminocido, sirve para que las enzimas que realizan la transcripcin reconozcan el principio del gen. La regin codificadora contiene la informacin para la sntesis de protenas. En la regin codificadora van a existir fragmentos de ADN que no contienen informacin: los intrones, y fragmentos que s que contienen informacin: los exones.

La regin terminadora. Marca el final del gen.

PROMOTOR
EXN INTRN EXN INTRN

TERMINACIN

REGIN CODIFICADORA

ESTRUCTURA DEL GEN

ALELO
GEN
CLULA DIPLOIDE

2 ALELOS

* Cada una de las formas alternativas que puede tener un gen. * Se diferencian en su secuencia. * Cada par de alelos se ubica en el mismo locus o lugar del cromosoma.

ALELO MADRE ALELO PADRE

ESTRUCTURA DEL GEN

ALELO
DOMINANTE
se manifiesta fenotpicamente tanto en homocigosis como en heterocigosis

RECESIVO
se manifiesta fenotpicamente en homocigosis

INDIVIDUOS
HOMOCIGOTOS HETEROCIGOTOS

GENOMA
CONJUNTO DE GENES DE UN ORGANISMO Y POR TANTO DE LOS CROMOSOMAS QUE LO COMPONE

GENOMA HUMANO

23 pares de cromosomas

22 pares de autosomas

1 par de cromosomas sexuales

TIPOS DE GENES
CONSTITUTIVO
SE ENCUENTRA COSNTANTEMENTE EXPRESADO EN UNA CLULA U ORGANISMO

ESTRUCTURAL

CODIFICA PARA LA SECUENCIA DE AMINOCIDOS DE UNA CADENA POLOPEPTDICA

LETAL

SU EXPRESIN CAUSA LA MUERTE PREMATURA DEL INDIVIDUO

REGULADOR

ACTA ACTIVANDO O INHIBIENDO LA TRANSCRIPCIN DE OTROS GENES

TIPOS DE GENES
HOMETICO
REGULA LA EXPRESIN DE GRUPOS DE GENES IMPLICADOS EN EL DESARROLLO EMBRIONARIO
AQUEL QUE CODIFICA PARA UNA PROTENA QUE DIRECTA O INDIRECTAMENTE ES TXICA Y PRODUCE LA MUERTE CELULAR

SUICIDA

ONCOGN

AQUEL CUYA EXPRESIN PROMUEVE EL PROCESO DE ONCOGNIESIS O TRANSFORMACIN CELULAR INHIBE LA PROLIFERACIN CELULAR, EVITANDO EL CRECIMIENTO DESCONTROLADO Y PROMOVIENDO EL MANTENIMIENTO CORRECTO DE LA CLULA

GEN SUPRESOR DE TUMORES

ONCOGN
PROTO-ONCOGN Genes especficos que se expresan de forma normal en las clulas Pueden estar activo o reprimidos dependiendo la etapa del desarrollo en que se encuentre el organismo. Forman parte de los sistemas de transmisin de seales que llevan al crecimiento, proliferacin, diferenciacin y muerte celular. Estn regulados de forma precisa.
ALTERACIONES GENTICAS

ONCOGN
UN ONCOGEN ES UN PROTOONCOGN ALTERADO

ONCOGN
CARACTERSTICAS

Conllevan mutaciones que dejan a sus productos gnicos

(protenas) siempre activos.

En todos los casos su expresin es dominante. Se asocian con el desarrollo de tumores. Se han identificado cerca de un centenar de oncogenes

Mariano Barbacid consigui aislar un gen humano mutado capaz de causar cncer nunca antes aislado: el oncogn humano H-ras (en carcinoma de vejiga)

CLASIFICACIN DE LOS ONCOGENES

SEGN EL LUGAR DE ACCIN SEGN LA FUNCIN DE LA PROTENA CODIFICADA

EXTRACELULAR MEMBRANA CITOPLASMA NCLEO

CODIFICAN PROTENAS G

CODIFICAN FACTORES DE CRECIMIENTO O SUS RECEPTORES

CODIFICAN PROTENAS QUINASAS DE SERINATREONINA Y DE TIROSINA CODIFICAN FACTORES DE TRANSCRIPCIN NUCLEAR CODIFICAN PRODUCTOS QUE AFECTAN A LA APOPTOSIS

extracelular citoplasma ncleo membrana

CLASIFICACIN DE LOS ONCOGENES

SEGN EL LUGAR DE ACCIN
Los oncogenes pueden codificar protenas que actan a diferentes niveles de la cascada de sealizacin que activa la proliferacin celular:

EXTRACELULAR
ONCOGN

EXCESO DE PRODUCCIN DE FACTORES DE CRECIMIENTO

NIVEL EXTRACELULAR

PROLIFERACIN INCONTROLADA

SARCOMAS Y GLIOMAS PRODUCEN EL FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO DE PLAQUETAS (PDGF)

CLASIFICACIN DE LOS ONCOGENES

SEGN EL LUGAR DE ACCIN
MEMBRANA
ONCOGN

PRODUCE VERSIONES ONCOGNICAS DE RECEPTORES CELULARES PARA FACTORES DE CRECIMIENTO, QUE TRANSMITEN UNA SEAL DE PROLIFERACIN HACIA EL INTERIOR CELULAR EN AUSENCIA DE FACTORES DE CRECIMIENTO EN EL EXTERIOR

PROLIFERACIN INCONTROLADA
NIVEL DE MEMBRANA

las clulas tumorales de mama a menudo expresan receptores Erb-B2 que funcionan de este modo

CLASIFICACIN DE LOS ONCOGENES

SEGN EL LUGAR DE ACCIN
CITOPLASMA
ONCOGN

Se generan versiones oncognicas de protenas citoplsmicas de la cascada de sealizacin que se mantienen activas siempre

PROLIFERACIN INCONTROLADA

NIVEL CITOPLASMTICO

oncogn Ras se encuentra presente en carcinomas de colon, pncreas y pulmn

CLASIFICACIN DE LOS ONCOGENES

SEGN EL LUGAR DE ACCIN
NCLEO
ONCOGN

factores de transcripcin o secuencias asociadas constitutivas (siempre activas)

PROLIFERACIN INCONTROLADA

oncogenes que codifican para factores de transcripcin constitutivos son myb, fos, jun, erb-A y rel.
NIVEL NUCLEAR

SEGN LA FUNCIN DE LA PROTENA CODIFICADA

Oncogenes que codifican protenas G Ras mantiene en su forma activada y la proliferacin celular contina. Oncogenes que codifican factores de crecimiento o sus receptores Sis codifica el factor de crecimiento PDGF, cuya produccin excesiva estimula la proliferacin celular. Oncogenes que codifican protenas quinasas de serina-treonina y de tirosina Src es una quinasa de tirosina que produce seales intracelulares, muchas de ellas relacionadas con la proliferacin celular. Oncogenes que codifican factores de transcripcin nuclear Myc causa el paso de G0 a G1 en una proliferacin celular que no debera ocurrir. Oncogenes que codifican productos que afectan a la apoptosis Bcl-2, al estar sobreexpresado, suprime la apoptosis.

ALTERACIONES GENTICAS QUE GENERAN LOS ONCOGENES

MUTACIONES PUNTUALES GEN RAS
mutacin puntual en el codn 12. cambio de glicina por valina. protena activa.

TRANSLOCACIONES

GEN ABL

leucemia mieloide crnica: translocacin entre la banda q34 del cromosoma 9 y la q11 del cromosoma 22

ALTERACIONES DEL NMERO DE CROMOSOMAS

GEN MET

Existencia de un cromosoma 7 extra en el carcinoma renal papilar que tiene como consecuencia la duplicacin de un alelo mutado del protooncogn met El oncogen ErbB-2 o HER-2/neu aparece amplificado en los tumores de mama y ovario

AMPLIFICACIN GNICA

GEN erbB2

GENES SUPRESORES DE TUMORES

CICLO CELULAR
CONJUNTO DE ACONTECIMIENTOS POR EL QUE UNA CLULA SE DIVIDE EN DOS CLULAS HIJAS

POSEE PUNTOS DE CONTROL, CRUCIALES PARA SU CORRECTO DESARROLLO

LOS GENES SUPRESORES DE TUMORES ACTAN COMO REGULADORES NEGATIVOS DEL CICLO CELULAR

GENES SUPRESORES DE TUMORES

CARACTERSTICAS

se encuentran en las clulas normales. codifican para protenas que actan como reguladores
negativos del ciclo celular.

normalmente inhiben la proliferacin celular excesiva. intervienen en el proceso tumoral si sufren mutaciones
que los inactivan, es decir, si se produce una prdida de funcin.

este tipo de mutacin tiene un efecto recesivo.

GENES SUPRESORES DE TUMORES

GEN SUPRESOR DE TUMORES

INACTIVACIN DE LOS DOS ALELOS

PRDIDA DE FUNCIN

CLULAS ADQUIEREN PROPIEDADES PROLIFERATIVAS ANORMALES

ALTERACIONES GENTICAS QUE GENERAN LOS GENES SUPRESORES DE TUMORES

INACTIVACIN DEL GEN

MUTACIONES PUNTUALES DELECCIONES INSERCIONES PRDIDA DE HETEROCIGOSIDAD HIPERMETILACIN DE LOS PROMOTORES

GEN SUPRESOR DE TUMORES p53

GUARDIN DEL GENOMA
SE ENCUENTRA INACTIVADO EN MS DE LA MITAD DE LOS TUMORES HUMANOS

GEN p53
SINTETIZA ACTIVACIN

PROTENA p53

DIVISIN CELULAR

vigilar la secuencia normal de acontecimientos genticos que permiten la proliferacin celular

DAO

GEN SUPRESOR DE TUMORES p53

MATERIAL GENTICO CELULAR MATERIAL GENTICO CELULAR

DAO

MUTACIN

p53

P53*

APOPTOSIS

PROCESO TUMORAL

POLIMORFISMOS
A lo largo del genoma humano se han identificado multitud de regiones en las que la secuencia no es igual en todas las personas. La forma en que cambia la secuencia de estas regiones es muy diversa. El anlisis de la poblacin ha demostrado que para cada una de estas regiones es posible identificar 2 o ms formas alternativas o alelos. Por ello se habla de polimorfismos genticos

Frecuencia > 1% Se pueden localizar en cualquier zona del genoma No implican un fenotipo patolgico Suelen influir en la efectividad a un determinado tratamiento

simples: CAMBIOS EN UN SOLO NUCLETIDO (SNP)* complejos: AFECTAN AL NMERO DE COPIAS DE UNA
DETERMINADA SECUENCIA EN UN LOCUS

POLIMORFISMOS
SNP: CAMBIOS EN UN SOLO NUCLETIDO

POLIMORFISMOS DE UN SOLO NUCLETIDO (SNPs)

Desde el punto de vista biolgico

tienen gran importancia, ya que determinan la mayor parte de la variabilidad gentica de los individuos, causando muchas de las diferencias fenotpicas (observables) de los mismos (grupos sanguneos, color de ojos...)

Desde el punto de vista clnico

las diferentes alternativas de un determinado SNP pueden determinar, por ejemplo, diferente propensin a desarrollar una enfermedad, una mayor agresividad clnica de la misma o diferencias en la forma de responder al tratamiento.

MUTACIONES
ALTERACIONES AL AZAR EN EL MATERIAL HEREDITARIO Cualquier cambio en la secuencia de nucletidos del ADN.

MUTACIN

CLULAS SOMTICAS

La mutacin no se transmite a las generaciones sucesivas

CLULAS GERMINALES

La mutacin contina en las generaciones sucesivas.

Facilita la evolucin

MUTACIONES
MUTACIONES
surgen como consecuencia de la exposicin a mutgenos qumicos o biolgicos o a radiaciones.

Mutaciones inducidas

Mutaciones espontneas

se producen de forma natural o normal en las poblaciones

TIPOS DE MUTACIONES
TIPOS DE MUTACIN SEGN SUS CONSECUENCIAS Mutaciones morfolgicas - Afectan a la morfologa y distribucin corporal. - Modifican el color o la forma de cualquier rgano. - Suelen producir malformaciones.

Mutaciones letales y deletreas

- afectan la supervivencia de los individuos. - Cuando la mutacin no produce la muerte, sino una disminucin de la capacidad del individuo para sobrevivir y/o reproducirse, se dice que la mutacin es deletrea. - son recesivas.

TIPOS DE MUTACIONES
TIPOS DE MUTACIN SEGN SUS CONSECUENCIAS

Mutaciones condicionales
- slo presentan el fenotipo mutante en determinadas condiciones ambientales (denominadas condiciones restrictivas).

Mutaciones bioqumicas
- Son cambios que generan una prdida o un cambio de alguna funcin bioqumica. - Se detectan ya que el organismo que presenta esta mutacin no puede crecer o proliferar en un medio de cultivo por ejemplo, a no ser que se le suministre un compuesto determinado.

TIPOS DE MUTACIONES
TIPOS DE MUTACIN SEGN SUS CONSECUENCIAS

Mutaciones de prdida de funcin

- suelen determinar que la funcin del gen en cuestin no se pueda llevar a cabo correctamente, por lo que desaparece alguna funcin del organismo que la presenta.

Mutaciones de ganancia de funcin - existen raras ocasiones donde una mutacin puede producir una nueva funcin al gen, generando un fenotipo nuevo.

TIPOS DE MUTACIONES
TIPOS DE MUTACIN SEGN SUS CONSECUENCIAS
SUSTITUCIONES DE BASES PUNTUALES

INSERCIONES
DELECIONES DUPLICACIONES

MUTACIONES GNICAS

VARIOS NUCLETIDOS INVERSIONES TRANSPOSICIONES

MUTACIN MUTACIONES CROMOSMICAS

DELECIONES DUPLICACIONES INVERSIONES TRASLOCACIONES

MUTACIONES GENMICAS

POLIPLOIDA HAPLOIDIA ANEUPLOIDIA

TIPOS DE MUTACIONES
MUTACIONES GNICAS
PUNTUALES Afectan a un solo nucletido

SUSTITUCIONES DE BASES: se cambia una base nucleotdica por otra INSERCIONES: adicin de un nucletido DELECIONES: prdida de un nucletido

VARIOS NUCLETIDOS

Afectan a ms de dos nucletidos de un mismo gen

DUPLICACIONES: repeticin de un fragmento de ADN dentro de un gen INVERSIONES: un segmento de ADN se invierte en el interior de un gen TRANSPOSICIONES: un segmento de un gen cambia de posicin para
estar en otro punto del gen

TIPOS DE MUTACIONES
MUTACIONES GNICAS
Gen supresor tumoral

delecin

gen BRCA2

Prdida de un nucletido

Protena BRCA2*

incapaz de arreglar las mutaciones que se producen en otros genes

Divisin incontrolada

incremento del riesgo de sufrir cncer de mama

TIPOS DE MUTACIONES
MUTACIONES CROMOSMICAS
Afectan a la estructura del cromosoma

DELECIONES: prdidas de algn segmento

DUPLICACIONES: son repeticiones de un

cromosmico con prdida de material gentico

segmento cromosmico dentro del cromosoma

INVERSIONES: un segmento del cromosoma se

rompe y posteriormente se vuelve a unir, pero en posicin invertida

TRASLOCACIONES: variaciones estructurales en

las que un fragmento de cromosoma pasa a unirse a un cromosoma homlogo o no

TIPOS DE MUTACIONES
MUTACIONES GENMICAS
Afectan al nmero de cromosomas del organismo

POLIPLOIDA: aumento del nmero de juegos de cromosomas

AUTOPLOIDES: todos los juegos de cromosomas iguales POLIPLOIDES ALOPLOIDES: los juegos de cromosomas son diferentes

*MUY LIMITADA A ESPECIES ANIMALES *LAS PLANTAS SE ADAPTAN BIEN A LA POLIPLOIDIA

HALOPLOIDA: disminucin del nmero de juegos cromosmicos

TIPOS DE MUTACIONES

ANEUPLIODA: afecta slo a uno o a los dos cromosomas de las

parejas de homlogos
Causa un gran desequilibrio gnico POR DEFECTO NULISMICOS: falta una pareja de cromosomas homlogos

MONOSMICOS: falta un solo cromosoma de la pareja de homlogos

TRISMICO: Tiene un cromosoma en exceso POR EXCESO MONOSMICOS: tiene dos cromosomas en exceso.

TIPOS DE MUTACIONES
ANEUPLOIDAS MS IMPORTANTES EN HUMANOS
ANEUPLOIDAS EN LOS AUTOSOMAS

TIPOS DE MUTACIONES
ANEUPLOIDAS MS IMPORTANTES EN HUMANOS
ANEUPLOIDAS EN LOS CROMOSOMAS SEXUALES

AGENTES MUTGENOS
MUTACIONES

INDUCIDAS

ESPONTNEAS

AGNTES MUTGENOS

CUALQUIER AGENTE QUE POR PROCEDIMIENTOS FSICOS, QUMICOS O BIOLGICOS PUEDE INDUCIR LA APARICIN DE UNA MUTACIN O INCREMENTAR LA TASA DE MUTACIONES DE UN ORGANISMO

ALTERACIN DEL MATERIAL GENTICO

AGENTES MUTGENOS
AGENTES FSICOS
oRAYOS GAMMA RADIONES ELECTROMAGNTICAS oRAYOS X oRAYOS UV

RADIACIONES CORPUSCULARES oULTRASONIDOS oCHOQUE TRMICO oCENTRIFUGACIN

oRAYOS ALFA oRAYOS BETA oFLUJO DE PROTONES O NEUTRONES

ANTES DESPUS

OTROS

UV

AGENTES MUTGENOS
AGENTES QUMICOS

ANLOGOS DE BASES COMO EL BROMOURACILO CIDO NITROSO

DESAMINA BASES NITROGENADAS

ALCALOIDES COMO CAFENA, NICOTINA, ETC. AGENTES ALQUILANTES COMO EL GAS MOSTAZA.

BENZOPIRINA, CICLAMATO, ETC.

AGENTES MUTGENOS
AGENTES BIOLGICOS

* Transposones
*Segmentos mviles de ADN que pueden cambiar de posicin, trasladndose a otro lugar dentro del mismo u otro cromosoma. *Originan mutaciones cuando causan una activacin o inactivacin gnica no deseada al insertarse en los genes estructurales o en los reguladores.

*Virus
*Pueden producir cambios en la expresin de algunos genes. *Se cree que los virus mutagnicos podran realizar su accin al llevar en su genoma fragmentos de ADN tomados de una clula previamente infectada que incorporaran a la nueva clula parasitada.

Gracias !!!