Regulación de La Eficacia Catalítica

REGULACIÓN DE LA EFICACIA
CATALÍTICA
Los modificadores alostericos de la actividad

enzimática, sitio alosterico. Efectos y
fenómenos alostericos. Efecto alosterico
positivo, efecto alosterico negativo, Inhibición
Feed-Back.
Gráfica de Michaelis_Menten
Variación de la actividad enzimática con la concentración de
sustrato: Esta gráfica demuestra la formación de un complejo
enzima-sustrato
Modificadores Alostericos
Regulacion Eficacia Catalitica:
Actividad enzimática
Nivel de saturación de la enzima
Concentración de sustrato
Supongamos ahora que la dirección desea aumentar la producción y
aumenta progresivamente el suministro de piezas para hacer relojes
(S/h) según indica en la gráfica.
Tabla de datos
60
S/ h R/h
Relojes fabricados por hora (R/h)
0 0
50
Gráfica real 10 10
20 20
40 30 30
40 40
50 40
30
60 40
70 40
20
10
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
100 Suministro de piezas por hora (S/h)
 Ligando que producen un
cambio de la actividad
enzimatica , pero que no se
modifica como resultado de la
actividad enzimatica, se
denomina efectores,
modificadores o moduladores,
 La fijación del efector alosterico
provoca un cambio conformacional en
el enzima, de modo que también
cambia la afinidad hacia el sustrato u
otros ligandos
 El centro alosterico donde se une el
efector positivo se conoce como
activador; el efector negativo se une a
un centro inhibidor
 Clase K, el efector altera la Km, pero
no la Vmax y dan graficas de dobles
reciprocos similares a las obtenidas
con inhibidores competitivos ; la
fijacion de un efector negativo a un
centro alosterico afecta la afinidad de
un centro de fijacion de sustrato hacia 4
el sustrato
 Clase V, el efector no altera la Km, pero si la Vmax y dan
graficas de dobles reciprocos similares a las obtenidas
con inhibidores no competitivos ; los modificadores
alostericos positivos y negativos incrementan o
disminuyen la velocidad de descomposicion del
complejo ES en productos
 La constante de velocidad catalitica k queda afectada
3
mientras que no se modifica la constante de fijacion de
sustrato
 Enzimas oligomericas, constan de varias subunidades
(Protomeros)
 Interaccion Homotropica, la fijación del ligando a un
protomero puede afectar a la fijación de ligandos sobre
los otros protomeros del oligomero, son casi siempre
positivas, la transmision de efectos se considera un
aspecto de la cooperatividad 5
 Interaccion Heterotropica, es el efecto de
un ligando sobre la fijación de un ligando
diferente, puede ser negativo o positivo, y
pueden tener lugar en enzimas monomericas
 Influencia de un efector negativo sobre la fijación de sustrato
 Influencia de un efector negativo sobre la fijación de un
activador alosterico
 En enzimas oligomericas, tanto los efectos heterotropicos
como los homotropicos están mediados por la
cooperatividad entre subunidades
6
7
REGULACIÓN DE LA EFICACIA
ALOSTERICOS
 Sitio alostericos
 Control de la actividad Enzimática por
modificadores no covalentes
 Una enzima alosterica es un dímero, con
subunidades idénticas A-A
 A tiene un sitio activo y está localizado entre las
dos subunidades del modelo
 El lado de unión de modificador alosterico se
encuentra en lado remoto del sitio activo
8
9
10
Bacterial pyrimidine biosynthesis
through aspartate transcarbamolyase
Active/inactive conformations
PHOSPHOENOLPYRUVATE
ADP
_ citrate, ATP , alanine
ATP
+ fructose-1,6-bisP, PEP
PYRUVATE
Regulación alosterica de la Piruvato quinasa
12
Otra característica importante de las enzimas alostéricas
es que presentan cinéticas anómalas, normalmente
cinéticas sigmoides:
v
La presencia de una
sigmoide implica
la existencia de
cooperatividad en la
fijación del substrato
13
s
La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijación de una
molécula de substrato favorece la fijación del siguiente, y así
hasta ocuparse toda la molécula
s + s s + s s + s s
1 2
s 3
s s
En términos de Km veríamos que Km1 > Km2 > Km3
Existe también cooperatividad negativa, cuando la fijación de

una molécula de substrato dificulta la fijación del siguiente.
14
Cinéticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina
1.0
Y
0.8 Mioglobina
0.6
0.4
Hemoglobina
0.2
0.0
0 2 4 6 8 10 12
s
Efecto del pH sobre la saturación de la hemoglobina
(Efecto Bohr)
100
80 pH 7.0
pH 7.4
Saturación de O2, %
60
pH 6.6
40
20
0
0 20 40 60 80 100
PO2, mmHg
Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturación de la hemoglobina
100
80
Saturación de O2, %
0
60 0.1 mM
1 mM
40
20
0
0 20 40 60 80 100
PO2, mmHg
Inhibidores y activadores
alostéricos
1.0
Y
(+ Activador)
0.8
V+
0.6
(sin efectores)
V0
0.4
(+ Inhibidor)
0.2
V-
s
0.0
0 2 4 6 8 10 12
19
20
21
Modelo MWC
Forma R
L
Forma T 22
Intrinsic Enzyme Dynamics in the Unbound State and Relation to Allosteric Regula
Curr Opin Struct Biol. 2007 December ; 17(6): 633–640
Inhibición alostérica.
sustrato
Enzima activa
Sin inhibidor
Enzima
inactiva
Los inhibidores
alostéricos se unen a una
zona de la enzima y con inhibidor
cambian la configuración
del centro activo de tal
manera que impiden que
el sustrato se pueda unir inhibidor
a él.
D Efector
Alosterico
Negativo
La Inhibición por retroalimentación : inhibición de una
enzima en una vía biosintetica mediante el producto final
(D); capacidad de D para fijarse o inhibir de Enz1 a Enz3
D se une a un sitio alosterico , tiene poca o ninguna
similitud estructural de los sustratos de las enzimas que
ellos inhiben
24
Sitios de inhibición por la retroalimentación de una
vía biosintetica ramificada, S1-S5 son intermediarios
en los productos finales A-D . Las flechas directas
representan enzimas que catalizan las
transformaciones indicadas. Las flechas curvadas
representan asas, lazos de retroalimentación , e
indican sitios de inhibición de retroalimentación en
productos finales específicos 25
 Allosteric modulation refers to the concept that proteins could
exist in multiple conformational states and that binding of
allosteric ligands alters the energy barriers or isomerization
coefficients between various states. In the context of ligand
gated ion channels such as nicotinic acetylcholine receptors
(nAChRs), it implies that endogenous ligand acetylcholine binds
at the orthosteric site, and that molecules that bind elsewhere
on the nAChR subunit(s) acts via allosteric interactions. For
example, studies with the homomeric alpha7 nAChRs indicate
that such ligand interactions can be well described by an
allosteric model, and that positive allosteric effectors can affect
energy transitions by (i) predominantly affecting the peak
current response (Type I profile) or, (ii) both peak current
responses and time course of agonist-evoked response (Type II
profile). The recent discovery of chemically heterogeneous
group of molecules capable of differentially modifying nAChR
properties without interacting at the ligand binding site
illustrates the adequacy of the allosteric model to predict
functional consequences. In this review, we outline general
principles of the allosteric concept and summarize the profiles
of novel compounds that are emerging as allosteric modulators
at the alpha7 and alpha4beta2 nAChR subtypes.
 Bertrand D; Gopalakrishnan M [Ad] Dirección: Department of
Neuroscience, CMU, Medical Faculty, Geneva, Switzerland.
daniel.bertrand@medecine.unige.ch [Ti] Título: Allosteric
modulation of nicotinic acetylcholine receptors. [So] Fuente:
Biochem Pharmacol;74(8):1155-63, 2007 Oct 15
26
27
Review: Allosteric Mechanisms of Signal Transduction .Jean-Pierre Changeux and Stuart J.
Edelstein
Science 3 June 2005: 1424-1428
28

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