IMMUNOHISTOQUMICA

PRINCIPIOS BSICOS
Luis E. Ferrer Torres, MD FCAP Immunopathology and Molecular Pathology Laboratory

INMUNOHISTOQUMICA

Es una tcnica para identificar componentes celulares o de los tejidos basndose en el principio de las interacciones entre los antgenos y anticuerpos
Antgenos: una molcula que induce la formacin de un anticuerpo y que tiene uno o ms lugares donde un anticuerpo puede unirse a ella. Esas regiones de la molcula que tienen la capacidad de unirse al anticuerpo esta formado por secuencias de amino cidos o carbohidratos y se conocen como eptopes Anticuerpos: Un tipo de protena srica que se conoce como inmunoglobulina

Especifidad
-Cuan selectivo es el anticuerpo en adherirse a un antgeno

Sensitividad
- Cuanto antgeno es capaz el anticuerpo de detectar. Ej. Una tcnica ms sensitiva es capaz de detectar menos antgeno y viceversa

TCNICA DE IHQ TCNICA GENERAL

1.

2.

3.

4.

5.

Corte Deparafinar e hidratar Recuperacin de antgeno o antigen retrieval Bloqueo de actividad o afinidad endgena Anticuerpo primario

6.

Sistema de deteccin o visualizacin

Cromgeno para AP o para HRP

7.

8.

Contraste Montaje: base acuosa o resina

TCNICA DE IHQ

Corte

Agua destilada Laminillas cargadas

Deparafinar e hidratar
Temperatura NO >60 C Nuevas soluciones permiten que se lleve a cabo en el mismo paso de recuperacin de antgeno

TCNICA DE IHQ
Recuperacin de antgeno: el proceso de fijar los tejidos puede ocultar o alterar los eptopes de las moleculas
1. 2.
1.
1. 2. 2.

Tcnicas: qumicas o enzimticas Qumicas:

Depende de amortiguador pH bajo: citrato pH 6.0 alto pH: EDTA pH 9.0 Tcnica de aplicacin: incubacin, olla de presin, vapor

3.

Enzimaticas: tripsina, proteinasa K

TCNICA DE IHQ
Mtodos de deteccin o visualizacin Directo Indirecto APA APAP Avidina-Biotina Dextran

El

anticuerpo esta ligado directamente al marcador que detectar la presencia o no del antgeno para el cual esta dirigido el anticuerpo
Baja

TCNICA - DIRECTA

sensitividad
Todava

la utilizamos para IF

Se

utiliza un anticuerpo primario de otra especie diferente a la humana en contra de el antgeno que estamos tratando de identificar (ratn o conejo)
Se

TCNICA - INDIRECTA

utiliza un segundo anticuerpo (anticuerpo secundario) contra la especie de animal del cual este creado el anticuerpo primario y este tiene el visualizador
Ms

2o

1
o

sensitivo

Peroxidase Anti Peroxidase

APA Y APAAP

Alkaline Phosphatase Anti- Alkaline Phosphatase

AVIDIN-BIOTIN

(No biotin)

DEXTRAN

VARIABLES QUE AFECTAN EL PROCESO DE

INMUNOHISTOQUMICA

Pre-analtica

Fijacin
Tipo: formalina amortiguada y neutralizada 10%(V/V) Tiempo 6-48 horas

Temperatura

<60 C

Deshidratacin

Alcoholes graduados

Clarificacin Impregnacin

VARIABLES QUE AFECTAN EL PROCESO DE

INMUNOHISTOQUMICA

Analtica
Manual Automatizado Sistema de deteccin o visualizacin Efecto de orilla Efecto de secado Efecto de lavado incompleto

EGFR