Inmunoglobulinas Anticuerpos monoclonales

Antgenos

Antgeno: sustancia puede ser reconocida por un Ac, desencadena la formacin de los mismos y puede causar una respuesta inmune. Determinante o eptope: No todas las partes de una molcula inmunognica son capaces de inducir una respuesta inmune. La porcin de la molcula capaz de inducirla puede estar limitada a unos pocos aminocidos. La antigenicidad se pierde si la molcula es desnaturalizada por accin de diferentes agentes fsicos o qumicos. Otros determinantes antignicos son lineales, es decir, sus aminocidos estn ordenados en forma continua y no pierden su capacidad antignica.

CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS ANTICUERPOS

Los anticuerpos (Ac) son glucoprotenas del tipo gammaglobulina. Son los receptores de los linfocitos B (BCR).
Se encuentran en los lquidos biolgicos: plasma (o suero), secreciones mucosas y lquido intersticial tejidos (menor cantidad). Los Ac siempre inician sus efectos biolgicos mediante su unin a los antgenos (Ag). Pueden reconocer casi cualquier clase molcula biolgica (metabolitos, azcares, lpidos,
hormonas, HdC complejos, fosfolpidos, c. nucleicos y protenas),

aunque solo las macromolculas inician la respuesta LB. Los Ac pueden unir Ag en su conformacin natural o linealizados.

 Los Ac no son enzimas, y, salvo raras excepciones, no modifican la estructura covalente de los antgenos (Ag).

Caractersticas de la unin antgenoanticuerpo

Unin complementaria similar a la de una enzima con su sustrato!

La unin Anticuerpo-Antgeno (Ac-Ag)

es puramente no covalente (reversible), pero habitualmente fuerte y altamente especfica para un Ag concreto. Esta dada por puentes de H, fuerzas de Van de Waals y fuerzas hidrofbicas.

Algunos conceptos de la unin Ag-Ac

Afinidad: fuerza del enlace entre la regin de unin del Ac y el eptope del Ag (1 sola unin, indep. nro sitios de unin). Avidez: la fuerza total de unin de un Ac multivalente a un Ag multivalente (depende del nro de sitios de unin). IgM compensa su falta de afinidad con una gran avidez, ya que tiene 10 lugares de unin!!!!!

ESTRUCTURA DE LOS ANTICUERPOS

Las cadenas livianas (L) pueden dividirse en dos regiones: una variable (VL) y
una constante (CL). Las cadenas pesadas (H), en una variable (VH) y tres constantes (en el caso de la IgG): CH1, CH2, CH3.

Cada una de ellas tienen

del macrfago.

funciones especficas. As: VL y VH es el sitio de

fijacin del antgeno; en CH2 se fija el complemento; CH3 es el sitio de fijacin Existen ms de 107 (hasta 109) molculas de Ac distintas en cada individuo!!!

Regin hipervariable (Zona Bisagra)

FORMAS EN QUE LOS ANTICUERPOS PROTEGEN AL HUESPED DE LA INFECCION

DIFERENCIAS ISOTIPICAS
Diferencias entre las regiones constantes debido al empleo de genes de regiones C diferentes.

DIFERENCIAS ALOTIPICAS
Diferencias debidas a la existencia de distintos alelos del mismo gen C.

DIFERENCIAS IDIOTIPICAS
Se refiere a la secuencia de aminocidos singulares de las regiones variables de molculas homogneas producidas por un clon nico de linfocitos B. Por lo tanto hay tantos idiotipos como clones de linfocitos B.

Isotipos de Ig

Clases:
Cada una tiene una funcin efectora distinta; sta depende de la porcin Fc.

Subclases

Clase de Inmunoglobulina (Ig)

Cadena pesada

Diagrama

Distribucion

Actividad Biolgica

IgA

or

Secreciones externas

IgD

Receptor de la superficie LB

IgE

Clulas que secretan histamina

Alergia

IgG

Anticuerpo principal en el suero El ms estable

Promueve la citotoxicidad celular dependiente de Ac (ADCC) Fijacin del complemento

IgM

Primer Ac secretado en el desarrollo

Fijacin complemento

4 subclases.

En compartimentos intra y extravascular.

IgG

70-75% de las Ig totales en suero.

Aparece tardamente en la respuesta primaria, y predomina en la secundaria. Activan el complemento (IgG1, IgG2 e IgG3).

Atraviesa la placenta (nico! Todos las subclases).

Media funciones como fagocitosis, CCDA y liberacin de mediadores inflamatorios.

IgM

Se encuentra en forma de pentmero.

10% de Igs.

Es la mejor en activar el complemento.

Intravascular (muy grande!) excepto en inflamacin (acceso a lecho extravascular).

Respuesta primaria.

Puede ser producida en forma natural (antes) o luego de la exposicin a un Ag.

IgE

Se encuentra en bajas cantidades en el suero

Sus principales receptores estn en los basfilos y mastocitos. Asociado a hipersensibilidad tipo I, alergias.

Inmunidad ante parsitos.

IgA

Es la que ms se produce!

Principal Ig asociada a inmunidad en mucosas y secreciones (leche materna), compartimento vascular.

Se encuentra como monmero en el suero y como dmero en las secreciones.

transitocisis

IgD

Menos del 1% de Igs.

Principalmente en la membrana de linfocitos B maduros.

Funcin poco conocida.

Anticuerpos Monoclonales
Anticuerpos Policlonales Producidos por distintos clones de Linfocitos, reconocen diferentes epitopes de un mismo Ag Anticuerpos Monoclonales Producidos por un mismo clon de Linfocitos, reconocen el mismo epitope de un Ag

Ag
LB

LB LB LB

LB

LB
LB LB LB

Cesar Milstein 1927-2002

Se disgrega el bazo del raton inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B (escasa viabilidad en cultivo) y se fusionan con clulas de mieloma deficientes en enzimas implicadas en la sntesis de novo ADN como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina) donde las clulas mielmicas son eliminadas. Tan slo las clulas producto de la fusin entre un linfocito y una clula de mieloma son capaces de crecer en medio HAT. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones celulares se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas.

Anticuerpos monoclonales

Diferencias entre anticuerpos policlonales y monoclonales

Ac Policlonales Ac Monoclonales

Epitopes que reconocen

Especificidad Afinidad Costo relativo

Varios
Variable Variable Bajo

Unico
Alta Fija Alto

APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES

1.- Investigacin biomdica

Identificacin y clonaje de genes Identificacin y aislamiento de protenas Activacin de enzimas Arquitectura molecular, morfognesis

2.- Diagnstico

Hormonas, vitaminas, citocinas, factores tisulares, etc. Monitorizacin de drogas Enfermedades infecciosas, microbiologa Alergia Hematologa Trazadores de tumores e infartos de miocardio Inmunoescintografa Aplicaciones forenses Tcnicas (ELISA, EIA, citometra, inmunohistoqumica, inmufluorescencia, etc.)

3.- Catlisis 4.- Biosensores 5.- Terapia

Enfermedades autoinmunes Trasplantes (rganos, mdula sea) Enfermedades infecciosas (virales, bacterianas y parasitarias) Cncer

6.- Otras aplicaciones:

Degradacin del colesterol Modulacin de hormonas Modulacin de receptores Reversin de sobredosis de drogas