ENZIMAS

Definicin
En las clulas vivientes la mayora de los catalizadores son molculas proteicas denominadas ENZIMAS. Formadas por: Apoenzima (funcin proteica) Cofactor (funcin no proteica)
este puede ser un Ion metlico (Fe,Mg,Zn,Ca) o una molcula orgnica denominada coenzima

Propiedades de las Enzimas

Las enzimas catalizan reacciones especificas y lo hacen de manera muy eficiente y con muchos pasos de control. Las siguientes son 3 propiedades importantes de las enzimas: Sumamente especificas Muy eficientes Sujetas a una gran variedad de controles celulares

Clasificacin y Nomenclatura

La elevada especificad de las enzimas sirve de fundamento a su clasificacin y nomenclatura. Para la clasificacin se toma como fundamento la Especificad de Accin y para la nomenclatura ambas especifidades.

Clasificacin

Oxidorreductasas Deshidrogenasas Oxidasas Hidroxilasas Transferasas Quinasas Hidrolasas Fosfatasas

Liasas Hidrotasas Isomerazas Isomerazas Mutasas Epimerasas Ligazas Sintetizas Sintasas

Oxidorreductasas: catalizan las reacciones de oxidorreduccin, o sea, la transferencia de electrones o sus equivalentes entre un donante y un aceptor. Transferasas: catalizan la transferencia de un grupo qumico entre un donante y un aceptor excluyendo las que transfieren electrones o sus equivalentes, que pertenecen a la clase anterior y aquellas en que el aceptor del grupo es el agua, pues pertenecen a la clase siguiente. Hidrolasas: catalizan la ruptura de enlaces qumicos con la participacin de molculas de agua. Liasas: generan o hacen desaparecer dobles enlaces en forma no oxidativa. Isomerazas: catalizan la interconversion de isomeros. Ligazas: catalizan la unin covalente de 2 sustratos utilizando cualquier fuente de energa.

Oxidorreductasas

Deshidrogenasas: sustraen tomos de hidrogeno (siempre un par) de los sustratos y los transfieren a una molcula aceptora que no es el oxigeno

Oxidasas: sustraen tomos de hidrogeno de los sustratos y los transfieren al oxigeno.

Hidroxilasas: catalizan la introduccion de funciones hidroxilo en sus sustratos utilizando oxigeno molecular como donante

Transferasas

Quinasas: catalizan reacciones de transferencia de grupos fosfato aportados por nucleosidos trifosfatados, habitualmente el ATP.

Hidrolasas

Fostatasas: catalizan la ruptura de enlaces ster fosforicos.

Liasas

Hidratasas: adicionan agua a los dobles enlaces.

Isomerazas

Isomerazas: interconvienen ismeros de funcin.

Mutasas: interconvienen isomeros de posicin.

Epimerasas: interconvienen epimeros.

Ligazas

Sintetasas: catalizan la unin covalente de dos sustratos utilizando la energa de hidrlisis de enlaces anhdrido fosforito como los de nucleosidos trifosfatados.

Sintasas: catalizan la unin covalente de dos sustratos utilizando la energa de hidrlisis de enlaces que no son anhdrido fosforito, como el tioster del siguiente ejemplo.

Nomenclatura
Aunque existen algunas enzimas que tienen nombres triviales como la Tripsina, la Quimiotripsina y la Pepsina, existen dos tipos de nomenclatura para las enzimas que son: la sistemtica y la recomendada. La Sistemtica solo se utiliza en revistas y textos cientficos. La Recomendada es la de uso comn y viene a ser una forma abreviada de la sistemtica; en ella se nombra primero el sustrato seguido de la accin que realiza la enzima terminada con el sufijo asa.

Ejemplos

Oxidorreductasas

Sustrato Succinato, accin deshidrogenacion,

Nombre: Succinato deshidrogenada.

Sustrato Aminocido, accin oxidacin,

Nombre: Aminocido oxidasa.

Sustrato Fenilalanina, accin hidroxilacion,

Nombre: Fenilalanina hidroxilasa. Transferasas

Sustrato Glicerol, accin quinasa,

Nombre: Glicerol quinasa. Hidrolasas son las mas fciles de nombrar, pues basta con hacer terminar el nombre del sustrato en el sufijo asa. Sustrato Glucosa-6-P, accin fosfatasa, Nombre: Glucosa-6-fosfatasa.

Liasas Sustrato Fumarato, accin hidratasa, Nombre: Fumarato hidratasa. Isomerazas Sustratos Glucosa-6-P y Fructosa-6-P, accin isomeraza, Nombre: Glucosa-6-P:Fructosa-6-P isomeraza o simplemente fosfohexosa isomeraza. Sustratos Glucosa-6-P y Glucosa-1-P, accin mutasa Nombre: Glucosa-6-P:Glucosa-1-P mutasa o fosfoglucomutasa. Sustratos Glucosa-6-P y Galactosa-6-P, accin epimerasa, Nombre: Glucosa-6-P:Galactosa-6-P epimerasa. Ligazas Sustratos Acido Actico y Coenzima A, accin sintetasa, Nombre: Acetal CoA sintetasa. Sustratos Oxalacetato y Acetil-CoA, accin sintasa, Nombre: Citrato sintasa.

Importancia Clnica

Se sintetizan en el interior de las clulas y la mayora realiza all sus funciones, pero otras son segregadas y funcionan en la matriz extracelular, la sangre, el tubo digestivo u otros sitios del espacio extracelular. Pueden encontrarse libres o unidas a membranas; pueden asociarse a otras enzimas y formar Complejos Multienzimaticos. Pueden contener mas de un Centro Activo cataltico, denominadas Enzimas Multifuncionales. Isoenzimas: catalizan la misma reaccin, mismos requerimientos, presentando propiedades diferentes. Algunas reacciones catalizadas por enzimas son comunes a la mayora de las clulas. ( presentes en casi todos los tejidos del organismo). Otras reacciones son exclusivas de algunas clulas, como es el caso de las del hgado. Tienen una distribucin determinada y en cada compartimiento subcelular se relacionan con algn proceso que en este ocurre. Aun dentro de cada compartimiento puede existir una distribucin. En la sangre las enzimas presentes, como las de la coagulacin y las intracelulares que son liberadas por el recambio tisular normal, por lo que no tienen funciones en ella.

En las personas sanas las enzimas intracelulares presentes en el plasta es prcticamente constante, estos valores refleja el dao de algn tejido que se acompaa de un incremento de la liberacin de enzimas a la sangre. Algunos ejemplos de lo anterior son la elevacin de la Glutamato-Piruvato Transaminasa ( TGP ), en enfermedades del hgado como la hepatitis, y de la Glutamato-Oxalacetato Transaminasa ( TGO ), la Fosfo Creatina Quinasa ( CPK ) y la la Lactato Deshidrogenada ( LDH ) en el infarto cardiaco; de tal forma la elevacin de estas enzimas puede utilizarse en el diagnostico, seguimiento y pronostico del paciente. Se usan como reactivos para la determinacin de ciertas sustancias en una muestra biolgica, como la Ureasa para la determinacin de Urea en plasma, la Glucosa Oxidasa para la determinacin de Glucosa en sangre y la Peroxidasa en los inmunoensayos enzimticos como los ensayos de la Enzima Ligada a Inmunoadsorbente (ELISA). Son usadas en el tratamiento de algunas afecciones, de las mas conocidas son la Estreptoquinasa, usada en el tratamiento del infarto de corazn, ya que disuelve los cogulos que se forman en la circulacin sangunea del msculo de este rgano, la Quimiotripsina en el tratamiento de abscesos y la Amilasa en los casos de deficiencia como en las pancreatitis.

Cintica Enzimtica
La velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas puede ser modificada por la accin de diversos factores. El comportamiento de esa velocidad y su modificacin debido a la presencia de diferentes agentes fsicos o qumicos constituye el objeto de estudio de la Cintica Enzimatica. Los factores que modifican la velocidad de las reacciones enzimaticas pueden qumicos o fsicos y son: Concentracin de enzima. Concentracin de sustrato. Concentracin de cofactores. Concentracin de iones Hidrogeno (pH). Concentracin de Activadores. Concentracin de Inhibidores. Temperatura.

Efecto de la concentracin de Sustrato

A mayor concentracin de sustrato mayor es la velocidad de reaccin, sin embargo los incrementos en la velocidad no son uniformes sino cada vez menores.

A mayor concentracion de enzima (E) mayor Vo, siempre que el sustrato se encuentre en exceso.

La primera explicacin para este comportamiento fue expuesta por LEONOR MICHAELLIS y LEONORA MAUD MENTEN en 1913. Segn ellos la primera etapa (formacin del complejo enzima-sustrato) ocurre de manera rpida y la segunda etapa (transformacin de sustrato en producto liberando enzima) resulta ser la mas lenta, por lo que es el paso limitante de la reaccin. A concentraciones muy elevadas de sustrato se produce un efecto de saturacin y casi toda la enzima se encuentra en forma de complejo enzimasustrato. En este momento se habr alcanzado la mayor velocidad posible para la reaccin (Vm)

As se obtiene la forma habitual de la ecuacin de Michaellis y Menten: Vm (S) Vo= ------------------Km + (S) Donde: Vo= Velocidad Inicial Vm= Velocidad Mxima (S)= Sustrato Km= Constante de Michaellis, es un ndice de la afinidad de la enzima por el sustrato, ( a mayor afinidad por el sustrato menor ser el valor de Km ).

Efecto de la concentracin de Cofactores

Muchas enzimas requieren para su accion de otra molcula denominada cofactor por lo que su presencia es decisiva para el desarrollo de la reaccin. Para todos los cofactores excepto para los grupos prostticos se presenta como para el sustrato de condicin de saturacin, ya que estos se unen a la enzima por sitios especficos.

Efecto de la Temperatura

El aumento de la temperatura produce un incremento de la energa cintica de las molculas lo cual hace que se produzca un mayor numero de choques efectivos entre ellas, esto hace que los reactantes posean un contenido energtico que los ubica mas prximos al estado activado y de esta forma se incrementa la velocidad de la reaccin. La mayor Vo se alcanza a un valor de temperatura determinado, denominado Temperatura Optima, luego del cual la velocidad comienza a disminuir y luego desaparecer por la desnaturalizacin de la protena enzimtica que provoca la perdida de su actividad

Efecto del pH

Para cada enzima existe un valor de pH al cual se alcanza la mayor Vo, denominado pH Optimo; cuando los valores de pH aumentan o disminuyen con relacin al pH Optimo la velocidad de la reaccin disminuye progresivamente. Lo anterior se explica teniendo en cuenta que las variaciones del pH modifican el estado de disociacin de los grupos qumicos presentes en la enzima o en el sustrato o en el Complejo enzima-sustrato, facilitando o no la unin y/o la transformacin

Efecto de los Activadores

Los activadores enzimticos son molculas pequeas, (gralmente iones inorgnicos),estimulan la actividad cataltica de una enzima; al contrario de los cofactores, los activadores enzimaticos no son participantes directos de la reaccion. Actuan de diversas formas entre las que se destacan la interaccin obligatoria con la enzima y con sustrato libre, por ejemplo:

Enzima Libre: Enzimas que poseen iones metalicos en su centro activo como la carboxipepsidasa que contiene Zn2+. Sustrato Libre: Enzimas que catalizan reacciones en las que intervienen nucleosidos di y trifosfatados que requieren de la union previa de un cation divalente (especialmente Mg2+) en cantidades estequiomentricas, por lo tanto, el verdadero sustrato de la enzima seria el complejo sustrato-cation.

Efecto de los inhibidores

Son sustancias que tienen la propiedad de disminuir la velocidad de las reacciones catalizadas. Se distinguen dos tipos generales de inhibicin, la reversible y la irreversible. Inhibicin Reversible, el inhibidor forma con la enzima un complejo enzima-inhibidor, unido por interacciones dbiles y que por tanto puede disociarse (reconocimiento molecular); Inhibicin Irreversible, el inhibidor se une a la enzima covalentemente y no puede disociarse fcilmente.

Ejemplos de la inhibicin irreversible:

1.

2.

Competitiva: el inhibidor es una sustancia con estructura muy similar a la del sustrato y compite con este por la unin del Centro Activo de la enzima. En presencia del inhibidor aumenta la Km pero no la Vm. No Competitiva: el inhibidor se une a la enzima por otro sitio distinto al Centro Activo por lo que no impide la unin del sustrato a este (no se afecta Km) pero si su transformacin. La unin del inhibidor a la enzima posiblemente induce un cambio conformacional con la protena que se transmite al centro activo y hace que los grupos catalticos no queden de la forma adecuada para realizar su accin (se afecta Vm) una ves que el sustrato se une. En este tipo de inhibicin el inhibidor no puede ser desplazado al aumentar la concentracin de sustrato.

Algunos medicamentos utilizados diariamente la practica medica son inhibidores enzimticos, como las Sulfamidas, que se emplean en el tratamiento de infecciones bacterianas, el Captopril, el Enalapril y el Lisinopril (hipotensores) inhiben la Enzima Convertidota de Angiotensina. Las Estatinas son ejemplos de inhibidores competitivos al ser analogos estructurales del sustrato de la HMG-CoA reductasa, enzima reguladora de la sntesis del Colesterol. El Plomo es un ejemplo de inhibidor no competitivo, que form enlaces covalentes con los grupos SH de la cisterna de la Ferroquelatasa, enzima que incorpora Hierro a la sntesis del grupo Hemo de la Hemoglobina y de otras hemoproteinas. En general las armas quimicas suelen ser tambien inhibidores enzimaticos que al bloquear determinadas reacciones pueden daar un organo o tejido especifico.

Vitaminas y Cofactores Enzimticos

Los cofactores enzimticos se requieren en muchas reacciones ya que existen enzimas que poseen en la cadena laterales de sus aminocidos un numero limitado de grupos funcionales que no incluyen todos los necesarios para intervenir en los mecanismos de las reacciones que ellas catalizan. Las caractersticas estructurales de estos cofactores le confieren capacidad de mover sus grupos reactivos de un sitio a otro dentro de la molcula, lo que no pueden realizar ninguno de los aminocidos protenicos, y que son esenciales en algunas reacciones. Las vitaminas tienen gran importancia desde en punto de vista nutricional y algunos de los cofactores enzimaticos tienen como componente estructural alguna vitamina. Es importante aclarar que no todas las vitaminas forman parte de cofatores enzimticos ni todos los cofactores enzimatiecos contienen una vitamina en su estructura.

Cofactores Enzimticos

Son sustancias de bajo peso molecular que son requeridos por determinadas enzimas para poder catalizar las reacciones en que participan. Puede decirse que los cofactores enzimticos son aquellos compuestos orgnicos que "transportan" grupos funcionales, hidrgenos y electrones en colaboracin con las enzimas, pues su parte proteica no puede hacerlo por si sola. Algunas coenzimas pueden modificar el estado de agregacin de enzimas multimricas, pueden actuar como intermediarios intercambiables, como sucede en el caso de las mutasas. En muchas ocasiones para las transformaciones de los sustratos es suficiente con la participacin de la protena enzimtica, pero en otros casos se requiere el concurso de cofactores. Las protenas enzimticas y sus cofactores correspondientes constituyen los sistemas biocatalticos.

Algunos cofactores participan en un tipo de reaccin, otros intervienen en un nmero muy variado, algunos siempre se unen de manera fuerte a la enzima y otros unas veces se ligan con fuerza y otras no. Tipos de cofactores: los iones inorgnicos y los compuestos orgnicos; a estos ltimos se les denomina Coenzimas. Los cofactores inorgnicos son casi siempre cationes divalentes como Mg2+, Ca2*, Mn2\ Z2+ y Fe24, aunque tambin pueden ser monovalentes como el K* e incluso aniones como el CI\ Aunque intervienen en mltiples reacciones, actan fundamentalmente contribuyendo a la unin entre la enzima y el sustrato, estabilizando la protena enzimtico en su conformacin ms activa o constituyendo de por s el centro cataltico principal, que al unirse a la protena enzimtica aumenta su eficiencia y adquiere especificidad.

Vitaminas y Coenzimas

"Las vitaminas son sustancias orgnicas que no pueden ser sintetizadas (al menos en cantidades suficientes) por el organismo animal y deben ser aportadas mediante la dieta (esenciales). Se encuentran en cantidades muy pequeas en los alimentos, pero estas son suficientes en una dieta variada. Cuando se encuentran ausentes de la dieta o cuando su absorcin es deficiente, se produce una determinada enfermedad carencial". En total se identificaron 13 vitaminas, que son: las vitaminas liposolubles K, E, D, A, las del complejo vitamnico B tiamina (Bl), riboflavina (B2), nicotinamida o cido nicotnico (niacina). biotina, cido pantotnico, cido flico, piridoxina (B6) y cianocobalamina (B12) y el cido L- ascrbico o vitamina C.

En general, en la porcin vitamnica de la coenzima radica el grupo funcional especfico, que es transformado por la accin de la enzima. Por su importancia se analizarn dos tipos de coenzimas que tienen vitaminas en su estructura: los piridn nucletidos y los flavn nucletidos.

Piridn nucletidos: Presentan como parte de su estructura la nicotinamida, integrante del complejo B. Existen dos formas coenzimticas: el nicotin- adenin-dinucletido (NAD*) y el nicotin-adenin-dinucletido fosfatado (NADP+).

Tanto el NAD+ como el NADP+ participan en reacciones de oxidacin-reduccin catalizadas por deshidrogenasas. Funcionan con enzimas que sustraen o incorporan al sustrato dos tomos de hidrgeno unidos, directa o indirectamente, al mismo tomo de carbono; como de los dos tomos de hidrgeno sustrados al sustrato slo uno se incorpora a la coenzima, se libera un H+ al medio y esto crea en las reacciones una dependencia del pH; Las deshidrogenaciones se ven favorecidas en pH elevado y dificultadas en pH bajo. Esto se hace ms claro si se analiza la reaccin catalizada por la Alcohol deshidrogenasa: CH3-CH2-OH +NAD+ CH3-COH + NADH + H+

Su funcionamiento representa un ciclo de oxidacinreduccin alternante (se reducen y luego se oxidan nuevamente). Adems de la funcin del NAD+ en las reacciones de oxidacin-reduccin, tambin participa en otras reacciones como donante de grupos. El dficit nutricional de nicotinamida causa la Pelagra, conocida tambin como la enfermedad de las tres "D", ya que sus sntomas principales comienzan con esta letra: diarrea, demencia y dermatitis. La Pelagra en el ser humano no suele aparecer como una deficiencia pura, sino asociada a la carencia de otras vitaminas, por lo que los enfermos pueden presentar otros sntomas como la polineuritis.

Flavn nucletidos: Presentan como parte de su estructura la riboflavina o vitamina B2. Se presentan dos formas cenzimticas: el flavin mononucletido (FMN) y el flavin-adenindinucletido (FAD).

El FMN y el FAD actan entre un sustrato y una coenzima o entre dos coenzimas. Participan en reacciones de oxidacin - reduccin catalizadas por deshidrogenasas y oxidasas. Funcionan con enzimas (flavoprotenas) que sustraen dos tomos de hidrgeno de carbonos adyacentes, originando compuestos insaturados, como en e! caso de la Succinato deshidrogenasa.

El dficit nutricional de riboflavina es una de las enfermedades nutricionales ms frecuentes, aunque es bastante benigna. Se caracteriza entre otras por glositis (inflamacin de la lengua), queilosis (fisuras en las comisuras de la boca) y vascularizacin de la crnea. A menudo se asocia a otros estados carenciales, como de hierro y de nicotinamida (Pelagra).

Coenzima A: Es la coenzima de transferencia de grupos acilos ms sobresaliente en los sistemas vivientes. La estructura de la molcula es muy compleja y presenta numerosos grupos funcionales, entre los que se destacan un nucletido de adenina, el cido Pantotnico (componente del complejo B) y la bmercaptoetilamina; estos dos ltimos forman la 4-fosfo-pantetena.

Muchas experiencias han demostrado que la parte reactiva de a molcula es el grupo SH final; es comn utilizar la abreviatura HSCoA para denotar esta coenzima. La formacin de los derivados aclicos es catalizada por enzimas sintetasas y requiere ATP (u otro nuclesido trifosfatado) como fuente de energa:

Cuando los grupos acilos son grandes su unin con la HSCoA contribuye adems a la solubilidad de estos compuestos en el medio acuoso celular. En los seres humanos no se ha comprobado el estado carencial del acido pantotnico.

Adenosintrfosfato (ATP): El ATP participa en numerosas reacciones como fuente de energa y/o de elementos estructurales. Como coenzima participa en reacciones de transferencia de fosfato, d pirofosfato, de adenilato y de adenosilo.

Lo explicado del ATP es vlido en casi su totalidad para los nuclesidos trifosfatados de citosina, guanina y uracilo.

Regulacin de la Actividad de las Enzimas

"Cuando un sistema o proceso es capaz de variar su comportamiento como respuesta a cambios que se produzcan en su entorno de forma que la respuesta directa o indirectamente tiende a modificar el estmulo para volver a la situacin inicial, se dice que este sistema o proceso est regulado" La regulacin enzimtica se refiere a la posibilidad que' tienen regulacin de variar la velocidad de las reacciones que ellas catalizan al producirse determinados cambios en el medio. Los mecanismos fundamentales de regulacin de la actividad enzimtica son: la modificacin o regulacin alostrica y covalente.

Regulacin Alosterica

El trmino alostrico proviene de las voces griegas allos que significa otro, diferente, y estreo que significa espacio, sitio, lugar. Son protenas oligomricas, es decir, presentan estructura cuaternaria. Existen en varios estados conformacionales interconvertibles y con un grado variable de afinidad por sus ligandos. Se une por un mecanismo de reconocimiento molecular, por lo que el sitio alostrico es un sitio de reconocimiento molecular y la molcula que se une (ligando) se denomina en este caso efector alostrico (se une por interacciones dbiles y por lo tanto de forma reversible). Los efectores alostricos pueden aumentar la actividad de la enzima, efectores alostricos positivos o activadores alostricos, o disminuirla, efectores alostricos negativos o inhibidores alostricos.

Importancia de la regulacin alosterica

Los activadores e inhibidores alostricos son sustancias propias de la clula y sus concentraciones varan como consecuencia de la propia actividad celular. En ocasiones el activador y el inhibidor forman una pareja cuyas concentraciones varan de manera contrara, cuando aumenta la de uno de ellos disminuye la del otro. Estas variaciones de concentracin constituyen estmulos que adaptan el funcionamiento de las enzimas a las condiciones celulares. Casi siempre catalizan una de las primeras Rx de las vas metablicas, regulndolas desde el inicio, permitiendo que stas funcionen slo cuando hacen falta. Esta ubicacin hace posible que la clula utilice la cantidad indispensable de sustancia y energa para su funcionamiento, sin gastos excesivos, lo cual es una regularidad que se expresa bajo la denominacin de Principio de la Mxima Economa.

Modificacin Covalente

La modificacin covalente es un mecanismo mediante el cual la unin de un grupo qumico de naturaleza no proteica a una enzima por enlace covalente o su separacin por ruptura del enlace, modifica su composicin y por consiguiente su conformacin y su actividad". Requiere de una enzima que una al grupo y otra que lo separe; esto quiere decir que la enzima regulada puede estar en una forma modificada (con el grupo qumico unido) y en una forma no modificada (sin el grupo unido) que son interconvertibles, pero el paso de una forma a otra requiere de la participacin de otra pareja de enzimas. La regulacin covalente y la alostrica presentan la misma eficacia, sin embargo, la covalente representa un gasto energtico y de enzimas que no se produce en la regulacin alostrica. A pesar de esto, la regulacin covalente presenta una ventaja que no tiene la alostrica, conocida como fenmeno de amplificacin.