DOGMA CENTRAL DE LA

BIOLOGIA MOLECULAR
Dr Eduardo Kremenchutzky
1- los genes se componen de ADN y están situados dentro
de los cromosomas.
2-Cada gen contiene información codificada en forma de
una serie específica de nucleóti­dos de purina y pirimidina
dentro de la molécula de ADN
3- la unidad de información genética es el CODÓN que es
un grupo de tres nucleótidos adyacentes que específican
un Aa en una cadena de proteínas
4- el código genético es un código tripleto
5- la molécula de ADN consta de dos cadenas
complementarias de polinucleótidos arro­llados entre si en
una espiral y unidas por enlaces de hidrógeno entre pares
específicos de bases de purina y pirimidina.
6- la molécula de ADN se duplica cuando las dos tiras de la
espiral se separan y cada una actúa como modelo para la
formación de una nueva cadena complelementaria. Cada
par de tiras , uno antiguo y uno nuevo se arrrolan formando
dos espirales hijas.
Estructura y replicación
del material genético
Objetivos tema 6:
Estructura y replicación del material
genético
Deberán quedar bien claros los siguientes puntos:

•Cómo se descubrió la naturaleza química del

material hereditario
•La composición química de los ácidos nucleicos
•La estructura 3D del DNA: naturaleza
complementaria y antiparalela de la doble cadena
del ácido desoxirribonucleico (DNA)
•La extraordinaria capacidad explicativa del modelo
del DNA de la función biológica fundamental de esta
molécula
•La replicación semiconservativa
•Enzimología de la replicación
La transformación bacteriana en Streptococcus
pneumoniae (Griffith 1928)

Rugosa

Muerte por neumonía Cepa resistente

Lisa

No muere Muere
¿Cuál es el Principio transformante?

Principio

Rugosa Lisa
 Colin MacLeod

El elemento transformante Maclyn McCarty

es el DNA (1944)
Oswald
Avery

Ver animación
experimento
tranformación
bacteriana
Sólo DNA produce transformación
Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase
con fagos (1952)

Bacteriófago T4

El DNA es el
material
infeccioso
Componentes de los ácidos nucleicos

adenina

timina
guanina

citosina
Reglas de Chargaff

1. Proporción de purinas = Proporción de pirimidinas

A+G=C+T

2. A=T

3. G=C
 1953. Año culminante:
J. Watson y F. Crick resuelven la
estructura tridimensional del DNA
(Nature 171: 737-738)

Watson y yo hemos
encontrado el
secreto de la vida
 1953. Año culminante:

Dos líneas de evidencia:

•Reglas de Chargaff

•Fotografías de difracción de rayos X

 Significado reglas de Chargaff

Complementariedad de las bases

 Difracción de rayos X

Hemoglobina

Linus Pauling
Interpretación del patrón difracción de rayos X del DNA

Rosalind E.
Franklin

Crick
 Modelo en metal
del DNA

J. Watson y F. Crick
Concluyen: La estructura del DNA es una
doble hélice, formada por cadenas orientadas en
direcciones opuestas (antiparalelas). La
estructura se mantiene gracias a enlaces de
hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia el interior de las
cadenas
Doble hélice, formada por La estructura se mantiene gracias a
cadenas orientadas en enlaces de hidrógeno entre las
bases nitrogenadas que se
direcciones opuestas
encuentran orientadas hacia el
(antiparalelas). interior de las cadenas
Desnaturalización del DNA

•Separación de las dos hebras por calor

•Una mayor proporción G-C tiene una mayor
temperatura de desnaturalización (‘fusión’)
100
Porcentaje G + C

80

60

40

20

70 80 90 100 110
Temperatura de fusión (desnaturalización)
Hélices levógiras y dextrógiras
DNA-B dextrógira
Ver artículo
Nature
1953
 La estructura del DNA suministra una
explicación asombrosamente
simple del fenómeno de la herencia
La estructura explica:

•La naturaleza de la secuencia lineal de los genes

(información digital cuaternaria en secuencias
unidimensionales de monómeros A,T,G,C)
•El mecanismo de replicación exacta de los genes
•La naturaleza química de las mutaciones
•Por qué la mutación, la recombinación y la
expresión génica son fenómenos separables a
nivel molecular
Esencial a la relación íntima
entre estructura molecular y
función genética del DNA
es el concepto de molde

La complementariedad de las
bases nitrogenadas permite que
la secuencia de una cadena
sencilla de DNA actúe como un
molde para la formación de una
copia complementaria de DNA
(replicación) o de mRNA
(transcripción)
Antes pensábamos que nuestro futuro estaba
en las estrellas. Ahora sabemos que está en
nuestros genes.
James Watson
Una estructura tan
bonita tenía, por
fuerza, que existir

J. Watson
Una estructura
tan bonita tenía,
por fuerza, que
existir

J. Watson
El DNA
contiene información
digital cuaternaria en
secuencias unidimensionales
de monómeros A,T,G,C
(cristal aperiódico)
Hay grandeza en esta concepción de la
vida,... que mientras este planeta ha ido
girando según la constante ley de la
gravitación, se han desarrollado y se están
desarrollando, a partir de una
un comienzo
moléculatan
sencillo, infinidad
helicoidal asombrosa,
de formas
infinidad
cada
devez
formas
más
bellasvez
cada y maravillosas
más bellas y maravillosas
Charles Darwin
Estructura de los genes y
del ARN
Estructura del gen
ARNm
ARNt
ARNr
Replicación del DNA
25 de Abril 1953

It has not escaped our notice that the

specific pairing we have postulated
immediately suggests a possible
copying mechanism for the genetic
material.
Posibles modelos de replicación
 Replicación del DNA
•Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
•El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicación es semiconservativa

Mathew Meselson Frank Stahl

 Replicación del DNA
•Enzimas que sintetizan (replican) el DNA
•E. coli
•DNA polimerasa I (rellena huecos y repara)
•DNA polimerasa II y III (función principal en la
síntesis)
•Añade bases en ambas cadenas en la
dirección 5’ → 3’
•Requiere un 3’ OH final
•Eucariotas
•5 polimerasas
∀α y β principal en replicación
∀δ, ε y γ exonucleasas
•Corrección de pruebas: actividad 3’ → 5’
exonucleotídica. Sustituye bases mal emparejadas
(10-5) por correctas (10-7); mecanismos de reparación
adicionales la reducen hasta 10-10
 3’ 5’
Las polimerasas
conocidas añaden
nucleótidos solamente
en la dirección 5’ → 3’
 ¿Por qué no hay una enzima que
polimerice en la dirección 3´-> 5?

No funcionaría la corrección de errores por falta

de un trifosfato que suministre la energía de
enlace covalente azúcar-fosfato
Adición 5’3’
 OH OH

5’
P P P P

P P P P

3’
P P P P

PP
P P P P
+ H2O

OH
P P P P
PPP
OH
P P OH P
PPP

OH P P

P P

P P
Adición 3’5’
(hipotética)
 P

OH
OH

PPP

OH

PP
3’ 5’

P
PP + H2O
P
P

OH
PP
P
OH
Adición 3’5’
OH

(hipotética)
P

PP
P
Corrección de errores
 P
P

P
P
OH

POH
P
P

P
P

PPP

OH
5’ 3’

P
PP + H2O
P

P
P
OH

Adición 5’3’
OH
P

P
P

P
 P

OH
OH

POH
P

PP
3’ 5’

P
Adición 3’5’
(hipotètica)
 Replicación del DNA (2)
•Replicación: continua (cadena adelantada, cebador
sólo inicio) y discontinua (cadena retrasada)

•Discontinua
•Cebador (pequeño RNA 2-60 nucleótidos
añadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3’ OH.
•Fragmento de Okazaki por DNA pol III (1500
bp en procariotas y 150 en eucariotas)
•Pol I elimina cebador 3’ -> 5’ y llena huecos
(gap)
•Ligación (DNA ligasa, enlace fosfodiéster)
Polimerasa III

Polimerasa I
¿Por qué el cebador es RNA?

El cebador es más proclive al error, por lo

que debería eliminarse y el RNA puede
detectarse y eliminarse fácilmente por la
DNApol I
Replicación del DNA (3)
El replisoma: complejo enzimático de la
replicación que coordina la síntesis de las
dos cadenas, maquinaria molecular
•Dímero de la DNA pol III (núcleos
catalíticos)
•Primosoma: formado por dos enzimas
•Primasa
•Helicasa (desenrolla el DNA)
•Proteína de unión a cadena sencilla, ssb
(Unión Y, estabiliza el DNA de cadena
sencilla)
•Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena) y
II (rotura de dos cadenas) junto a DNA ligasa
-> Relajación del superenrollamiento
El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria
El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria
El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria
Topoisomerasas
 Replicación del DNA (4)
•Origen de replicación:
•Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
proteínas iniciadoras. Varios orígenes en eucariotas
•La replicación es bidireccional

Horquilla
replicación
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación
(~500 en levaduras y 60000 en mamíferos). Cada unidad de replicación es
un replicón. La replicación es bidireccional
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación
(~500 en levaduras y 30000 en mamíferos). Cada unidad de replicación es
un replicón. La replicación es bidireccional
 Transcripción

Se forma un
precursor llamado
TRANSCRIPTO
PRIMARIO ,que
luego se transforma
en el producto final
por un mecanismo
llamado
PROCESAMIENTO
DEL ARN.
 Procesamiento del ARN

El transcripto primario puede modificarse por alguno de los siguientes

procesos :

1- clivaje: es la formación de una molécula más grande que luego se

rompe originando la molécula final que es más chica.

2- empalme: se sacan partes internas de la molécula que luego vuelve

a empalmarse.

3- alargamiento: se agregan segmentos al final del trascrito primario

que es más corto que el producto final.

4- modificación: cambios químicos en los nucleótidos.

 Genes Transcriptos

Estructurales ARNm
transcripción

Determinantes ARNt
transcripción

Determinantes ARNr
nucleolares
transcripción
 Transcriptos primarios

ARNhn ARNm
procesamiento

ARNpre-t ARNt
procesamiento

ARNpre-r ARNr
procesamiento
Procesamiento del ARNhn

77
78
 ARN polimerasa

La ARN polimerasa se asocia a una

región del ADN y desenrolla una
vuelta de hélice, permitiendo la
polimerización del ARN a partir de
una de las hebras de ADN que se
utiliza como molde. Hay tres tipos
de ARN polimerasa: nuclear ,
nucleolar y mitocondrial
Subunidades de la ARN
polimerasa
ARN pol
Promotor Formación del complejo promotor
cerrado: ARN pol unida por su
subunidad σ específicamente al
promotor.

Formación del complejo promotor

abierto: la ARN pol desenrolla el ADN
quedando así una hebra de ADN como
molde (la 3´- 5´). La ARN pol inicia la
síntesis de ARN. La subunidad σ se
disocia y la síntesis continúa.

Subunidad σ

La síntesis de ARN continúa hasta que

la ARN pol encuentra una señal de
terminación: se detiene la
transcripción, se separa el ARN y la
polimerasa y la enzima se disocia del
ADN.
81
 Traducción
El ARNm pasa al citoplasma y se asocia con los ribosomas, para la síntesis de
proteínas, que es la expresión del código genético.
Iniciación

El primer paso consiste en la formación del

COMPLEJO DE INICIACION. El ARNm se une
a la subunidad menor del ribosoma. Luego el
primer aminoacil-transfer se une por medio de
su anticodón al codón correspondiente.
Después se aparea la subunidad mayor.
 Elongación

Es el agregado de aminoácidos a la
cadena peptídica, según el orden de los
codones del ARNm . Los aminoácidos
se van agregando por medio de una
unión peptídica entre ellos , unión que es
catalizada por una enzima que se
encuentra en la subuni-dad mayor del
ribosoma , llamada Peptidil-transferasa o
Péptido sintetasa.
Terminación

El ribosoma se desplaza sobre el ARNm

hasta encontrar un codón sin sentido
como UAA, UAG o UGA.
Luego se libera la proteína formada y se
disocia el ribosoma en sus dos
subunidades