Existen numerosos colorantes, en su mayora compuestos orgnicos.

Los colorantes que se utilizan son molculas cargadas positivamente y se combinan con los componentes celulares llamados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos (azul metileno, el cristal violeta). Otros colorantes son cargados negativamente. Los que se combinan con elementos celulares cargados positivamente (eosina, la fucsina acida y el rojo Congo).

La tincin de Gram es una tcnica de coloracin de contraste; fue descubierta por Hans Christian Gram en (1884). El fundamento de la tcnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias. Gram positivas y Gram Negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano. Adems de dos cidos teicocico. La capa te peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior por medio de lipoprotenas.

Bacteria Gramnegativa

Bacteria Grampositiva

En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones:

- Identificacin preliminar de la bacteria causal infeccin. - Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. - Importancia de la calidad de la muestra biolgica para el estudio, se valora con esto, el nmero de clulas inflamatorias (a mayor nmero de clulas inflamatorias ms probabilidad de que la flora sea representativa del lugar de la infeccin).

A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varias formas distintas:

- Los cocos de forma esfrica. Pueden presentarse aislados despus de la divisin celular (Micrococos), por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
- Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada. - Tambin pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rgida o espiroquetas si son blandas y onduladas, si poseen forma de coma, - curvados, entonces se les llama vibriones.

1.El primer paso es preparar y fijar un frotis de la siguiente manera. 2. Una vez obtenido el frotis con la muestra, se procede a teir la misma con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tincin de 1 minuto est dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 grados. 3. Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lmina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, sta debe caer sobre la parte superior de la lmina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centmetro de espesor. Tambin el enjuague se debe realizar poniendo la lmina en posicin inclinada hacia abajo 4) Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto ms.

5) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcoholacetona, hasta que ya no escurra ms lquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van aadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que ste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra ms lquido azul 6) Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lmina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita. 7) Una vez que la lmina ya sec, procedemos a teir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto. 8) Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lmina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita.

http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZE VkykPMncqxmd.php. Septiembre 21/09. http://mx.geocities.com/urtis_micro/sesiones/Gram.h tm. septiembre 21/09.