Espectroscopia de luminescncia molecular

Fotoluminescncia
e Quimiluminescncia

Fluorescncia Molecular Absoro de ftons emisso de ftons Fosforescncia Absoro de ftons emisso de ftons
Excitao qumica emisso de ftons.

Fotoluminescncia

Quimiluminescncia

Aplicaes
Desvantagem Qualitativa Quantitativo Os estados excitados so suscetveis desativao pelas colises e outros processos, muitas molculas no apresentam fluorescncia ou fosforescncia. Espectros caractersticos Baixos valores de limites de deteco (LOD
~ ppb) esto sujeito a srios efeitos Por isso os mtodos luminescentes quantitativos Ampla linearidade de interferncia. Lquidos, slidos e gasosos

E comum utilizar esta tcnica combinada com tcnicas de separao como Alta especificidade cromatografia e eletroforese.

Fluorescncia

x Fosforescncia

Fluorescncia atmica Sdio: 3s 3p 3s Absorve 589 nm emite 589 nm Fluorescncia ressonante Fluorescncia molecular fluorescena: n * n Absorve 490 nm emite 520 nm Deslocamento de Stokes Fosforescncia antraceno: * Absorve 280 nm emite 480 nm perda de energia? Estados excitados Singleto e Tripleto

Diagrama de Nveis Energticos de Molculas Fotoluminescentes

Tambm chamado de diagrama Jablonski Velocidade de absoro ocorre em cerca de 10-14 a 10-15s. A emisso de fluorescncia ocorre em 10-5 a 10-10s. J a emisso de fosforescncia ocorre em um tempo de 10-4 a 10s. Transio singleto para tripleto e improvvel (proibida)

Processos de

A molcula excitada pode retornar ao seu estado fundamental pela combinao de varias etapas mecnicas. Duas destas formas a fluorescncia e a fosforescncia envolve a emisso de radiao.

Desativao

Relaxao vibracional Imediata (10-12 s) dissipao por vibrao Coliso com molculas do solvente Aumento mnimo de temperatura do sistema Dissipao de energia = perda de energia Deslocamento de Stokes emisso > excitao E emitida < E absorvida

As outros processos de desativao so no radioativos.

S ser possvel observar fluorescncia e fosforescncia se a trajetria para o estado fundamental seja aquela que minimiza o tempo de vida no estado excitado

Processos de

Desativao

Converso interna Processo intermolecular. Proximidade entre nveis eletrnicos excitado e nveis vibracionais de um estado eletrnico excitado de menor energia(nveis superpostos) Resultado prtico: no importa qual exc fluorescncia em

Processos de

Converso externa

Desativao

Cruzamento intersistema Ocorre com a inverso do spin de eltron excitado o que altera a multiplicidade da molcula. A probabilidade desta transio depende da proximidade entre os nveis energticos vibracionais. Fosforescncia Transio triplete singlete menos provvel que a transio singlete singlete tempo de vida mdio grande. Evento raro: observado em baixas temperaturas, solventes viscosos ou mesmo em slidos.

Envolve transferncia de energia da molcula excitada para molculas de solvente. Obviamente depende de condies intrnsecas ao solvente e fatores que aumentem ou diminuam o nmero de colises: Tipo de solvente Temperatura Viscosidade Presena de supressores

Rendimento Quntico

a razo entre o nmero de molculas luminescentes e o nmero total de molculas excitadas; ou seja:

Levando

em considerao a discusso feita sobre os processos de desativao sugere que o rendimento seja determinado pelas constantes de velocidade relativas para cada processo. =
+ + + ++

Variveis que Afetam Luminescncia

Fluorescncia e estrutura Estruturas aromticas condensadas e/ou com alto grau de conjugao apresentam alta eficincia quntica Ex: Heterocclicos: no fluorescem Heterocclicos condensados fluorescem!
Heterocclicos

Heterocclicos Condensados

Variveis que Afetam Luminescncia

Fluorescncia e estrutura A substituio em anis aromticos afetam a intensidade relativa de fluorescncia e os valores dos max de absoro/emisso

Variveis que Afetam Luminescncia

Fluorescncia e estrutura Molculas flexveis tendem a relaxar por vibrao A flexibilidade causa aumento da constante de converso interna (kci) o que leva a desativao no-radiativa.

0,2

Variveis que Afetam Luminescncia

Solvente e Temperatura Aumento de T ou diminuio de viscosidade do solvente levam a um aumento no nmero de colises e portanto aumenta a probabilidade por converso externa (supresso colisional) pH A fluorescncia de compostos aromticos com funcionalidades cidas ou bsicas apresentam forte dependncia com o pH Ex.: anilina/anilnio e fenol/fenolato Obs: pKa de substncias no estado excitado podem variar de 3 a 4 unidades em relao ao estado fundamental

Variveis que Afetam Luminescncia

Oxignio dissolvido Oxignio e outras espcies paramagnticas tendem a diminuir a fluorescncia pelo aumento do cruzamento intersistemas (fosforescncia). Tambm possvel a oxidao da espcie fluorescente Outras molculas em soluo Molculas com tomos pesados (tetrabrometo de carbono e iodeto de etila) aumentam a velocidade de inverso de spin. Ex: Acrilamida e protenas