Metode standardizate pentru evaluarea biologica a dispozitivelor medicale

Dispozitive medicale
orice instrument, aparat, echipament, material sau alt articol, utilizat singur sau in combinatie, impreuna cu orice accesoriu, inclusiv software-ul necesar functionarii corespunzatoare a acestuia, destinat de producator sa fie folosit pentru om, in scop de: a) diagnosticare, prevenire, monitorizare, tratament sau ameliorare a unei afectiuni sau a unei leziuni; b) investigatie, inlocuire sau modificare a anatomiei sau a unui proces fiziologic; c) control al conceptiei, si care nu isi indeplineste actiunea principala prevazuta prin mijloace farmacologice, chimice, imunologice sau metabolice, dar a carui functionare poate fi asistata prin astfel de mijloace (HG 344 /2004) dispozitiv medical activ - orice
dispozitiv medical a carui functionare se bazeaza pe o sursa de energie electrica sau pe orice sursa de putere, alta dect cea generata direct de organismul uman sau de gravitatie

dispozitiv medical implantabil activ - orice dispozitiv medical

activ care este destinat sa fie introdus, partial ori total, prin interventie medicala sau chirurgicala, in organismul uman sau, prin interventie medicala, intr-un orificiu natural al acestuia, si care este destinat sa ramna implantat dupa finalizarea procedurii

dispozitiv comanda

individual

la

- orice dispozitiv medical implantabil activ, destinat sa fie utilizat exclusiv pentru un pacient determinat, realizat special conform prescriptiei unui medic specialist care, pe propria raspundere, ii stabileste caracteristicile specifice ale proiectului

Biocompatibilitate
Un biomaterial, in acceptiunea actuala, in sens larg, este un material destinat a fi pus in contact cu tesuturile vii si fluide biologice pentru a diagnostica, trata, modifica forme sau a inlocui parti de tesut, organe sau a stimula unele functii ale acestora.
Definitia general acceptata pentru biocompatibilitate unui material vizeaza proprietatile acestuia care asigura o reactie adversa minima in mediul biologic.

Biocompatibilitatea - determinata de:

Natura materialelor componente

Tipul de tesut care va fi expus la dispozitivul medical Durata expunerii

PROBLEMATICA BIOMATERIALE:

Cum se caracterizeaza un material care va prelucrat ca dispozitiv medical/implant? Cum se evalueaza materialele pentru a determina daca sunt biocompatibile? Cum se evalueaza biomaterialele pentru a determina daca vor functiona adecvat in vivo?

Testare Biomateriale: 4 etape

Caracterizare materii prime
chimic, fizic, biologic

Biocompatibilitate material

citotoxicitate, sensibilizare, iritare, toxicitate sistemica, hemocompatibilitate, carcinogenicitate

Validare produs si proces

mediu, procesare, sterilizare, validare produs finit (dispozitiv medical)

Testare pentru punerea pe piata

Audit periodic, teste pentru avize aplicare

Categorii de dispozitive medicale Definitii si exemple

Dupa durata de expunere

Expunere limitata.
Dispozitive cu durata de expunere mai mica de 24 h.

Expunere prelungita.
Dispozitive a carui termen de utilizare (singular, multiplu sau termen lung) este cuprins intre 24h si 30 zile.

Contact permanent.
Dispozitive a carui termen de utilizare (singular, multiplu sau termen lung) este mai mare de 30 zile.

Standarde pentru testarea biomaterialelor

Standarde ISO 10993:

ISO 10993-1: Evaluare si testare in cadrul unui proces de gestionare a riscului ISO 10993-2: Conditii pentru protectia animalelor ISO 10993-3: Teste pentru genotoxicitate, carcinogenitate si toxicitate asupra functiei de reproducere ISO 10993-4: Selectarea testelor pentru interactiunile cu sngele ISO 10993-5: Teste pentru citotoxicitate in vitro ISO 10993-6: Teste pentru efecte locale dupa implantare ISO 10993-7: Reziduuri de sterilizare cu oxid de etilena ISO 10993-8: Selectarea si calificarea materialelor de referinta utilizate pentru teste biologice ISO 10993-9: Cadru pentru identificarea si cuantificarea produsilor potentiali de degradare ISO 10993-10: Teste de iritare si de sensibilizare cutanata ISO 10993-11: Teste pentru toxicitate sistemica ISO 10993-12: Prepararea esantioanelor si a materialelor de referinta ISO 10993-13: Identificare si cuantificare a produselor de degradare din dispozitive medicale pe baza de polimeri ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

Standarde pentru testarea biomaterialelor

ISO 10993-11: Teste pentru toxicitate sistemica ISO 10993-12: Prepararea esantioanelor si a materialelor de referinta ISO 10993-13: Identificare si cuantificare a produselor de degradare din dispozitive medicale pe baza de polimeri ISO 10993-14: Identificarea si cuantificarea produselor de degradare din materiale ceramice ISO 10993-15: Identificarea si cuantificarea produselor de degradare din metale si aliaje ISO 10993-16: Proiectarea studiilor toxicocinetice pentru produse de degradare si substante extractibile ISO 10993-17: Stabilirea limitelor admisibile pentru substante extractibile ISO 10993-18: Caracterizare chimica a materialelor ISO/TS 10993-19: Caracterizarea fizico-chimica, morfologica si topografica a materialelor ISO/TS 10993-20:Principii si metode pentru testarea imunotoxicitatii dispozitivelor medicale

Standard ISO 10993-1: Evaluare si testare

Principii de evaluare a toxicitatii

1.

2. 3. 4. 5.

6.
7.

Caracterizarea si identificarea compozitiei biomaterialului, potentiale impuritati si substante extractibile; Considerarea de efecte toxice pentru produsele de extractie si produsele de degradare; Teste realizate de personal specializat; Analiza date la autoritatile de verificare; Reevaluare de efecte toxice daca au loc modificari de compozitie, in timpul prelucrari sau la utilizare; Analiza datelor: nonclinice, clinice, postmarket etc. Toate materiale teste de citotoxicitate, sensibilizare si teste de iritare
17

Standard ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

Proprietati chimice, toxicologice, fizice, electrice, morfologice si mecanice:

Material Aditivi Contaminanti de proces si reziduuri Substante extractibile Produse de degradare

Standard ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

De ce caracterizam?

Stabilirea amprentei Determinarea prezentei de substante extractibile

antioxidanti contaminanti surfactanti

stabilizatori

plastifianti

monomeri

Standard ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

Amprenta chimica

Spectroscopie IR
Spectroscopie RAMAN Analiza termica (punct topire, grad de cristalinitate, T vitrifiere)

Standard ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

Spectru FTIR - Polyurethane

Spectru RAMAN os
700 600

PO4, n 1

Intensity (a.u.)

500 400 300 200 100 0 320 520 720 920 1120
-1

CO3, n 2 Amide III Collagen PO4, n 2 PO4, n 4 Amide I Collagen CH2 Wag

1320

1520

1720

Frequency (cm )

Standard ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor

Teste mecanice

Intindere, compresiune, incovoiere Rezistenta la soc Rezistenta la oboseala

Conditii de testare:

Standard ISO 10993-5: Citotoxicitate - Testarea citotoxicitatii prin metoda contactului direct - Testarea citotoxicitatii prin metoda extractului

Standard ISO 10993-5: Citotoxicitate

Materialele toxice inhiba caile metabolice ale celulelor Surse de materiale toxice: componente extractibile

Aditivi pentru prelucare Plastifianti Monomeri Doza de expunere: doza aplicata sistemului Doza eliberata: doza absorbita de celule

Doza de agent chimic eliberat in:

Testare In vitro

Culturi de celule: Prelevare tesut Maruntire fina Extragere celule libere din MEC, prin digestie(tripsina, colagenaza etc.) Conditionarea placi/ petri cu nutrienti, temperatura 37oC!

26

Testare In vitro: Contact direct

Contact direct

Monstrat confluent de celule, (fibroblaste) biomaterial in contact direct 24 ore, 37C Celulele:
Modificare morfologie Mor Pierd aderenta la start

Hematoxylin blue: coloratie celule vii aderente toxicitate=celule moarte/celule vii ! Usor de mentinut Buna corelatie cu testele pe animale Sunt prezente in procesele de vindecare a ranilor

Biomaterial

Fibroblaste?

Testare In vitro: Contact direct

Monostrat de celule (L929 mouse fibroblast cells , 100 x) - contact celula-celula bine definit Indicatie material non-citotoxic (raspuns negativ)

L929 mouse fibroblast cells (100 x ) , citotoxic pozitiv metoda testului in elutie. Spatiile mari dintre celule indica o dezintegrare puternica a celulelor
28

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/04/013.html

Testare In vitro : Difuzie in agar

Difuzie in agar

Intre celule si material se interpune un strat de agar Substantele chimice difuzeaza prin agar Se utilizeaza coloratii pentru evidentierea celulelor sanatoase Zona necolorata in jurul biomaterialului celule moarte

Biomaterial Strat de agar

29

Testare In vitro : Difuzie in agar

Material control pozitiv. Zona decolorata indica faptul ca prezenta probei determina liza celulelor material toxic

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/04/013.html

Testare In vitro:Metoda Extractului

Extractia
CUM? - Mentinere material in solvent sau solutii apoase (De ce solvent sau apa?) Materialele se vor dizolva, migra in solutie Se aplica solutia in cultura de celule Coloratie celule viabile

Biomaterial

31

Teste In vitro: Comparatie

Standard ISO 10993-10: Sensibilizare

Contact prelungit a substantei chimice ce interactioneaza cu sistemul imunitar Pielea utilizare frecventa deoarece cele mai multe reactii la biomaterial sunt mediate celular Sensibilitatea dermica zone rosiatice si umflare
33

Standard ISO 10993-10: Sensibilizare

Sensibilizare la manusi din latex utilizare saptamani- luni

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/05/025.html

Standard ISO 10993-10: Sensibilizare

Porcusori de guineea: raspuns la sensibilizatori dermici Metode de testare:

Probe repetate(Buehler): pentru dispozitive topice electrozi dermici, componente chirurgicale

Faza de inducere: expunere directa sub pansamente ocluzive: 6 ore/zi, 3 zile/saptamana, 3 saptamani Faza de refacere: 2 saptamani odihna pentru a permite dezvoltarea unui raspuns Expunere finala

Maximizare (Magnuson-Kligman): materiale in contact cu alta zona decat pielea

Extracte fluide preparate in solutii saline sau ulei vegetal Injectarea extractului cu adjuvanti care amplifica raspunsul imun Doua saptamani odihna Aplicarea topica a extractului

Standard ISO 10993-10: Sensibilizare

Raspuns pozitiv la testul maximizare porcusor de guinea

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/05/025.html

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Iritatia: raspuns local al tesutului caracterizat de semnal obisnuit de inflamatie

roseata umflare caldura durere aditivi sin prelucrare agenti de prelucare(e.g. urme tensioaactivi, urme etilen oxid) contaminanti
37

Substante chimice

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Teste pentru evaluare iritare

1. 2.

3.

Teste in vitro Teste in vivo Teste clinice(optional)

Teste in vivo pentru iritatie: - Intracutanat; - Piele primara; - Ocular.

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Test intracutanat:

Iepuri (albino) Se prepara extract sub control de temperatura, timp, suprafata material/volum (apa sau solventi pe baza de ulei) Extractul se injecteaza in piele Situsuri multiple Control injectare Observatii (roseata, umflare) la 24h, 48h, 72h Teste agresive, extracte preparate in conditii extreme maximizeaza sansa de a obtine efect iritant

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Test de iritatie intracutanata - albino rabbits

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/06/012.html

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Testul pe piele

Mai putin agresiv Se depune materialul pe spatele animalului Se acopera cu material ocluziv Aplicatie la 4-24 h Observatie 72 h Scor pentru roseata si umflare Comparatie cu piele normala Tip de raspuns: neglijabil, putin, moderat, sever

Standard ISO 10993-10: Iritatia

Testul ocular:

Produse in contact cu ochiul Extractul fluid(solid sau pulbere) Se administreaza in sacul conjunctival - albino rabbit Ochiul netratat - control Observare regulata peste 72 h Scor pe baza de:
Umflare si inrosire a conjunctivei Raspuns iris la lumina Opacifiere cornee Prezenta de fragmente

Standard ISO 10993-11: Efecte sistemice

Efecte de eliberare a substantelor in ficat, inima, rinichi, creier Uzual se utilizeaza soareci si sobolani Metode de aplicare:

dermica inhalare intravenos intraperitoneal oral

43

Standard ISO 10993-11: Efecte sistemice

Aplicare:

Extracte fluide(intraperitoneal sau intravenos) implantare de material (in special biodegradabile) (intramuscular, intraperitoneal, subcutanat) Probe de sange(hematologie, chimia serului) Probe de tesut(patologie)
convulsii epuizare pierdere in greutatie

Colectare

Observare de semne adverse:

Standard ISO 10993-11: Efecte sistemice

Persistenta

acut (in 24 ore) sub-acut (14-28 zile) sub-cronic (pana la 90 zile sau pana la 10% din durata de viata a animalului) cronic (peste 90 zile sau peste 10% din durata de viata a animalului)

Standard ISO 10993-6: Efectul implantului

Presupune evaluarea efectului dispozitivului medical asupra tesutului inconjurator Soareci, sobolani, porci de guinea, iepuri Important pt implant - dimensiune, sterilizare si implantare aseptica Atentia orientata pe efecte locale

46

Standard ISO 10993-6: Efectul implantului

Iepuri:

dimensiune material : 1x10 mm sterilizat; anestezie; 4 probe test si 4 probe control (inerte pentru organism ) implante in muschiul paralombar; probele test si control pe partile opuse; termen scurt: raspuns tisular observat dupa 1-2 saptamani termen lung: raspuns tisular observat dupa 12-78 saptamani

Standard ISO 10993-6: Efectul implantului

La fiecare interval de timp se observa dimensiunea capsulei fibroase

Material reactiv: 2-4 mm grosime Nu se observa capsula la control Reactie inflamatorie la implant Celule moarte in jurul implantului

Examinare histopatologica

Scala pentru analiza histologica a calitatii vindecarii

Parametru urmarit Proliferare fibroblaste Scor 0-lipsa fibroblaste 1 =putine fibroblaste 2= mai multe fibroblaste 3= numar egal de fibroblaste si fibrocite 4=fibrocite mature dominante Organizarea colagenului 1 =dezorganizat, fara fibre vizibile 2= organizare relativa, imatur (fibre vizibile) 3= organizat, aproape normal 4= organizare normala Tesutul de granulatie 1 = tesut de granulatie nesanatos, infectat 2= tesut de granulatie partial nesanatos 3- tesut de granulatie sanatos dar inca nu completat cu

epiderm
4= tesut de granulatie sanatos, completat cu epiderm Delimitarea leziunii 1 = zona leziunii marcata distinct de tesutul sanatos 2= tesut sanatos in zona leziunii, dar imatur si usor de demarcat 3= tesutul in zona leziunii bine integrat in tesutul normal SCOR TOTAL

Standard ISO 10993-6: Efectul implantului

Raspuns minim

Raspuns sever

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/08/013.html

Standard ISO 10993-6: Efectul implantului

Standard ISO 10993-4: Hemocompatibilitate

Sangele - celule:

Eritrocite(viabilitate) Limfocite(raspuns imun) Celule albe (inflamatie) Proteinele coagularii

Teste : In vitro si in vivo Testele in vitro necesita utilizarea de anticoagulanti

52

Standard ISO 10993-4: Hemocompatibilitate

Metode de testare hemocompatibilitate

Test
Tromboza

Metoda
Aderare plachete, leucocite, agregate, eritrocite, fibrina etc. Timp partial de tromboplastina Numarare plachete Numar leucocite; hemoliza (hemoglobina din plasma)

Observatii
Microscopie optica sau SEM

Coagulare Plachete Hematologie

Hemoliza- fragilitatea membranei celulelor rosii in contact cu materialul sau dispozitivul

Imunologie

C3a, C5a, TCC, Bb, iC3b, C4d, SC5b-9

Standard ISO 10993-4: Hemocompatibilitate

Neutrofile si limfocite normale material control , negativ

Celule fragmentate ca urmare a expunerii la un material control pozitiv