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La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los

laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser


una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de
equipamiento.
La fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de
papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando
pequeñas gotas de la solución y evaporando el solvente. Luego el
disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por
capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene
fase móvil en el fondo.
El uso del papel como medio de cromatografía se suele considerar
como una típica partición de sistema, donde la fase estacionaria es el
agua, en poder de adsorción de las moléculas de celulosa, que a su
vez se mantienen en una posición fija por la estructura fibrosa del
papel. Ahora es realidad, sin embargo, que la adsorción de los
componentes de la fase móvil y de solutos, y los efectos de
intercambio de iones, también desempeñan una parte, y que el rol del
papel no de
Técnica es simplemente
separación enlala
decual,
un soporte inerte.
los componentes de la muestra,
se distribuyen entre dos fases de diferente naturaleza, como
consecuencia de la variación de velocidad que se establece al ser
arrastrados por una fase móvil, líquida o gaseosa, a través de una
fase estacionaria, sólida o líquida.
La mayoría de la cromatografía de papel se ha llevado a cabo sobre papel
de filtro estándar de material, sin embargo todavía hay disponibles una
serie de papeles de cromatografía.


Pura celulosa.

Carga de gel de sílice.

De intercambio iónico la celulosa.

Cargados de resina.

Estos se fabrican de papel a una alta especificación con porosidad


controlada, espesor y característica esteras
y son bajos en contenido de metal.
Diferenciación de Amplitud de
clorofilas ondas
La máxima altura (h) alcanzada por el disolvente
en su avance, se denomina frente del disolvente, y
sea dA la distancia recorrida por la sustancia A.
Se define Rf como el cociente entre la distancia
recorrida por una sustancia desde el origen (d) y la
distancia del origen al frente del disolvente (h).
Para la sustancia A:
RfA = dA/h
Clínicos y bioquímicos.

separación de los aminoácidos y péptidos se llevó a cabo


con regularidad para ayudar en la investigación de las
estructuras de las proteínas.
examen rutinario de orina y otros líquidos corporales de los
aminoácidos y azúcares (esto es más importante, ya que
pueden ser utilizados para el diagnóstico de una serie de
patologías con el mapa de la técnica estándar). separación
de las bases de purina y de los nucleótidos en el examen de
los ácidos nucleicos. separación de los esteroides.

Analítica general.

Aplicaciones generales analíticamente incluye análisis de


polímeros, detección y estimación de metales en sólidos y
especímenes geológicos, investigación de materiales
fenolicos en plantas extraídas, separación de alcaloides y
separación de componentes radio isotópicos.
FUNDAMENTO:

La separación de mezclas de moléculas mediante la


cromatografía de capa fina se basa en el principio del
reparto entre dos fases.  En general, una cromatografía se
realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea
separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de
soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio
 (la fase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se
hace fluir a través de ésta para "lavar"  (eluír) a las moléculas
en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la
muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase
móvil "lavará" a los distintos componentes con diferente
eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en
la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean
preferencialmente solubles en la fase estacionaria.

PRINCIPIO DE REPARTO ENTRE DOS FASES:


Es especialmente útil cuando se quiere determinar el número de
componentes de una mezcla o identificar los compuestos
existentes en una mezcla.

En la cromatografía de capa fina, un adsorbente está depositado


formando una delgada capa sobre una placa de vidrio, papel de
aluminio u otros materiales, por la que ascienden, arrastradas por
un disolvente (eluyente), una o más sustancias que se pretenden
separar o identificar.

El disolvente asciende entonces


por capilaridad a lo largo de la
placa, arrastrando a los
compuestos a diferentes
velocidades, según el grado de
adsorción de éstos
produciéndose así su separación.
Eluyentes más comunes para
ADSORBENTES MÁS COMUNES
cromatografía en capa fina.
PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA
-éter de petróleo
FINA.
-tolueno
a) Silica gel (se utiliza en el 80% de
-dietil-éter, t-butil-éter
las separaciones)
-diclorometano
b) Óxido de Aluminio ó Alúmina
-acetato de etilo
(ácida, neutra ó básica)
-n-pentano, n-hexano
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
-ciclohexano
d) Poliamidas
-tetracloruro de carbono
-éter dietílico
Para la selección del adsorbentes
-cloroformo
deber tomar las siguientes
-acetona
consideraciones:
-iso-propanol
a) Polaridad
-etanol
b) Tamaño de partícula
-metanol
a. Diámetro
-ácido acético
b. Área Superficial
c) Homogeneidad
d) Pureza
FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA
SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE
CAPA FINA.

a) Temperatura: a menor temperatura las


sustancias se adsorben más en la fase
estacionaria.
b) La cromatografía debe llevarse a cabo en
un área sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas
están contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a
pequeña escala, éstas deben
limpiarse corriendo primero una mezcla de
cloroformo y metanol y después dejar
secar completamente antes de aplicar la
muestra.
d) Pureza de los disolventes.
La cromatografía en capa fina presenta una serie de
ventajas frente a otros métodos cromatografíca (en
columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el
utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se
necesita para conseguir las separaciones es mucho
menor y la separación es generalmente mejor.
Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre
papel destruirían el cromatograma. El método es
simple y los resultados son fácilmente reproducibles,
lo que hace que sea un método adecuado para fines
analíticos.
La técnica cromatografíca con un enfoque al área clínica
nos sirve para identificar bacterias mediante la
comparación obtenida del Cromato grama obtenido con un
patrón predispuesto, para identificar distintos tipos de:
aminoácidos, proteínas, nucleótidos, hemoglobina,
esteroides etc.
Identificación de
Nucleótidos

Identificación de
proteínas