Practica de Urocultivo

Muestra, Coleccin y Transporte

Muestra: Orina obtenida en forma asptica a mitad de chorro, previa limpieza en un frasco estril proporcionado por el laboratorio. Orina de un nio obtenida en una bolsita colectora, previa limpieza con agua y jabn del rea perineal. Las muestras no deben permanecer ms de dos horas a temperatura ambiente Todas las muestras sern conservadas a partir de su entrega al laboratorio a temperatura de refrigeracin.

Bolsita colectoras de orina para uso pediatrico

Frascos esteriles para la recoleccion de orina para adultos

Muestra, Coleccin y Transporte

Consideraciones previas: Supresin de Diurticos Antibioticoterapia No ingesta de lquidos abundantes Necesita retener orina por 2-4 horas antes de la prueba.

Criterios de rechazo de muestra: Muestra de orina visiblemente contaminadas con Heces. Muestras de orina conservadas durante ms de dos horas a temperatura ambiente.

Reactivos, medios, materiales y equipos

Equipos: Estufa Microscopio Centrfuga Materiales Asa de cultivo calibrada 1 ul. Placas con Agar Mac ConKey Placas con Agar Sangre Placas con Agar Mueller Hinton Tubos con medio manitol salado(si el aislamiento as lo requiere) Tubos con medios diferenciales:TSI,LIA,CITRATO DE SIMONS,SIM (si el aislamiento as lo requiere) Discos de sensibilidad. Tubos 13x100 ml.

Materiales

Procedimiento

Se anotar el aspecto macroscpico y color de la orina si este fuera patolgico. Utilizando el asa de cultivo calibrada se introducir en forma perpendicular en el recipiente de orina y se sembrar en un cuadrante de la placa de Agar Sangre. El procedimiento se repetir para sembrar un cuadrante con Agar Mac Conkey. Se realizar la determinacin de presencia de sustancias antibacterianas residuales. Las placas sern incubadas a 37C por 18 horas.

Procedimiento
Se centrifugar 5 ml. de orina en un tubo de 13x100 mm durante cinco minutos a 3000 r.p.m. El sedimento de orina se observar a 400 x Despus de incubar se realizar el recuento de colonias Se realizara la identificacin de los cultivos Se realizar el antibiograma si corresponde. Las muestras con ms de 5 leucocitos por campo de 400 x y con un recuento de colonias menor de 10,000 U.F.C./ml sern resembradas en agar sangre e incubadas en CO2 por 24 horas.

Clculos e Interpretacin
Se realizar un recuento de colonias, cada colonia se contabilizar como equivalente a 1000 U.F.C./ml. Para el recuento de colonias. Recuento menores de 10,000 U.F.C./ml. Se considern como contaminacin y los cultivos son reportados como negativos. Recuentos entre 10,000 y 100,000 U.F.C./ml. Son considerados como sospechosos, se realizar la identificacin y el antibiograma. Recuentos mayores de 100,000 U.F.C/ml. Son considerados como positivos y se realizar la identificacin y el antibiograma. La presencia de una muestra de una mujer con gran cantidad de clulas epiteliales, un recuento menor a 100,000 U.F.C./ml. y menos de 5 leucocitos por campo en el sedimento est asociado a contaminacin por flora vaginal y se reportar como cultivo negativo y presencia de flora vaginal

Clculos e Interpretacin
La presencia de ms tres colonias diferentes esta asociado a contaminacin, excepto en pacientes con presencia de sonda vesical, en los cuales es frecuente encontrar asociaciones de bacterias y hongos. Falsos positivos: > de 100,000 colonias sin infeccin Contaminacin con flora (higiene inadecuada), uretra, vagina, heces(lactantes). Fimosis, jabn contaminado, recipiente no estril, orinas no refrigeradas. Falsos Negativos: < de 100,000 colonias existiendo infeccin urinaria Orina con densidad menor de 1010, ph extremos, focos renales que no drenan a tubulis, bacterias que no crecen en los medios de cultivo, antibioticoterapia.

Archivo
Se anotar en un cuaderno de trabajo de urocultivos: Datos del paciente: nombre, fecha,edad, cdigo de ingreso, Mdico que indica la prueba Aspecto macroscpico y sedimento urinario. Resultado del cultivo, recuento de colonias e identificacin. Antibiograma Presencia de sustancias antibacterianas residuales Observaciones

Presencia de sustancias antibacterianas

Para determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orinas se utiliza los siguientes equipos y materiales: Equipos y materiales: Discos de papelfiltro Whatman N3 estriles de 6 mm de dimetro. Placa de Agar Mueller Hinton 100x15 mm. Tubo con solucin salina x 1 ml. Cepa de Bacillus subtilis ATCC 6633.

Presencia de sustancias antibacterianas

Procedimiento:

Hacer una suspensin de Bacillus subtilis en un tubo de solucin salina ,caldo Mueller Hinton o Caldo Tripticasa de soya, que sea similar al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland.
Sembrar la placa de agar Mueller Hinton con la suspensin de bacterias de manera similar a un antibiograma. Tomar con la pinza un disco de papel de filtro y sumergirlo en la orina. Colocarlo en la placa sembrada segn la plantilla. La placa ser incubada a 37C por 24 horas. Se observar la presencia de un halo de inhibicin alrededor del disco con la orina.

Presencia de sustancias antibacterianas

Interpretacin: Cualquier dimetro de halo se considerar como prueba positiva. La ausencia de halo se considerar como prueba negativa. El resultado se informa como sustancias antibacterias residuales: Positivo o Negativo.