Introduo Cromatografia

(grego) kroma [cor] + graph [escrever]

Tcnica utilizada para analisar, identificar ou separar os componentes de uma mistura. A Cromatografia definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a outra mvel. Esta separao depende da diferena entre o comportamento dos analitos entre a fase mvel e a fase estacionria. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade.

Classificao da Cromatografia

Cromatografia
Tcnica em que os componentes de uma mistura se separam de acordo com as velocidades s quais so transportados por uma fase mvel atravs de uma fase estacionria

Fase mvel (eluente) fase que se move (gs de arraste) gs - cromatografia em fase gasosa GC lquido - cromatografia em fase lquida LC

Fase estacionria fase fixa (em coluna ou em superfcie plana) normalmente um slido ativo pode ser um lquido depositado num suporte slido inerte (GC) eluio processo de passagem atravs da fase estacionria (por ao da fase mvel)

CROMATOGRAFIA GASOSA

A amostra transportada por uma corrente de gs atravs de uma coluna empacotada com um slido recoberta com uma pelcula de um lquido. O mtodo consiste primeiramente na introduo da mistura de prova ou amostra em uma corrente de gs inerte, normalmente hidrognio, hlio, nitrognio ou argnio, que atuaro como gs de arraste. As amostras lquidas vaporizam-se antes da injeo no gs de arraste.

Os sistemas de injeo mais comuns para a introduo de amostras de gs so vlvula amostradora e seringa.

medida que as substncias eluem da coluna, podem ser quantificadas por um detector e/ou tomadas para outra anlise.

As substncias que tm a maior interao com a fase estacionria so retidas por mais tempo e, por tanto, separadas daquelas de menor interao.

O fluxo de gs passa pela coluna empacotada atravs da qual os componentes da amostra se deslocam a velocidades influenciadas pelo grau de interao de cada componente com a fase estacionria no voltil.

TIPOS DE DETECTORES
Dispositivo que indica e quantifica os componentes separados pela coluna

DETECTOR POR CAPTURA DE ELTRONS (DCE OU ECD) Supresso de corrente causada pela absoro de eltrons por eluatos altamente eletroflicos.

DETECTOR POR CONDUTIVIDADE TRMICA (DCT OU TCD) Variao da condutividade trmica do gs de arraste.

DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA (DIC OU FID) ons gerados durante a queima dos eluatos em uma chama de H2 + ar.

Sistema de Injeo de Amostra

Os sistemas de injeo mais comuns para a introduo de amostras de gs em seringa.

As amostras gasosas e lquidas podem ser injetadas com uma seringa. Na forma mais simples a amostra injetada primeiro em uma cmara aquecida, onde se evapora antes de ser transferida para a coluna.

Representao de um Cromatograma

As molculas do soluto transportadas pela fase mvel tm tempos de reteno diferentes de acordo com os respectivos graus de adsoro na fase estacionria.

O tempo de reteno ou tempo estequiomtrico, tr, o tempo que decorre entre o ponto de injeco at meia eluio (mximo do pico).

5.62

Morfina

286.1/152.1 286.1/165.2

1.0e3 cps.

Cromatograma de 80 substncias (frmacos, drogas de abuso e praguicidas)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Time, min

8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 Time, min

Amostra sangue total de indivduo poli-intoxicado

Paracetamol

Citalopram Lidocaina

Amitriptilina

Medazepam Carbamazepina Cocaina Zolpidem

Nicotina 1.44 2

10

12

13.84 14 16 Time, min

19.01 18 20

22

24

26

28

Cromatografia em Papel (CP)

Ou PC, do ingls "paper chromatography uma tcnica de partio, utiliza dois lquidos, ou misturas de lquidos, um atuando como fase mvel (eluente) e outro, suportado sobre papel, atuando como fase estacionria. Ocorre a reteno das substncias devido s diferentes afinidades para com as fases estacionria e mvel. A origem dessa denominao prende-se ao fato de que, inicialmente, essa tcnica era empregada apenas na separao dos componentes de materiais coloridos

Utiliza-se papel normal ou papel de filtro (mais utilizado) como suporte da fase estacionria.

Cromatografia Camada Delgada CCD

Cromatografia planar, tambm chamada de camada fina, ou TLC ("Thin Layer Chromatography")

Mtodo rpido (20-40 min.) Uso de diversos agentes cromognicos Maior sensibilidade que Cromatografia de Papel (10-9 g) Grande gama de compostos pode ser analisada Mtodo simples e barato F.M. - sistema de solventes F.E - Adsorventes (slica, alumna, celite, amido) Mtodos de deteco: fsico-qumicos Princpio: Adsoro (polaridade)

Cromatografia em Coluna
Utiliza-se uma coluna de vidro aberta na parte superior e munida de uma torneira na extremidade inferior, por onde sai o lquido (eludo). Dentro da coluna encontra-se a fase estacionria constituda por um enchimento slido no caso da cromatografia de adsoro, ou por uma fase lquida no caso da cromatografia de partio. A fase mvel lquida em ambos os casos.

Cromatografia Lquida De Alta Eficincia HPLC

(CLAE, em ingls: High Performance/Pressure Liquide Chromatography, HPLC) Se distingue por usar a fase mvel alta presso (da o "pressure" da sigla em ingls). O uso de presses elevadas permite uma reduo no dimetro das partculas da fase estacionria promovendo uma separao mais eficiente dos componentes da amostra

Os componentes de um cromatgrafo lquido so: bomba, coluna cromatogrfica, detector e o registrador. um mtodo utilizado para separao de espcies inicas ou macromolculas e compostos termolbeis (compostos que decompem com o efeito da temperatura).

RESUMO

Espectrometria de Massas

Espectrometria de Massas
A espectrometria de massa um mtodo para identificar os diferentes tomos que compe uma substncia. Um espectrmetro de massa bombardeia uma substncia com eltrons para produzir ons, ou tomos eletricamente carregados Os ons atravessam um campo magntico que curva suas trajetrias de modos diferentes, dependendo de suas massas.

O campo separa os ons em um padro chamado espectro de massa. A massa e a carga dos ons podem ser medidas por sua posio no espectro.
Os cientistas identificam assim os elementos e istopos presentes na amostra.

Espectrometria de Massas
Ionizao
+

Analisador/Filtro de MASSA

Detector

Analyzer
Source Gerao de ons (molculas carregadas) Separao dos ons atravs da massa/carga (m/z)

Ion Detection

Deteco dos ons

Inlet

Slido Lquido Vapor

Introduo da Amostra
Molculas estado de vapor (gasoso)

Espectro de Massa

Interpretao dos resultados

AULA

PRTICA:

Cromatografia Camada Delgada CCD Anlise Cromatogrfica de Pigmentos Avaliar a separao de pigmentos pela tcnica da CCD. Estudar o emprego de tcnicas cromatogrficas para separao e anlise de substncias em funo de sua estrutura qumica e do fenmeno de adsoro cromatogrfica.

O parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (Rf), o qual a razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel.
Os valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6.

Rf

distncia percorrida pela substncia distncia percorrida pela fase mvel

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introduo a mtodos cromatogrficos. 5 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1993.
LOUGH, W.J. e WAINER, I.W. High Performance liquid chromatography: fundamental principles and practice. Blackie Academic and Professional, 1995.

CHAVES, M.H.; Anlise de extratos de plantas por CCD: uma metodologia aplicada disciplina Qumica Orgnica. Qumica Nova, v. 20, n. 5, p. 560562, 1997.
ANDRADE, J.B.; PINHEIRO, H.L.C.; LOPES, W.A.; MARTINS, S.; AMORIM, A.M.M. e BRANDO, A.M. Determinao de cafena em bebidas atravs de cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). Qumica Nova, v. 18, n. 4, p. 379-381, 1995. NETO, F.R.A.; CGAR em anlise de resduos. Qumica Nova, v. 18, n. 1, p.65-67, 1995.