Rol del Laboratorio de microbiologa

Apoyo en el diagnstico de las enfermedades infecciosas

1.
2. 3. 4.

Identificacin del agente etiolgico: seleccin del mejor examen y de la mejor muestra.
Informe de susceptibilidad a antimicrobianos. Contribuir al control de la resistencia bacteriana Implementacin de tecnologa moderna: tiempo de respuesta, sensibilidad y especificidad.

Mtodos de diagnstico microbiolgico

Observacin c/s tinciones

Cultivos: Identificacin/sensibilidad Deteccin de antgenos Deteccin de anticuerpos: serologa Deteccin de cidos nucleicos

Mayor rapidez

Alta calidad Costo/beneficio

Tincin de Gram
Se debe solicitar siempre De bajo costo y gran utilidad: 1.Orientacin diagnstica rpida 2. Caractersticas inflamatorias 3. infecciones mixtas (anaerobios) Sensibilidad analtica: 100.000 bacterias/ml muestra

Baciloscopa
Se debe solicitar en TODO paciente con sntomas respiratorios. De bajo costo y gran utilidad: 1. Rpida 2. Fcil disponibilidad 3. Indice de infectividad
Tincin de Ziehl Neelsen

Sensibilidad analtica: 5.000 a 10.000 bacilos por ml de muestra.

Tinciones para Hongos

Diagnstico de infecciones invasoras en muestras clnicas es difcil.
Blanco de calcoflor es una tincin especfica para hongos (quitina). Mejora la sensibilidad

Cultivos
Se
considera de el mtodo y de referencia y la porque permite de la la

confirmacin

gnero

especie

determinacin

susceptibilidad a drogas.

En el caso de bacterias y hongos la automatizacin ha permitido disminuir los tiempos de respuesta (mejores sistemas de deteccin).

Cultivos bacterianos y de hongos

Requiere bacterias y hongos viables Requieren medios de transporte, especialmente anaerobios

Medios lquidos son ms sensibles que los slidos

Una buena alternativa en punciones y muestras lquidas es la inoculacin en botellas de hemocultivos

Cultivos bacterianos y de hongos

Diagnstico macroscpico y microscpico Identificacin y sensibilidad a drogas Diferentes plazos de entrega:
Cultivo corriente: 48 horas Cultivo anaerbico: 7 das

Cultivo de hongos: 7 das a 4 semanas Cultivo de Micobacterias: 8 semanas

Susceptibilidad bacteriana
La resistencia bacteriana es un problema emergente

Staphylococcus aureus R a meticilina Streptococcus pneumoniae R a penicilina Enterococcus R a Vancomicina E. coli y K. pneumoniae R a todos los -lactmicos (ESBL)
Test de susceptibilidad: Estandarizacin de AAM ensayados e informados Depende de complejidad de los pacientes y patrones locales de R Resultado requiere reporte selectivo e interpretacin adecuada

Kirby-Bauer S -I - R

Concentracin inhibitoria mnima

Mtodos: Dilucin en agar Ej. Cefazolina, Escherichia coli Cortes : Sensible= 2 g/ml Intermedio =4- 8 g/ml Resistente: 16
2 2 2 2 2 4 4 4 4 4

Susceptibilidad bacteriana

8
8 8 8 8

16
16 16 16 16

CIM 2 CIM = 4 CIM = 8 CIM = 16 CIM 16

S 2 I 4 I 8 R16 R 16

Cumplimiento de la fase pre analtica Adecuada muestra Medios de cultivos atemperados Libres de agua de condensacin. Trabajar en una campana de bioseguridad muestras. Uso de mecheros o incinerador

Fernndez y cols. 2005. Gestin de calidad en el laboratorio

Recogida de muestras Responsabilidad y supervisin facultativa Normas de asepsia Muestra representativa del proceso Cantidad/Recipiente/Identificacin correcta Evitar contaminacin con flora saprfita Retrasar tratamiento Transporte rpido (refrigeracin)

ORINA Frasco de boca ancha y tubo con vaco Porcin media de 1 orina de la maana Limpieza escrupulosa de genitales La bolsa (nios) se cambiar cada hora Volumen mnimo 10 ml para cultivo bacterias y Levaduras 50 ml para tuberculosis

HECES (coprocultivo) No se admitirn heces formes Frasco de boca ancha 2-5 g de heces recientes (pus, moco, sangre) Remitir rpidamente al laboratorio mantener a 4C si se demora el envo

Exudados /Abscesos Limpiar la superficie con suero fisiolgico y gasa Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando de las zonas profundas Cuando sea necesario instilar suero y aspirarlo nuevamente Slo cuando lo anterior no sea posible se utilizaran escobillones enviando

Uso de asas calibradas ( recuento de microorganismos ). Buena siembra en estra. ( trabajar con colonias perfectamente aisladas ).

Elston D. 2008. Clin Lab Med 28:173-177

Seleccin de medios de cultivo Generales, selectivos, selectivosdiferenciales. Necesidades particulares de cada hospital Comunicacin laboratorio rea clnica . Realizacin de tablas de siembra.

2007. Clinical Microbiology Procedures Hanbook 2nd Edition . ASM

PRIMERA ETAPA :

Observacin de la colonia. Ahorro de tiempo y dinero en el Dx. Morfologa, color Interaccin con el medio ( hemolisis )

Medios cromognicos Sensibilidad a antibiticos: S. pneumoniae S opt S. pyogenes S bac Pruebas complementarias: Oxidasa,catalasa,coagulasa Aglutinacin con antisueros especficos.

Basa en realizacin pruebas bioqumicas A partir de cultivos puros. Bioqumicas: manuales o por sistemas semi automatizado.

Toma de muestra y adecuado transporte. Manipulacin de la muestra rigurosamente. Control de material y equipos:

Temperatura estufas, refrigeradores Campanas de incubacin Pipetas automticas: calibracin Sistemas automatizados

Esterilidad del medio: se comprobara en cada lote Eficacia del medio (utilizacin de cepas ATCC).

Los reactivos se controlan cada vez que se preparan o nuevo frasco Colorantes de tincin, fijadores reveladores de pruebas bioqumicas. Eficacia se comprueba con microorganismos que dan respuesta positiva y negativa. Discos para pruebas diferenciales refrigerado con un desecante

Control de discos de antibiograma : cepas cuya sensibilidad conocida: E. coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Control de antisuero y antgenos Control de resultados intralaboratorios e interlaboratorios.

Captura de resultados : manual o automtica. Validacin de resultados Envi de resultados impresosinternet Impresin de Diarios de Trabajo.

Tiempo de respuesta del lab para sol urgentes ( min ) Proporcin de reediciones diarias de informes ya entregados: No. reediciones de informes/No. total informes Proporcin de informes reclamados por demoras.

Indicadores herramientas objetivas evaluar las disposiciones establecidas y ver posibilidades de mejora.