UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA-X Cromatografa de por intercambio inico

EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS

DOCENTE: FRANCISCO LPEZ NARANJO MIRIAM FELIPE MONROY JESUS ALBERTO RUIZ PADILLA LUIS IVN TINAJERO LIRA KARLA ALEJANDRA FALCN ELIZRRAGA JAIR OXWALD HERNNDEZ SERNA 03 de septiembre de 2013

 Es un proceso que permite la separacin de iones y molculas polares basado en las propiedades de carga de las molculas. Resinas de intercambio inico Cuando una muestra inica atraviesa estas columnas, los iones presentes se separan debido a las diferentes retenciones que sufren al interactuar con la fase fija de las columnas analticas.

Muestra

Detector (espectrofotomtrico o electroqumico)

Seal

Resultado: Cromatogrmas donde la posicin de los mximos nos indica el in presente (carcter cualitativo) y su rea nos indica la cantidad existente de dicho in (carcter cuantitativo).

Equilibrio de intercambio inico

Los procesos de intercambio inico se basan en los equilibrios de intercambio entre los iones de una solucin y los iones del mismo signo que estn en la superficie de un slido.

Sitios mas comunes de intercambio:

Considerando la reaccin entre un ion de una sola carga, B+, con una resina de cido sulfnico en una columna cromatogrfica, a partir de una solucin neutra.

La elucin con una solucin diluida de cido clorhdrico desplaza el equilibrio hacia la izquierda.

La constante de equilibrio para esta reaccin es:

Al seleccionar un ion de referencia comn como el H+, se pueden comparar de manera experimental los coeficientes de sitribucin de distintos iones para una resina.

Rellenos de intercambio inico

Emplea pequeas cuentas esfricas y porosas que se forman en la copolimerizacin del estireno y del divinilbenceno en emulsin. Activar el polmero frente a los iones, a la estructura se le unen qumicamente grupos funcionales cidos o bsicos.
Descalcificacin

Tipos de resinas de intercambio inico

Desnitratacin Desionizacin Desnitratacin

Tipos de resinas de intercambio inico

Resinas catinicas de cido fuerte Intercambian iones positivos (cationes). Funcionan a cualquier pH.

Como primera columna de desionizacin en los desmineralizadores o lechos mixtos; suaviza el agua.
Elimina los cationes del agua. Necesitan una gran clorhdrico (HCl). cantidad de regenerante, normalmente cido

Resinas catinicas de cido dbil Tienen menor capacidad de intercambio.

No son funcionales a pH bajos.

Elevado hinchamiento y contraccin lo que hace aumentar las perdidas de carga o provocar roturas en las botellas cuando no cuentan con suficiente espacio en su interior. Requiere menos cido para su regeneracin, aunque trabajan a flujos menores que las de cido fuerte. Es habitual regenerarlas con el cido de desecho procedente de las de cido fuerte.

Tipos de resinas de intercambio inico

Resinas aninicas de base fuerte Intercambian iones negativos (aniones). Como segunda columna de desionizacin en los desmineralizadores o para lechos mixtos; suaviza el agua. Elimina los aniones del agua Necesitan una gran cantidad de regenerante, normalmente sosa (hidrxidosdico - NaOH).

Resinas aninicas de base dbil

Requiere menos sosa para su regeneracin. No se puede utilizar a pH altos. Pueden sufrir problemas de oxidacin.

Cromatografa de iones inorgnicos

Fase mvil:
Debe poder disolver la muestra Proporcionar tiempos de retencin razonables (K) Debe interactuar con los solutos favoreciendo la selectividad Puede contener metanol u otros disolventes miscibles en agua

Cromatografa inica con inhibidores Columna inhibidora del eluyente

Est rellena con una segunda resina de intercambio inico, convierte los iones del solvente en especies moleculares de ionizacin limitada, sin afectar la conductividad causada por los iones del analito. Ej. Cuando se separan y determinan cationes, se elije cido clorhdrico como reactivo eluyente, y la columna inhibidora es una resina de intercambio aninico en la forma de hidrxido. H (ac) + Cl (ac) + resinaOH(s) resinaCl(s) + HO

Cromatografa inica con una sola columna

Estos sistemas se basan en las pequeas diferencias de conductividad entre los iones de la muestra y los iones del eluyente.
Se utilizan intercambiadores de baja capacidad.
Se escogen eluyentes de baja conductividad.

Esta cromatografa tiene la ventaja de que no requiere equipo especial para la inhibicin, pero es un mtodo menos sensible para determinar aniones que los mtodos de columna inhibidora.

Aplicaciones orgnicas y bioqumicas de la cromatografa de intercambio de iones

Frmacos y sus metabolitos Sueros Conservadores Mezclas de vitaminas Azcares Preparaciones farmacuticas

Separacin de aminocidos mediante una columna de intercambio inico.

Cromatografa de exclusin de iones

No es una cromatografa inica debido a que se separan sustancias neutras y no iones. Se utilizan columnas de intercambio inico para realizar las separaciones.

 La cromatografa de exclusin de iones tiene distintas aplicaciones en la identificacin y determinacin de especies cidas en distintas muestras.

ESTANDAR EXTERNO

Mtodo cuantitativo Se utiliza una sustancia de concentracin conocida. Estructura analito. OBJETIVO. Contrastar y comparar la concentracin del analito con la del estndar de referencia. similar al

Se hace una curva de calibracin. Se inyecta antes de introducir el analito y se compara la concentracin obtenida con la del estndar Se utiliza principalmente en cromatografa de lquidos VENTAJAS Mtodo cuantitativo. Eficacia. Exactitud en el resultado DESVENTAJAS

Lectura y anlisis del cromatograma

Costo

ESTANDAR INTERNO
Una cantidad conocida del estndar interno se aade a las muestras y a los patrones
Debe ser una sustancia de naturaleza similar al analito De seal facilmente medible y que no interfiera con la respuesta del analito

Se determinan las respuestas del analito y del estndar

interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera si se vara algn parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas (del analito y estndar interno) se deben afectar por igual. Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del estndar interno) depende solamente de la concentracin de analito.

APLICACIONES

Cromatografa de gases

Cromatografa de absorcin atmica

Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el mtodo del patrn interno, los pasos a seguir son los siguientes: Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del patrn correspondiente al compuesto a cuantificar.
Aadir a cada uno de los patrones y a la muestra una misma cantidad o concentracin de patrn interno. Inyectar el mismo volumen en el cromatgrafo de cada una de las disoluciones patrn que contienen el patrn interno, as como del extracto de la muestra que tambin contiene el patrn interno.

Determinar un analito cuya concentracin en el extracto de la muestra, se espera que est comprendida en un margen de 350 a 550 mg/L, se podran preparar e inyectar en el cromatgrafo 4 disoluciones patrn que adems contuvieran una misma concentracin de patrn interno (p.i.), con las siguientes concentraciones: Patrn 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 2: 400 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 3: 500 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 4: 600 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Muestra: ? mg/L analito + 350 mg/L p.i.

Cromatogrma de la disolucin patrn 1 (300 mg/L analito + 350 mg/L p.i.)

Cromatogrma de la disolucin patrn 2 (400 mg/L analito + 350 mg/L p.i.)

Cromatogrma de la disolucin patrn 3 (500 mg/L analito + 350 mg/L p.i.)

Cromatogrma de la disolucin patrn 4 (600 mg/L analito + 350 mg/L p.i.)

Cromatogrma de la muestra (? Mg/L analito + 350 mg/L p.i.)

Cmo se puede cuantificar el analito en la muestra con los datos del cromatograma?
Tabla (concentracin de analito, concentracin de patrn interno, rea del pico del analito y rea del pico del patrn interno)

Recta de calibrado (rea del analito/rea del p.i. frente a concentracin del analito/concentracin del p.i)
Ecuacin de la recta (concentracin de analito/concentracin del p.i. Sustituir y rea del analito/rea del p.i. en el cromatrogrma de la muestra. Despejar x (concentracin de analito/concentracin de p.i.)

Cacular la concentracin del analito (Multiplicando x por la concentracin del p.i)

Concentraciones y reas de los picos del analito y del patrn interno (p.i.) obtenidos en los cromatogrmas de los patrones y en la muestra. Representando rea del analito/rea del p.i frente a concentracin de analito/concentracin de p.i.

Recta de calibrado obtenida con los datos de la tabla.

Calcular la concentracin en el extracto de la muestra

Se sustituye y por el rea de analito/rea de p.i.

1268,4/903,6 = 1,40)

Despeja r x (concentracin de analito/concentracin de p.i.)

C analito/C p.i. = x = (1,40+0,5593)/1,2611 = 1,56

Concentracin del analito se multiplica "x" por la concentracin de p.i. X= 1.56 p-.i.= 350 mg/L C de analito en el extracto de la muestra = 1,56 * 350 (mg/L) = 544,8 mg/L

c) ADICIONES ESTNDAR

Se usa cuando es imposible suprimir interferencias fsicas

o qumicas en la matriz de la muestra. (Anlisis de muestras complejas debido a los efectos producidos por la matriz).

Se preparan una serie de disoluciones patrn de forma que

cubran un intervalo de concentraciones adecuado y que

tengan una composicin en matriz parecida a la de la muestra. Tambin se prepara un blanco, este tiene igual composicin que los dems estndares pero sin el analito. Su seal debera ser cero pero a veces por efecto del ruido de fondo no es as. Una vez obtenida la grfica, se interpola la seal de la muestra y se obtiene la concentracin de analito en la muestra.

Estndar Externo

Ventajas

Presicin Costo

Desventajas

No es posible identificar mal manejo de muestra La calibracin debe repetirse peridicamente Mtodo tedioso

Estndar Interno
Ventajas Tiempo Es posible identificar mal manejo de la muestra Presicin Desventajas
Costo

Adiciones de estndar
Ventajas til cuando no se pueden suprimir interferencias Costo Desventajas

Mtodo de extrapolacin (menos preciso)

El resultado se obtiene en una zona de la grfica donde no hay puntos experimentales

Mtodo difcil de automatizar

Cantidad de muestra

INSTRUMENTACIN PARA CROMATOGRAFA DE LQUIDOS.

Suministro de fase mvil. Sistema de bombeo. Vlvula de inyeccin de muestra. Columna. Detector. Ordenador.

COMPONENTES DE UN CROMATGRAFO DE LQUIDOS DE ALTA EFICACIA.

Recipientes de los disolventes.

SISTEMA DE BOMBEO.

Proporciona un caudal constante a travs de la columna.

Tipos de bombas:
o Reciprocas. o De desplazamiento. o Neumaticas.

SISTEMA DE INYECCIN DE LA MUESTRA.

Volumen de la muestra: decimas de microlitro a 500 microlitros.

 En cromatografa de lquidos el mtodo ms ampliamente utilizado para la introduccin de la muestra utiliza bucles de muestra. Estos dispositivos estn normalmente integrados en el equipo cromatogrfico y hay bucles intercambiables que permiten la eleccin de tamaos de muestra desde 5 a 500 L.

PRECOLUMNA Y COLUMNA.

DETECTORES.
o o o o o o De ultravioleta De ndice de refraccin. Electroqumico. De fluorescencia. De espectrometra de masas. De infrarrojo con trasformada de Fourier