Enzima DNA polimerasa I

Sanabrais Jimnez Marco Antonio Serrano Vega Jos Roberto Zavaleta Bahena Azucena

INTRODUCCIN
La replicacin del DNA es un evento en el que dos clulas hijas transmiten la informacin gentica Se lleva acabo en la fase S del ciclo celular. Bioqumica de la replicacin Mediados de 1950 por Arthur Kornberg DNA polimerasa I.

Precipitacin acida

Conteo de DNA radioactivo

Kornberg dedujo que los sustratos para la replicacin del DNA deban ser derivados activados de los residuos de nuclotidos del DNA. Incubo dNTPs marcados radioactivamente con un extracto de protenas solubles de E. coli Se observo que la cantidad de radioactividad incorporaba sustancias de alto peso molecular Cuantificandose mediante presipitacin acida y conteo de ADN radioactivo. Para que se realizara la reaccin se requera la adiccin de DNA y de Mg2+.

Actividades

Estructura.
La enzima tiene un peso molecular de 103 KDa. La enzima de la DNA polimerasa 1 consta de 928 aminoacidos, organizados en 2 fragmentos, uno pequeo y uno grande o fragmento klenow. Contiene 43 % de - hlice , 17 % de -plegada , 58 -vueltas.

Estructura
Estructura primaria Estructura secundaria

Estructura terciaria

MECANISMO DE LA DNA POLIMERASA

1. Primero la base correspondiente al nucletido complementario por medio del apareamiento especfico de las bases de la cadena molde. El grupo 3-OH del ultimo nucletido incorporado fija nucleoflicamente en la nueva cadena el grupo fosfato del nuclesido trifosfato fijado, lo que proporciona la salida de difosfato para formar un nuevo enlace fosfodister.
El mecanismo descrito da como resultado la lectura de la matriz en la direccin 35. Dicho de otra manera, la nueva cadena sintetizada crece siempre en direccin 53.

2.

3.

Cuando se purifico la enzima DNA polimerasa de E. coli se observ que estaba formada de una sola cadena polipeptidica.

Actividad enzimtica
Clasificacion del congreso de enzimas: 2.7.7.7, DNA nucleotidiltransferasa. Vmax = 16-20 nt/ segundo Sitios activos: 3 pI: 5.40 (teorico)

MITOMICINA

BLEOMICINA

ANTIBITICOS INHIBIDORES DE LA ADN POLIMERASA

ACTINOMICINA

NEOMICINA

A P L I C A C I O N E S

Fabricacin de copolmeros alternantes tales como poli d(A-T) y homopolmeros tales como poli dG-poli dC

Sntesis de DNA de doble cadena a partir de muestras de cadena simple

Indicado para aquellas aplicaciones que requieran una enzima altamente termoestable y procesiva capaz de sintetizar cadenas de ADN a elevadas temperaturas en reacciones de amplificacin o similares Reaccin en Cadena de la Polimerasa conocida como PCR

Sntesis de DNA de doble cadena a partir de muestras de cadena simple

Preparacin de sonda de DNA radioactivas

Anlisis y cuantificacin expresin gentica Medicina forense Dx

PCR
Clonacin Genes resistencia

Control descendencia

Comprobacin transgen

EXTRACCIN DE CIDOS NUCLEICOS COMPROBACIN DE LA EXTRACCIN PREPARACIN DE LA MEZCLA PARA EL PCR DNA DIANA Primers Taq Polimerasa I dNTPs Tampn de Amplificacin AMPLIFICACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS EXTRADOS POR PCR DETECCIN E INTERPRETACIN

Procesamiento de la muestra Extraccin de los cidos Nucleicos Precipitacin de los cidos Nucleicos

Desnaturalizacin Acoplamiento Polimerizacin

Anlisis Electrofortico por comparacin con patrones moleculares conocidos Anlisis secundarios de Restriccin, Hibridacin, etc.