MUTACIN

Definicin: Se define como mutacin a todo cambio hereditario en la

secuencia de bases del ADN (o ARN) que no resulte de la incorporacin
de material gentico exgeno. Dicho cambio puede manifestarse o no
fenotipicamente.
Las mutaciones se pueden clasificar por la forma en que ocurren o por
la alteracin en el genotipo que producen.
SELECCIN
Definicin: En un cultivo puro hay varios miles de clulas mutantes
para cualquier gen, que consideremos, por lo tanto un cultivo grande
de bacterias tiene una gran variabilidad potencial, dispuesta a
intervenir en respuesta directa a los cambios ambientales . Esto
significa que ninguna poblacin grande de bacterias es genticamente
pura. Las selecciones se hacen con antibiticos, temperatura, presin
osmtica, etc.
ADAPTACIN
Definicin: Puede ser de origen gentico o no, las de origen
gentico, consisten en la accin de seleccin sobre las variaciones
heredables. Las no heredables o fisiolgicas consisten en una
adecuacin fenotpica directa. La clula sufre un cambio fisiolgico
no heredable en respuesta directa al ambiente.
Los microorganismos mediante tcnicas especificas sufren
cambios en el genotipo o fenotipo que las hacen aptas para
desarrollarse.
MUTACIN ESPONTNEA E INDUCIDA
1. Mutacin espontnea: se produce de forma natural o normal en los
individuos.
2. Mutacin inducida: se produce como consecuencia de la exposicin a
agentes mutagnicos qumicos o fsicos.

MUTACIONES GNICAS
1. Sustituciones de bases: cambio o sustitucin de una base por otra en el
ADN.
2. Transiciones: cambio de una purina (Pu) por otra purina, o bien cambio de
una pirimidina (Pi) por otra pirimida.
3. Transversiones: cambio de una purina (Pu) por una pirimidina (Pi) o
cambio de una pirimidina (Pi) por una purina (Pu).
4. Inserciones o adiciones y deleciones de nucletidos: se trata de
ganancias de uno o ms nucletidos (inserciones o adiciones) y de
prdidas de uno o ms nucletidos (deleciones). Tienen como
consecuencia cambios en el cuadro o pauta de lectura cuando el nmero
de nucletidos ganado o perdido no es mltiplos de tres.
5. Duplicaciones: consiste en la repeticin de un segmento de ADN del
interior de un gen.
6. Inversiones: un segmento de ADN del interior de un gen se invierte, para
ello es necesario que se produzcan dos giros de 180 , uno para invertir la
secuencia y otro para mantener la polaridad del ADN.
7. Transposiciones: un segmento de un gen cambia de posicin para estar
en otro lugar distinto del mismo gen o en otro lugar del genoma.
Tipos de mutaciones gnicas Resultados y ejemplos
en el ADN en el ADN
Transiciones PuPu o PiPi: ATGC, GCAT ,
CGTA y TACG
Transversiones PuPi o PiPu: ATCG,A T TA ,
GCTA, GCCG, TAGC,
T A AT, CGAT y CGGC
En la protena En la protena
Mutacin silenciosa Tripletes que codifican para el mismo
aminocido: AAG(arg)CGG(arg)
Mutacin neutra Tripletes que codifican para aminocidos
equivalentes distintos. AAA(lys)AGA(arg).
Ambos son aminocidos bsicos
Mutacin cambio de sentido Aparece un nuevo triplete que codifica para un
aminocido de distinto tipo. La protena pierde
su funcin.
Mutacin sin sentido Aparece un triplete de terminacin o FIN:
CAG(gln)UAG(FIN)
Mutacin cambio de fase o pauta de lectura
Adicin o delecin de un nico par de
nucletidos o de varios pares de nucletidos,
siempre que no sean mltiplo de tres
MUTACIN SILENCIOSA
Una mutacin silenciosa es cualquier alteracin en la
secuencia de nucletidos del ADN que no produce
cambio en el fenotipo estudiado. Imaginemos que la
caracterstica externa o fenotipo analizado es
simplemente la funcin de un enzima, es evidente que
existen mutaciones en la secuencia de nucletidos del
ADN que no producen cambios en la secuencia de
aminocidos, pero tambin hay mutaciones en el ADN
que producen cambios en la secuencia de aminocidos
que no alteran la funcin del enzima analizado. Ambas
tipos de mutaciones son silenciosas, ya que ninguna
altera la funcin del enzima.
MUTACIONES ESPONTNEAS
Las principales causas de las mutaciones que se
producen de forma natural o normal en las poblaciones
son tres:
Errores durante la replicacin.
Lesiones o daos fortuitos en el ADN.
Los elementos genticos transponibles.

ERRORES EN LA REPLICACIN
Vamos a considerar tres tipos de errores durante la replicacin del ADN:
La tautomera: las bases nitorgenadas se encuentran habitualmente en su
forma cetnica y con menos frecuencia aparecen en su forma tautomrica
enlica o imino. Las formas tautomricas o enlicas de las bases nitrogenadas
(A*, T*, G* y C*) muestran relaciones de apareamiento distintas: A*-C, T*-
G, G*-T y C*-A. El cambio de la forma normal cetnica a la forma enlica
produce transiciones.
Las mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura: se trata de
inserciones o deleciones de uno o muy pocos nucletidos. Segn un modelo
propuesto por Streisinger, estas mutaciones se producen con frecuencia en
regiones con secuencias repetidas. En las regiones con secuencias repetidas,
por ejemplo, AAAAAAAAAAA..., o por ejemplo, ATATATATATATATAT....,
durante la replicacin se puede producir el deslizamiento de una de las dos
hlices (la hlice molde o la de nueva sntesis) dando lugar a lo que se llama el
"apareamiento errneo deslizado". El deslizamiento de la hlice de nueva
sntesis da lugar a una adicin, mientras que el deslizamiento de la hlice
molde origina una delecin
Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de
regiones relativamente grandes tambin se han detectado con bastante
frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli se
han detectado deleciones grandes que tienen lugar entre secuencias
repetidas. Se cree que estas mutaciones podran producirse por un sistema
semejante al propuesto por Streisinger ("Apareamiento errneo deslizado") o
bien por sobrecruzamiento desigual. Del sobrecruzamiento desigual
hablaremos ms adelante en el curso.

LESIONES O DAOS FORTUITOS EN EL ADN
Pueden darse tres tipos de daos fortuitos en el ADN:
Despurinizacin: rotura del enlace glucosdico entre la base nitrogenada y el
azcar al que est unida con prdida de una Adenina (A) o de una Guanina
(G). Como consecuencia aparecen sedes Apurnicas. Existe un sistema de
reparacin de este tipo de lesiones en el ADN. Este tipo de lesin es la ms
recurrente o frecuente: se estima que se produce una prdida de 10.000 cada
20 horas a 37C.
Desaminacin: consiste en la prdida de grupos amino. La Citosina (C) por
desaminacin se convierte en Uracilo (U) y el Uracilo empareja con Adenina
(A) producindose transiciones: GCAT. El Uracilo (U) no forma parte del
ADN, existindo un enzima llamada glucosidasa de uracilo encargada de
detectar la presencia de U en el ADN y retirarlo. Al retirar el Uracilo (U) se
produce una sede apirimidnica. La 5-Metil-Citosina (5-Me-C) por
desaminacin se convierte en Timina (T). La Timina (T) es una base normal en
el ADN y no se retira, por tanto estos errores no se reparan. Este tipo de
mutacin tambin genera transiciones.
Daos oxidativos en el ADN: El metabolismo aerbico produce radicales
superoxido O2, perxido de hidrgeno H2O2 e hidroxilo. Estos radicales
producen daos en el ADN, y una de las principales alteraciones que originan
es la transformacin de la Guanina (G) en 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que
aparea con la Adenina (A). La 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina recibe el
nombre abreviado de 8-oxo-G. Esta alteracin del ADN produce
transversiones: GCTA. La Timidina se convierte en Glicol de timidina.

TRANSPOSONES EN BACTERIAS
La existencia de transposones o elementos genticos mviles se
demostr en bacterias. En bacterias existen dos tipos de elementos
genticos mviles:
Tipos de transposones:
Transposn Simple, Secuencia de Insercin o Elemento de
Insercin (IS): los transposones simples contienen una secuencia
central con informacin para la transposasa y en los extremos una
secuencia repetida en orden inverso. Esta secuencia repetida en
orden inverso no es necesariamente idntica, aunque muy parecida.
Cuando un transposn simple se integra en luna determinado punto
del ADN aparece una repeticin directa de la secuencia diana (5-12
pb).
Transposn Compuesto (Tn): contienen un elemento de insercin
(IS) en cada extremo en orden directo o inverso y una regin central
que adems suele contener informaciin de otro tipo. Por ejemplo,
los Factores de transferencia de resistencia (RTF), poseen
informacin en la zona central para resistencia a antibiticos
(cloranfenicol, kanamicina, tetraciclina, etc

Tipos de transposicin:
En general se distinguen dos tipos o formas de
transposicin:
Transposicin conservativa: el transposn
sale de la sede donadora que queda vaca y se
incorpora en una nueva sede (sede receptora).
No aumenta el nmero de copiasz del
transposn en el interior de la clula.
Transposicin replicativa: el transposn
permanece en la sede donadora y mediante un
mecanismo combinado de replicacin y
recombinacin se incorpora en la sede
aceptora. Aumenta el nmero de copias del
transposn en el interior de la clula.

MUTACIONES INDUCIDAS
MECANISMOS DE MUTAGNESIS

Los principales mecanismos por los que se producen las
mutaciones son los siguientes:
1. Remplazar una base en el ADN.
2. Mutgenos que alteran las bases produciendo emparejamientos
errneos especficos.
3. Agentes de tipo intercalante.
4. Mutgenos que producen prdida del emparejamiento especfico.

1. Remplazar una base en el ADN: Los anlogos de bases son
compuestos qumicos que pueden remplazar a una base
determinada. Por ejemplo, el 5-Bromouracilo (5BU) es anlogo de
la Timina (T) y puede remplazarla. El 5BU en su forma cetnica
empareja con la Adenina (A) mientras que en su forma enlica
(5BU*) empareja con la Guanina (G). El 5BU es ms inestable y
produce transiciones. La 2-Aminopurina (2AP) es anlogo de la
Adenina (A) y puede remplazarla. La 2AP aparea con la Timina (T)
pero en su forma imno (2AP*) empareja con la Citosina (C). Esta
alteracin produce transiciones.

2. Mutgenos que alteran las bases produciendo
emparejamientos errneos especficos: existen varios tipos de
agentes mutagnicos que alteran las bases nitrogenadas
produciendo emparejamientos errneos
3. Agentes alquilantes: como el EMS que aade radicales etilo y
produce transiciones GCAT. La NG aade radicales metilo y
produce tambin transiciones GCAT.
4. Hidroxilamina (HA): produce especficamente transiciones
GCAT.
5. Iones bisulfito y cido nitroso: producen desaminacin. El cido
nitroso transforma la Citosina (C) en Uracilo (U), el Uracilo (U)
empareja con la Adenina (A) produciendo transiciones. La
desaminacin de las Adenina (A) la convierte en hipoxantina (H)
que empareja con la Citosina (C) produciendo transiciones.
6 Agentes de tipo intercalante como la Proflavina, Naranja de
acridina y Compuestos ICR: son compuestos con estructuras
planas que se meten o intercalan entre las bases nitrogenadas del
ADN produciendo adiciones o deleciones de un solo par de
nucletidos

Mutgenos que producen prdida del emparejamiento
especfico: estos mutgenos daan muchas bases nitrogenadas y
producen como consecuencia un bloqueo de la replicacin del ADN.
La mayora de los compuestos cancergenos producen este tipo de
alteraciones. Debido a la gran cantidad de alteraciones que
producen en el ADN como primera medida se produce un bloqueo
de la replicacin y se ponen en marcha un sistema de emergencia
denominado abreviadamente SOS para reparar los daos y permitir
que la clula se replique y pueda seguir viviendo. El sistema SOS
consta de al menos tres genes denominados recA, umuC y umuD.
Este sistema produce un relajamiento de la especificidad de
apareamiento de la ADN polimerasa III de E. coli. Algunos ejemplos
de esta situacin son:
Luz ultravioleta (UV): produce dmeros de pirimidinas. Cuando
hay dos pirimidinas sucesivas en la misma hlice la luz UV hace
que se produzcan puente de hidrgeno entre ambas. Los ms
frecuentes son los dmeros de Timinas.
Aflatoxina B1: se une a la Guanina (G) modificndola de manera
que la Guanina modificada se separa del azcar al que estaba
unida produciendo una sede apurnica. El sistema SOS pone
habitualmente en la sede apurnica una Adenina (A) dando lugar a
transversiones. Es un potente carcingeno.
Benzopireno: es un producto resultante de los motores de
combustin y es un potente carcingeno

REPARACIN DE LOS DAOS EN EL ADN

Cono hemos venido viendo hasta el momento, existen muchos
agentes fsicos y qumicos que pueden producir lesiones en el ADN.
Por tanto, deben existir mecanismos que permitan prevenir y reparar
los daos que se producen en el material hereditario tanto de forma
espontnea como los inducidos.
Como ya hemos visto cuando hablamos de la replicacin del ADN,
la propia ADN polimerasa III posee la subunidad que tiene una
funcin correctora de pruebas que permite detectar cuando la ADN
polimerasa ha introducido un nucletido que no es el correcto y
retirarlo. Este es un primer mecanismo que evita que se produzcan
mutaciones durante la replicacin. Adems de este mecanismo
existen otros que previenen posibles daos y que reparan las
lesiones producidas:
Sistemas que evitan los errores antes de que ocurran.
Reparacin directa de las lesiones en el ADN.
Sistemas de reparacin por escisin.
Reparacin posterior a la replicacin.
SISTEMAS QUE EVITAN LOS ERRORES ANTES DE
QUE OCURRAN

Superxido dismutasa: este enzima convierte los radicales
superxido en perxido de hidrgeno.
Catalasa: este enzima convierte el perxido de hidrgeno en agua.
Gen mutT: este gen codifica para un enzima que impide la
incorporacin de la 8-oxo-G al ADN. Este enzima hidroliza el
trifosfato de la 8-oxo-G a la forma monofosfato.
REPARACIN DIRECTA DE LAS LESIONES EN EL ADN
Fotorreactivacin: sistema de reparacin directa de los daos
producidos por la luz UV. La luz UV produce dmeros de pirimidinas,
fundamentalmente dmeros de Timinas. El enzima Fotoliasa
codificada por el gen phr reconoce en la oscuridad los dmeros de
Timina y se une a ellos, y cuando se expone a la luz (mediante un
fotn) deshace el dmero de Timinas.
Transferasa de grupos alquilo (metilo o etilo): elimina los gupos
alquilo producidos por el EMS o por NG. El enzima metiltransferasa
transfiere el grupo metilo de la O-6-metilguanina a una cistena (cys)
d
SISTEMAS DE REPARACIN POR ESCISIN

Reparacin de los daos de la luz UV (Endonucleasa uvrABC):
La Endonucleasa uvrABC es una escilnucleasa codificada por los
genes uvrA, uvrB y uvrC que corta el ADN. La Helicasa II de ADN
separa las dos hlices y retira 12 nucletidos. La ADN polimerasa I
rellena el hueco producido por la Helicasa II y la Ligasa sella los
extremos.
Reparacin AP: reparacin de las sedes apurnicas o
apirimidnicas. La llevan a cabo las Endonucleasas AP de la clase I
que cortan por el extremo 3' y las de la clase II que cortan por el
extremo 5'. Una exonucleasa elimina una pequea regin que
contiene entre dos y 4 nucletidos, la ADN polimerasa I rellena el
hueco y la Ligasa sella los extremos.
Reparacin mediante glucosidasas: estas enzimas detectan las
bases daadas y las retiran rompiendo el enlace N-glucosdico con
el azcar. Como consecuencia se origina una sede AP que se
repara de la forma indicada anteriormente (reparacin AP). La
Glucosidasa de Uracilo elimina el Uracilo (U) del ADN. La
Glucoxidasa de Hipoxantina, elimina la Hipoxantina (H) del ADN.
Adems de estas dos glucosidasas existen otras diferentes.
Sistema GO: dos glucosidasas producto de los genes mutM y
mutY actan conjuntamente para eliminar las lesiones que produce
la 8-oxo-G (GO).
REPARACIN POSTERIOR A LA REPLICACIN

Reparacin de apareamientos incorrectos: la reparacin de
apareamientos incorrectos posterior a la replicacin requiere la
existencia de un sistema que sea capaz de realizar las siguientes
operaciones:
Reconocer las bases mal apareadas.
Determinar cual de las dos bases es la incorrecta.
Eliminar la base incorrecta y sintetizar.
Esta reparacin la realizan los productos de los genes mutH, mutL,
mutS y mutU. Adems, para distinguir la hlice de nueva sntesis de
la hlice molde y as saber eliminar la base incorrecta, el sistema
consiste utiliza el hecho de que la hlice de nueva sntesis tarda un
cierto tiempo en metilarse la Adenina (A) de la secuencia GATC,
mientras que la A de la secuencia GATC de la hlice molde ya est
metilada. El enzima que reconoce la secuencia GATC metilando la
A que contiene es la Metilasa de Adenina

Reparacin por recombinacin:

Cuando la ADN polimerasa III encuentra un dmero de Timina (T)
producido por luz UV no sabe que nucletido poner saltando la
regin y dejando un hueco. Como consecuencia esa regin queda
como ADN de hlice sencilla. Debido a que la luz UV produce
muchos dmeros de Timina, se produce un bloqueo en la replicacin
y para evitar que la clula muera y pueda replicarse se dispara el
sistema de emergencia SOS. La puesta en marcha del sistema
SOS comienza porque el ADN de hlice sencilla activa a la protena
RecA que a su vez interacciona con la protena LexA. La protena
LexA es un represor de los genes uvrA, uvrB, uvrD, sulA y sulB.
Todos estos genes tienen en el promotor una secuencia
denominada caja SOS. La protena LexA normalmente impide la
transcripcin o expresin de los genes citados anteriormente, pero
cuando interacciona con la protena RecA deja de impedir la
expresin de estos genes, pudindose sintetizar las protenas
correspondientes y reparar los daos producidos por la luz UV
REVERSIN

Restauracin total o parcial del fenotipo normal (apariencia externa,
actividad proteica) a partir de un individuo mutante.
Reversin genotpica: se produce por causas genticas.
Reversin fenotpica: se produce por causas no genticas
(ambientales).
1 mutacin 2 mutacin
Individuo Normal Mutante Revertiente
Fenotipo mutante Reversin Fenotipo normal

La reversin es una 2 mutacin que restaura total o parcialmente el
fenotipo normal a partir de un individuo mutante. Al individuo que
recupera el fenotipo normal por medio de esta 2 mutacin se le
denomina Revertiente.
REVERSIN GENOTPICA

La reversin genotpica se puede conseguir de dos maneras:
Retromutacin (en sentido estricto): consiste en recuperar la
secuencia exacta de nucletidos en el ADN.
Mutacin supresora: es una mutacin secundaria que restaura total o
parcialmente la funcin prdida.
RETROMUTACIN

Consiste en recuperar la secuencia exacta de nucletidos en el
ADN, un ejemplo de esta situacin sera: AAA
(lys)GAA(glu)AAA(lys).
A veces tambin se habla de retromutacin en sentido funcional,
de manera, que se recupera la actividad enzimtica normal pero no
se recupera la secuencia original de nucletidos en el ADN, por
ejemplo: UCC(ser)UGC(cys)AGA(ser). Sin embargo, el
concepto de retromutacin funcional no se diferencia del concepto
de mutacin supresora y puede inducir a error.
MUTACIN SUPRESORA

Es una mutacin secundaria que restaura total o parcialmente la
funcin prdida.