MEIOS DE CULTURA

Prof MSc: Priscila Martins

AULA 3
Como preparar
Meios comerciais devem ser hidratados

Primeiramente devem ser pesados

Transferir para um frasco

Hidratar em pequena quantidade e misturar

Depois deve-se acrescentar o restante da gua

Levar o meio para fundir aquecer


Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos no
precisam estar esterilizados previamente

Esterilizar em autoclave por 15 minutos e temperatura
de 121C

Distribuir o meio aps a autoclavagem - tubos, frascos,
placas, pipetas e vidrarias estreis

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-
abertas - tampas fechadas no permitem a entrada do
vapor

Classificao dos meios
Meios para transporte e conservao
Meios para cultivo e isolamento
Meios comerciais para provas de identificao

Transporte e conservao
Cary Blair
Salina Tamponada
Meio Stuart
Agar nutriente

Cary Blair
Microrganismos intestinais patognicos e outros
coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.

A carncia de uma fonte de nitrognio impede
consideravelmente a multiplicao dos microrganismos
e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.

Utilizado para transporte de material fecal e
consequente conservao dos microrganismos.
Salina Tamponada
Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel.

Usado como meio de transporte de amostras biolgicas.

Contm NaCl, fosfato dipotssico anidro, Glicerina
bidestilada e gua destilada.
Meio Stuart
A carncia de uma fonte de nitrognio impede
consideravelmente a multiplicao de microrganismos e
a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.

Usado para transporte de diversos materiais e
consequente conservao dos microrganismos.

Conservao de microorganismos patognicos como:
Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp.,
Shigella spp. entre outros.
Agar Nutriente
um meio relativamente simples, de fcil preparao e
barato, muito usado nos procedimentos do laboratrio
de Microbiologia.

Usos:
Anlise de gua, alimentos e leite
Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a
exames bacteriolgicos
Isolamento de organismos para culturas puras.
Observar esporulao de espcies de bacilos Gram
positivos.
O uso mais frequente - conservao de culturas em
temperatura ambiente, para os laboratrios que no
dispem de crioconservao (freezer - 70C).
Cultivo e Isolamento
gar TSA
gar Chocolate
gar MacConkey
gar Sangue
gar CLED
gar Salmonella-Shigella
gar Manitol (MSA)
gar EMB
gar Mycosel
gar Sabouraud
gar Verde Brilhante (BGA)
Caldo Tioglicolato com indicador
Caldo Tioglicolato sem indicador


Caldo BHI
Caldo Selenito
Caldo Tetrationato
Lwenstein Jensen
Meio bifsico: Lwenstein e
Middlebrook,
Tryptic Soy Agar (TSA)
Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar

Tambm chamado de CASO Agar (Casein-peptone
soymeal-peptone agar)

recomendado para o cultivo de bactrias no
fastidiosas uso geral.
Pseudomonas
aeruginosa
Staphylococcus
aureus
Escherichia coli
Caldo BHI
Brain Heart Infusion meio enriquecido
um meio derivado de nutrientes de crebro e corao,
peptona e dextrose.
Fornece fontes de nitrognio, carbono, enxofre e
vitaminas.
Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos,
meningococos, enterobactrias, no fermentadores,
leveduras e fungos.
Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste
de susceptibilidade aos antimicrobianos
Realizao de teste de coagulase em tubo
Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C
Teste de motilidade em lmina.
Agar Sangue
Meio enriquecido e diferencial
Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e
resfriada, adiciona-se sangue.
A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem a
formao de halos de hemlise ntidos.
Diferenciao de Streptococcus spp. e Staphylococcus
spp.

Meios de Cultura
Interpretao
Cor original do meio: vermelho.
Beta hemlise: presena de halo
transparente ao redor das colnias
semeadas (lise total dos eritrcitos).
Alfa hemlise: presena de halo
esverdeado ao redor das colnias
semeadas (lise parcial dos eritrcitos).
Gama hemlise (sem hemlise):
ausncia de halo ao redor das colnias
(eritrcitos permanecem ntegros).
PARCIAL
TOTAL
SEM
HEMLISE
Bacillus
cereus
-hemoltico
Estreptococcus
-hemoltico
Enterococcus
faecalis
No hemoltico ()
Agar Chocolate
Meio de cultura enriquecido

base do meio, adicionado sangue de cavalo,
carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com
que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina,
compostos fundamentais para o crescimento dos
microrganismos exigentes.

Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.:
Neisseria, Haemophilus)

Alguns organismos que no crescem em meios comuns
so capazes de crescer neste meio
Meios de Cultura
gar Chocolate (AC):
Interpretao
Cor original do meio: castanho escuro
(chocolate).
Colnias de tamanho pequeno a mdio,
com pigmento amarelo: sugestivo de
Neisseria spp, Branhamella catarrhalis
ou Moraxella spp.
Colnias pequenas e delicadas, com
pigmento creme claro: sugestivo de
Haemophilus spp.
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Meios de Cultura
Neisseria
gonorrhoeae
Staphylococcus
aureus
Escherichia coli
Agar Thayer-Martin
Thayer-Martin Chocolate um meio rico seletivo

superior a outros meios de cultivo destinados para o
isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis

Contm em sua frmula antibiticos que inibem o
crescimento de Neisserias saprfitas e outras bactrias,
evitando contaminaes.
Meios de Cultura
gar Thayer Martin (TM):

um meio rico e superior a outros
meios de cultivo destinados para o
isolamento de Neisseria gonorrhoeae e
Neisseria meningitidis , pois contm
em sua frmula antibiticos que inibem
o crescimento de Neisserias saprfitas
e outras bactrias, quando em
amostras colhidas de stios
contaminados.

Neisseria gonorrhoeae
Agar Salmonella-Shigella (SS)
Seletivo e diferencial
Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e
citrato de sdio) que inibem microrganismos Gram
positivos.
O meio possui lactose, que permite diferenciar bactrias
lactose positivas e negativas
Lactose positivas- produzem cido que na presena
do indicador vermelho - formao de colnias de cor
rosa
Lactose negativas- formam colnias transparentes.
Permite a deteco de H
2
S - formao de colnias de
cor negra no centro.
Meios de Cultura
gar Salmonella-Shiguella (SS):

Interpretao
Cor original do meio: vermelho alaranjado.
Colnias com centro negro (H

S) ou colnias
incolores: suspeita de Salmonella.
Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.
Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita de
Escherichia coli ou Klebsiella spp.
As bactrias no fermentadoras de lactose so
incolores.
As bactrias fermentadoras de lactose
aparecem na cor rosa.
Agar MacConkey
Seletivo e diferencial

O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos
Gram positivos.

A concentrao de sais de bile relativamente baixa,
por isso no to seletivo para Gram negativos como,
por exemplo, o gar SS.

Usado para isolar bacilos Gram negativos
(enterobactrias e no fermentadores) e verificar a
fermentao ou no da lactose.
Pseudomonas
aeruginosa
Escherichia
coli Salmonella sp.
CONTINUAO NA PRXIMA AULA...
Meio Hektoen
um meio seletivo e diferencial

Utilizado para detectar a fermentao de lactose e
produo de H2S

Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactrias
no-entricas

Fermentados de lactose - amarelo ou salmo
No fermentadores - sem cor
Produo de H2S - precipitado preto
Escherichia coli
Salmonella enteridis
Agar Sal Manitol
Meio seletivo e diferencial

Utilizado para selecionar Staphylococcus, que crescem
em altas concentraes de sal

Diferencia Staphylococcus aureus de outros
Staphylococcus

Aps o crescimento, Staphylococcus aureus amarelo
(fermenta o manitol), outros Staphylococcus so
brancos
Staphylococcus
epidermidis
Staphylococcus
aureus
Escherichia coli
Agar CLED
Cystine Lactose Eletrolyte Deficient Seletivo e
diferencial
A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de
Proteus.
Usado para isolamento e quantificao de
microrganismos presentes em amostras urina.
Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram
positivos, Gram negativos e leveduras.
Colnias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor
azul.
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Meios de Cultura
Meios de Cultura
Caractersticas de crescimento:
Escherichia coli: colnias opacas, amarelas com ligeira cor
amarelo escuro no centro, com cerca de 1,25 mm de dimetro,
as no fermentadoras de lactose colnias azuis
Espcies de Klebsiella: colnias muito mucosas, cor varivel
de amarelo a branco azulado
Espcies de Proteus: colnias azul translcidas, geralmente
menor que E.coli
Espcies de Salmonella: colnias planas, cor azul
Enterococcus faecalis: colnias amarelas, com cerca de 0,5
mm de dimetro
Staphylococcus aureus: colnias amarelas, com cerca de 0,75
mm de dimetro
Staphylococcus coagulase negativa: colnias amarelo palha
e brancas
Corynebacterium: colnias pequenas e cinza
Lactobacilos: colnias pequenas e com superfcie rugosa
Pseudomonas aeruginosa: colnias verdes, com superfcie
prateada e periferia rugosa
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Meios de Cultura
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Meios de Cultura
Staphylococcus
aureus
Proteus
mirabilis
Escherichia coli
Agar verde brilhante (BGA)
um meio altamente seletivo, usado para o
isolamento de outras salmonelas que no a S. Typhi,
existentes nas fezes e em outros materiais.
A presena de extrato de levedura e duas peptonas
fornecem os nutrientes
A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de
fenol, fornecem um sistema de diferenciao de
fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
Salmonelas no produzem cido a partir destes
acares.
O verde brilhante o agente seletivo que inibe a flora
de acompanhamento.
Escherichia
coli
Salmonella
sp.
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar EMB um meio para diferenciao ligeiramente
seletivo
Utilizado para o isolamento e diferenciao de bacilos
entricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros
bastonetes gram-negativos).
Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactrias
gram-positivas num determinado grau - diferenciar os
fermentadores
Coliformes produzem colnias pretas-azuladas
Salmonella e Shigella so incolores ou tm uma cor mbar
transparente, no fermentam lactose
Escherichia coli podero apresentar um reflexo verde
metalizado caracterstico, devido rpida fermentao da
lactose
Escherichia
coli
Klebsiella
pneumoniae
Salmonella
enteridis
Meio Lwenstein Jensen
A base do meio constituda por ovos integrais, o que
permite amplo crescimento das micobactrias
O crescimento satisfatrio para o teste de niacina (que
positivo para Mycobacterium tuberculosis)
Utilizado para isolamento primrio das micobactrias
Crescimento bom a excelente (colnias amarelas) -
Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
Incubao por 60 dias
Mycobacterium
tuberculosis
Agar Mycosel
A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve
para selecionar dermatfitos.
O cloranfenicol inibe o crescimento de bactrias e
alguns fungos filamentosos.
Usado para isolamento de fungos patognicos,
principalmente dermatfitos, a partir de material de
investigao contaminado.
Crescimento bom a excelente: Trichophyton
verrucosum, Candida albicans
Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida
tropicalis, Penicillium spp.
Candida albicans
Agar Sabouraud
Meio com nutrientes que favorece o crescimento
de diversos fungos leveduriformes e
filamentosos.

Cultivo e crescimento de espcies de Candidas
e fungos filamentosos, particularmente
associados a infeces superficiais.

Caracterizao macroscpica do fungo
filamentoso (colnia gigante).
Candida albicans
Sporothrix
schenckii
Microsporum
canis
Meios para identificao
gar TSI
CaldoTSB
Meio SIM
gar Citrato Simmons
gar Fenilalanina
gar base uria
Caldo Triptona
Caldo Nitrato
Caldo Malonato
gar Blis-Esculina
gar Sangue
Caldo base de Moeller

gar Dnase
gar Esculina
CTA Cystine Tryticase Agar
Meio base para oxidao e
fermentao - OF
Base de nitrognio para
leveduras