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Ingeniera Gentica

Concepto: Tcnica del ADN recombinante o Manipulaciones genticas.


Es la tcnica con que se forman artificialmente combinaciones nuevas de material
hereditario (ADN, ARN).

Reigar et al: la define como las manipulaciones genticas (que desvan el ciclo
sexual), por medio de las cuales se crea un individuo con combinaciones de
propiedades hereditarias.

Enfoque celular: corresponde al cultivo de tejido o cultivos in vitro (Procesos biolgicos
realizados fuera del organismo vivo).

Enfoque molecular: comprende la manipulacin del ADN, donde genes especficos
pueden insertarse y luego expresarse.

Cultivos de tejido: consiste en cultivar en medios nutritivos adecuados y en forma
asptica tejidos o partes de rganos de plantas

Objetivos:
Permite realizar estudios bsicos de fisiologa, gentica, bioqumica.
Permite incrementar la variabilidad gentica.
Se puede obtener plantas libras de patgenos.
Propagar plantas.
Conservar e intercambiar germoplasma.
Micropropagacin: Es la multiplicacin masiva in vitro.

Etapas de la micropropagacin

Establecimiento del cultivo asptico:
a) Seleccin del explante. (seccin de tejido u rgano de una
planta).
b) Desinfeccin (con hipoclorito de Na, Ca, etanol, solucin de
Cl).
Crecimiento del inculo. El explante se multiplica formando
callo o no.
Enrraizamiento de brotes y transplante.
a) Se trasladan a medios con menor concentracin de sales y
menor balance hormonal)
b) Se transplantan a recipientes con suelo estril y cubiertos
con fundas perforadas.

Ventajas de la micropropagacin:
Incremento ascelerado del nmero de plantas derivadas por
genotipo.
Reduccin del tiempo de manipulacin.
Multiplicacin de grandes cantidades de plantas en reas reducidas
(a bajo costo).
Mayor control de la sanidad del material que se propague.
Facilidad de transportar el material in vitro de un lugar a otro.
Posibilidad de multiplicar variedades o especies que se encuentren en
vas de extinsin.

Factores que influyen en la micropropagacin:
Edad fisiolgica de la planta que dona el explante.
El explante utilizado.
Plantas de reproduccin sexual (partes embrionales o de plntulas).
Plantas de reproduccin asexual (brotes jvenes, pices
meristemticos).
Factores fsicos: Luz (intensidad, fotoperiodo, calidad), Temperatura
(entre 24 a 28 oC).
Medio de cultivo: composicin qumica y forma fsica.
Medio de cultivo: Es un medio de composicin qumica definida.
Componentes
Sales inorgnicas
Compuestos
Sacarosa
Carbohidratos Fructosa
Almidn

Auxinas AIA, AIB
Sustancias hormonales Citocininas: zecetina
Giberelinas: cido giberelico
Vitaminas (tiamina, estimula el proceso de crecimiento
especfico)
Aminocidos y aminas.
Complejos naturales: pulpa de pltano, endospermo de coco,
estracto de malta, de levadura, emulsin de pescado, jugo de
naranja, de tomate.
Materiales inertes o de soporte: (agar, silicagel).

Preparacin del medio de cultivo

Preparacin de la solucin madre.
Ajuste del pH.
Disolucin del agar y distribucin del medio
Esterilizacin del medio de cultivo.
Almacenamiento del, medio de cultivo



Calidad fsica del medio de cultivo

Medio gelificante
Medio lquido estacionario
Medio lquido agitado
Cultivo de raz:

Se usa en fisiologa vegetal, conocimientos del metabolismo de
los hidratos de carbono, funciones de los minerales, vitaminas,
hormonas, as como diferenciacin y desarrollo de races.

Investigaciones realizadas:

Induccin de ndulos por Rhizobium: para entender el
proceso de simbiosis entre las bacterias nitrificantes con las
plantas superiores (leguminosas).

Cultivo de fitonemtodos parsitos: con el fin de demostrar
que Pratylenchus minyus era un patgeno primario y que causa
lesiones en las races en ausencia de otros microorganismos.

Cultivos de antera y polen:

Se utilizan para producir plantas haploides, para desarrollar lneas
homocigticas para la produccin de hbridos en especies
incompatibles entre s.

Factores determinantes de esta tcnica:

Etapa de desarrollo de las anteras al momento del cultivo
Condiciones fisiolgicas de las plantas
Medio de cultivo
Cultivo de callos:

Callo es un tejido obtenido por medio de aislamiento de rganos
o tejidos diferenciados, posteriormente son llevados a una
diferenciacin celular, estas clulas presentan proliferaciones
continuas, aceleradas y de apariencia desorganizada que da
origen a una masa amorfa de tejido.

Se usa con fines de estudios de fisiologa vegetal (organognesis
y embriognesis), en estudios de gentica (estructuras celulares)
y propagacin.

La caracterstica importante de los callos es la totipotencialidad
capacidad de sus clulas de desarrollar brotes, races,
embriones, etc. Pudiendo llegar a formar plantas completas.
Etapas del cultivo de callo:

Induccin: Las clulas del inculo comienzan su crecimiento
tanto en nmero como en tamao.

Proliferacin celular: El tejido calloso aumenta su masa celular
al mximo.

Induccin de diferenciacin: A partir de la masa celular del callo
se obtienen meristemas apicales, radiculares, embriones.

Envejecimiento: prdida de la capacidad de crecimiento
acelerado.
Aislamiento y fusin de protoplastos: Se usan para el
estudio bsico de la embriologa, se usan como explantes tejidos
de hojas.

Cultivos de clulas en suspensin: Se obtienen transfiriendo
fragmentos de tejidos de callos a medios lquidos en agitacin.
Se usan para estudios de embriognesis, crecimiento y
diferenciacin, organognesis, ciclo celular, gentica, bioqumica,
metabolismo, etc.

Cultivos de meristemos: Se utilizan meristemos apicales.
Sirven para propagacin de plantas y para recuperar plantas
libres de patgenos.

Cultivos de hojas: se utilizan primordios foliares. Sirven para
propagacin masiva.
Adaptacin de plantas obtenidas in vitro a condiciones
naturales:

Fase de aclimatacin

Fase de invernadero

Fase de campo
Insertacin de genes: Es una transformacin de las molculas
de ADN dentro de la clula vegetal, sin mediacin de
microorganismos.

Transferencia directa de genes: Empleando tcnicas de
microinyeccin o biolstica (bombardeo con partculas de oro,
con ayuda de un acelerador de partculas).

Transferencia indirecta: Mediante el uso de bacterias (vector).
Este mecanismo utiliza las propiedades biolgicas de la bacteria
Agrobacterium tumefaciens para introducir el ADN forneo.

Modificacin de plantas transfiriendo indirectamente ADN
extrao:

Plantas de tabaco resistentes a insectos:
Insertando a las plantas subfragmentos de genes de la bacteria
Bacillus thuringiensis que codifican para la deltatoxina

Este nuevo gene fue transmitido como un carcter dominante en
la generacin siguiente.

Plantas resistentes a herbicidas:
Insertando a plantas el gene del hongo Streptomyces
hygroscopicus, que codifica para la enzima fosfinotricina acetil
transferasa.