Introduccin a la Histologa

Tcnicas histolgicas Bsicas

Dr. Gustavo Tango Flores
Anatoma microscpica de clulas,
tejidos, rganos y sistemas
HISTOLOGIA HUMANA
Es la ciencia que estudia los tejidos del cuerpo Humano

1771-1802. Bichat (anatomista y fisilogo francs) .
Estudio las contexturas de las diversas capas del cuerpo
humano
Introduce el concepto de tejido
(del francs tiss)

Es la rama de la anatoma

HISTOS: Tejido
LOGOS: estudio o conocimiento




1665, Hooke descubre que el tejido vegetal
est compuesto por pequeas cmaras, a las
que denomina clulas
(lat. cella, pequea habitacin o cmara)

1839, Schwann enuncia la teora celular

1855,Virchow. Teoria Omnis cellula e cellula
(toda clula se origina de otra clula)




1666 Marcello Malpighi.
Fundador de la Histologa
Descubre varias estructuras Histolgicas
(Corpsculos de Malpighi, renal)
ACTUALMENTE
En su aspecto mas amplio, la palabra
Histologa se emplea como sinnimo de
Anatoma Microscpica, ya que incluye
la estructura microscpica de las :
Clulas
Tejidos
rganos
Sistemas
Objetivo del curso de Histologa
Comprender la micro anatoma de las
clulas , los tejidos y los rganos y a
correlacionar la estructura con la
funcin
Los contenidos se formularan en trminos de
microscopia ptica MO

La interpretacin mas detallada se fundamenta en la
microscopia electrnica ME

MET microscopio electrnico de
transmisin

MEB microscopio electrnico de barrido

Procedimientos avanzados
Histoqumica y citoqumica
Inmunocitoqumica
Autoradiografa

Mtodos de preparacin
del Tejido
Para la observacin directa
de clulas VIVAS
Las clulas libres son incoloras
Extendido de clulas sanguneas
Cultivo de tejidos
1.- Tincin Vital: inyectar colorantes inocuos
Tinta china
azul de trpano
2.- Supravital:Colorante a clulas extirpadas
Verde de Janus(mitocondrias)
Azul de metileno(celulas nerviosas)




Con clulas Muertas
(fijadas o conservadas).
a) Fijacin:conserva la estructura. Formalina y fijador de
Bouin
b) Obtencin: autopsias, cirugas
c) Deshidratacin:eliminar el agua. Alcohol
d) Aclaracin: disolver las grasas. Xileno
e) Inclusin : parafina 57C
f) Corte:5 a 10 um. Micrtomos
g) Tincin: Hematoxilina y Eosina
h) Montaje: Blsamo de Canad
COMO CARGAMOS LA MUESTRA?
Procesador automtico de tejidos
Inclusin

Espcimen listo para
ser seccionado
CORTE

Tincin
TINCION H&E O UNIVERSAL
Hematoxilina
Azul

Elementos cidos.

ncleo, nucleolos,
cromatina, ribosomas
.
Eosina
Rojo

Elementos bsicos.

Citoplasma,
Sustancia
intercelular,
fibras colgenas




METODOS AVANZADOS
HISTOQUIMICA

Mtodo de tincin de tejidos
(procedimientos qumicos) que
proporciona informacin sobre la
presencia y localizacin de
macromolculas intracelulares
Y extracelulares
TINCION H&E O UNIVERSAL
Hematoxilina
Azul

Elementos cidos.

ncleo, nucleolos,
cromatina, ribosomas
.
Eosina
Rojo

Elementos bsicos.

Citoplasma,
Sustancia
intercelular,
fibras colgenas
Tincin de Tejido Conectivo
Fibras
colgenas
Fibras
elsticas
Fibras
reticulares
Tincin para carbohidratos
PAS
Acido Perydico de Schif
Mtodo de
Feulgen
Papanicolau
Lpidos


Colorantes y reacciones histolgicas comunes
Reactivo Resultado
Hematoxilina Azul: ncleo regiones
acidas del citoplasma
Eosina Rosa: regiones bsicas
del citoplasma, fibras
colgenas
Tricmico de Masson Azul oscuro: ncleo
Colorante de Orcena
para fibras elasticas
Pardo fibras elsticas
Weigert para fibras
elasticas
Azul: fibras elsticas


Reactivo Resultado
Tinciones argnticas Negro: Fibras
reticulares
Hematoxilina frrica Negro: estriaciones de
msculo
Acido Perydico de
Schiff (PAS)
Magenta: molculas
ricas en glucgeno y
carbohidratos
Colorantes de Wright
Y Giemsa
Rosa: eritrocitos
Azul: citoplasma de
monocitos y linfocitos
INMUNOCITOQUIMICA

Es la tcnica del
Anticuerpo fluorescente
Mtodo sensible para la
localizacin mas precisa
de Protenas especficas
Y otras macromolculas












AUTORADIOGRAFIA


til para localizar e investigar una
Secuencia temporal especfica
de Fenmenos
Incorporan istopos radioactivos
AUTORADIOGRAFIA


istopos radioactivos
Tritio (3H)








Tcnica de fractura de congelacin (criofractura)
Se utiliza para observar la estructura macromolecular de
las superficies internas de la membrana.
Hojas interna y externas




MICROSCOPIA


Contenidos
Microscopio ptico
Nociones de ptica
Otros tipos de
microscopios
Componentes
propiedades y manejo
Microscopio
electrnico
1590. Hans y Zacharia Jenssen. Construyen el
primer microscopio ptico

1625.Giovani Father, introdujo la palabra
Microscopio
(Holanda)
1632 Antonio Van Leeuwenhoek
Padre de la Microscopia
ptico aficionado y vendedor de telas,
construye varios microscopios
MICROSCOPIA OPTICA MO
Instrumento ptico de precisin que
aumenta el tamao de una imagen y
permite ver mayores detalles de lo que
sera posible a simple vista

RESOLUCION:
Capacidad de un lente
de producir imgenes separadas
de objetos que estn muy
cerca uno de otro
AUMENTO:
Se expresa en dimetros x
Es la proporcin del tamao
de la imagen vista, en relacin
Del objeto examinado

Nociones de ptica
Resolucin del ojo humano en comparacin con la de los
microscopios
Distancia entre los
Puntos que se resuelven
Ojo humano 0,2 mm
Microscopio ptico claro 0,2 um

En teora los microscopios electrnicos
0,005 nm
Microscopio electrnico
de transmisin MT 0,2 nm
Microscopio de barrido MEB 10 nm
Microscopio de campo claro


Ocular Objetivo
Examen e interpretacin de Cortes
La HISTOLOGIA exige:
La reconstruccin mental de imgenes
bidimensionales
En una slida tridimensional a partir de la cual
se cortaron




En este diagrama se seccion
un tubo curvo en varios planos
Microscopia electrnica
Proporcionan datos morfolgicos
y analticos de la clula



Aumenta la resolucin por un factor
de 103.

Sus electromagnetos enfocan un
haz de electrones

Pueden amplificar un objeto
150.000 veces
Resolucin del ojo humano en comparacin con la de los
microscopios
Distancia entre los
Puntos que se resuelven
Ojo humano 0,2 mm
Microscopio ptico claro 0,2 um

En teora los microscopios electrnicos
0,005 nm
Microscopio electrnico
de transmisin MT 0,2 nm
Microscopio de barrido MEB 10 nm
MICROSCOPIA

Microscopia electrnica


ME. Transmisin ME. Barrido
Tcnica para M.E.
Fijacin: glutaraldhido
Tincin: tetraxido de
osmio
Inclusin: resina de epoxi
Corte: ultramicrotomo
Resolucin: 0.2 nm
1000 veces mayor al
Microscopio compuesto

La Imagen puede imprimirse en
una microfotografa en blanco y negro


Resolucin: 10 nm
Amplifican: 150000 veces
Un objeto

La imagen se captura en un monitor
Imagen tridimensional

Transmisin
Barrido
MICROSCOPIA

Equivalencias en las medidas de Longitud

1 Angstrom (A) = 0,1 Nanmetro (nm)
10 Angstroms = 1,0 nanmetro
1.000 nanmetros = 1,0 micrmetro (um)
1.000 micrometros = 1,0 milmetro (mm)
Gracias !