VIRUS

Los virus no son clulas. Sin embargo, tienen genes y

evolucionan por seleccin natural.
Existen opiniones dispares sobre si los virus son una forma de
vida o estructuras orgnicas que interactan con los seres vivos.
En la comunidad cientfica hubo por aos el consenso de no
considerar al virus como estructura biolgica viva.
Por ello algunos autores se refieren a ellos como organismos
al lmite de la vida.
Por una parte se asemejan a los organismos que tienen genes y
evolucionan por seleccin natural, y se reproducen creando
mltiples copias de s mismos para autoensamblarse.
Pero carecen de estructura celular, la cual es considerada la
unidad bsica de la vida. Adems, los virus no tienen un
metabolismo propio, y necesitan una clula hospedadora para
crear nuevos productos.
Los virus, no se pueden reproducir en el exterior de una clula
husped (aunque bacterias como Rickettsia y Chlamydia, son
considerados organismos vivos a pesar de tener la misma
limitacin), un caso similar sucede al observar la etapa de
endospora en algunas bacterias, cuya base en la endospora a
pesar de presentar estructuras normales de una clula (como ADN
y ribosomas), igualmente tienen un "metabolismo inactivo" en
esta etapa de su ciclo de vida; y a pesar de ello, aun es
considerado un ser vivo.
CLASIFICACIN DE LOS VIRUS
La clasificacin de los virus se basa en el mtodo de
David Baltimore estrategia de replicacin del AN.
1. Tipo de cido nucleico, estrategia de replicacin, doble
o simple cadena.
2. Tamao, simetra, morfologa, # capsmeros, presencia
o ausencia de membranas.
3. Susceptibilidad al ter y a otros agentes fsicos y qumicos.
4. Presencia de enzimas virales
5. Propiedades inmunolgicas.
6. Vas de transmisin natural.
7. Hospedero, tejidos, tropismo celular.
8. Patologa
9. Sintomatologa
CLASIFICACIN DE LOS VIRUS
Tres grupos en funcin de la clula que infecten (husped
genrico)
Bacterifagos
Virus vegetales
Virus animales
Rango de husped: un virus podr afectar a determinadas
especies dentro de cada grupo.
TAMAO DE LOS VIRUS
Vara desde los 20 nm (Parvovirus y Picornavirus) hasta los 300 nm
(Poxvirus; tamao semejante a Chlamydias).
De 100 a 1.000 veces ms pequeos que las clulas que infectan.
Slo se visualizan al microscopio electrnico por lo que para
identificarlas se suelen usar reacciones de infectividad biolgica o
serolgica o incluso anlisis especficos de enzimas.
ESTRUCTURA VIRICA
1. cido Nucleico
2. Cpside
3. Envuelta
4. Otros componentes
cido nucleico desnudo es susceptible a ser degradado por
nucleasas en la naturaleza, por lo que estn rodeados de una
envoltura proteica, CAPSIDE.
Cpside esta compuesto de subunidades proteicas llamadas
CAPSOMEROS.
Cpside junto con cido nucleico se conoce como
NUCLEOCAPSIDE.
ESTRUCTURA VIRICA
El virus fuera de
una celula se llama
virion
a.- Acido Nucleico
ADN o ARN.
Mono o bicaternario
Representa del 1 al 50% del virin.

b.- Cpside.

Constituye la mayor parte del virus.
Las protenas que la forman contienen los
determinantes antignicos.
Estas protenas son responsables de la adherencia a
la clula husped en los virus desnudos y protegen
al cido nucleico.
ESTRUCTURA VIRICA
Envuelta
Bicapa lipdica y proteica, semejante a las
membranas celulares, con funciones protectoras y
de adherencia.
Hay dos tipos de protenas
1.Glicoproteicas.
2.Matriz proteica.

c.- Envoltura viral
Muchos virus, adems de cpside, presentan una envoltura de
caractersticas similares a una membrana plasmtica.
La envoltura es un resto de membrana de la clula infectada.
Compuesta de glicoproteinas y proteinas de la matriz.
Glicoprotenas.
Expuestas a la superficie externa aunque algunas penetran para
unirse a la cpside o a la matriz proteica.
Protenas de la matriz.
Responsables de la unin de la envuelta con la nucleocpside.

La envoltura puede dar al virus ventajas, como la proteccin contra
ciertas enzimas.
La mayora de los virus con envoltura dependen de esta para su
infectividad.
Ejemplo: virus de la gripe.
VIRUS SIN (A) Y CON ENVOLTURA(B)
1-cpside
2-cido nucleico
3-capsmero
4-nucleocpside
5-virin
6-envoltura
7-espculas

Otros componentes
Protenas internas, generalmente bsicas, unidas a
los cidos nucleicos y que probablemente ayuden al
plegamiento de los mismos.
Enzimas; retrotranscriptasas y otras
MORFOLOGA VIRAL
Segn las caractersticas de la cpside los virus pueden tener las
siguientes formas:
Cpside con simetra icosadrica. (Picornavirus, Adenovirus, Papovavirus).
Cpside cilndrica y helicoidal. (Virus del mosaico del tabaco)
Sin forma definida. Envuelta lipoproteica no rgida (nucleocpside
icosadrica o helicoidal)- Herpes y Orthomyxovirus.
Complejos
Los virus son cristalizables, como demostr W. Stanley en 1935.
Esto por que las partculas vricas tienen formas geomtricas
precisas e idnticas entre s.


Icosaedricos: Picornavirus
Picornaviridae es una familia de virus infectivos para animales.
Contienen un genoma ARN monocatenario positivo y por lo tanto se
incluyen en el Grupo IV de la Clasificacin de Baltimore.
El genoma ARN es inusual porque tiene una protena en el terminal 5'
que se utiliza como iniciador de la transcripcin por la ARN
polimerasa.
El nombre se deriva de "pico", que significa pequeo, con lo que
"picornavirus" significa literalmente "virus RNA pequeos".
Presentan una cpside carente de envoltura y estructuralmente
definida por una simetra icosadrica, de un tamao de 22 a 30 nm.
Las enfermedades que causa son variadas, como el resfriado comn,
poliomielitis e infecciones crnicas en el ganado. Dos categoras
principales son los Enterovirus y Rhinovirus.
Icosaedricos: Virus del papiloma humano
Los virus del papiloma humano, llamados tambin papilomavirus, son
un grupo de ms de 150 virus relacionados.
Ms de 40 de esos virus pueden propagarse por contacto sexual.
Ms de la mitad de la gente activa sexualmente se infecta por un tipo
de VPH o por varios tipos en algn momento de su vida.
Los VPH transmitidos sexualmente entran en dos categoras:
Los VPH de bajo riesgo, los cuales no causan cncer pero pueden causar
verrugas en la piel.
Los VPH oncognicos o de alto riesgo, los cuales pueden causar cncer. Se han
identificado al menos una docena de tipos de VPH de alto riesgo.

18
b.- Viriones helicoidales
Al M.E. ofrecen imgenes cilndricas
Los capsmeros se disponen helicoidalmente
formando una estructura tubular en cuyo
interior se localiza el cido nucleico
El VMT (virus del mosaico del tabaco), es un
ejemplo. Su material gentico es ARN
unicatenario.
Virus de la rabia.
19
Virus del mosaico del tabaco
Observacin al
microscopio electrnico
(ME)


capsmeros
ARN
20
c.- Complejos. Bacterifagos
Los virus tienen una cpside que no es ni puramente helicoidal, ni
puramente icosadrica, y que puede poseer estructuras adicionales
como colas proteicas o una pared exterior compleja.
Parasitan bacterias. Algunos bacterifagos (como el Fago T4) tienen
una estructura compleja que consiste en un cuerpo icosadrico
unido a una cola helicoidal (esta cola acta como una jeringa
molecular, atacando e inyectando el genoma del virus a la clula
husped), que puede tener una base hexagonal con fibras caudales
proteicas que sobresalgan
Con cabeza icosadrica. En su interior se aloja el ADN o ARN.
Una cola une la cabeza con el sistema de anclaje. Es un eje tubular
de estructura helicoidal.
En la base una placa basal con espinas y fibras de naturaleza
proteca.
d.- Viriones con envoltura
Envoltura membranosa,
proteica (virus de la
hepatitis) o de
composicin lipdica y
polisacardica (virus de la
gripe).
Si la envoltura deriva de la
membrana de la clula que
parasitan, puede llevar en
el proceso de exocitosis,
molculas propias de la
membrana y/o protenas
especficas del virus (el
virus VIH del SIDA),
poxvirus.

Los poxvirus
Son virus grandes y complejos con una morfologa inusual.
El genoma vrico est asociado con protenas dentro de una estructura
discal central conocida como nucleoide. El nucleoide est rodeado por una
membrana y dos cuerpos laterales de funcin desconocida.
El virus tiene una envoltura exterior con una espesa capa de protena en la
superficie.
El nombre de la familia proviene de un grupo inicial de enfermedades
asociados a la piel denominados pox en otros idiomas.
El ms notable de ellos es la viruela.
CICLO DE MULTIPLICACION VIRAL
1. Adsorcin de los virus a las m. plasmticas.
2. Penetracin
3. Decapsidacin
4. Transcripcin
5. Traduccin
6. Replicacin.
7. Ensamblaje
8. Liberacin
1. Adsorcin
Es la unin entre la cpside viral de protenas y los receptores
especficos en la superficie celular del husped.
La unin virus-clula es bastante especfica y determina la gama
de huspedes de un virus.
Ejplo: el VIH presenta la protena de gp120 que puede
interactuar slo con los receptores CD4 de los linfocitos T
humanos
2. Penetracin
La forma en la que el virus entra en la clula husped vara
dependiendo de la especie.
1. La endocitosis (viropexia) es comn en los virus con o sin envoltura;
en este caso, la partcula del virus es rodeada por la membrana
plasmtica de la clula, se forma una invaginacin y luego la vescula se
introduce en el citoplasma.
2. Para virus con envoltura se produce la fusin de la membrana
plasmtica con la envoltura del virus.
3. La penetracin directa se observa slo en los virus sin envoltura.
4. Algunos virus sin envoltura y bacterifagos son capaces de inyectar
directamente el genoma en la clula.
3. Desnudamiento o decapsidacion
Proceso por el cual el cido nucleico del virus es liberado dentro
de la clula.
Puede ocurrir simultneamente o poco despus de la
penetracin.
En este ltimo caso, la cpside vrica es degradada por las
enzimas del husped (o algunas veces por las enzimas que trae
consigo el virus).
4.-Transcripcion y Multiplicacion
La multiplicacin consta de la replicacin, transcripcin y
traduccin del mensaje para producir protenas vricas.
Los ribosomas y la mayor parte de las enzimas que utilizan en
estos procesos son los de la clula infectada.
En virus con ADN monocatenario, previamente a la replicacin se
sintetiza la cadena de ADN complementario para dar doble hlice.
Los virus con ARN replican el material gentico sin necesidad de
pasar por ADN, actuando la cadena de ARN como molde para la
sntesis de su complementaria.
En retrovirus: Su ARN sintetiza un ADN bicatenario, que ser el
que posteriormente realice la sntesis de nuevos RNA vrico.
Ensamblaje. Se forma la cpside viral y se asocia con el genoma
viral.
Tras la reunin de partculas del virus, a menudo se realiza una
modificacin post-translacional de las protenas virales. En VIH.
5.Liberacin
Los virus salen de la clula husped por lisis o por gemacin.
A. Los virus sin envoltura se acumulan por algn tiempo en la
clula hasta que sta se rompe (lisis).
B.-Los virus con envoltura (por ejemplo, el VIH) suelen ser
liberados por gemacin, proceso durante el cual el virus
adquiere su envoltura de fosfolpidos
30
En virus con envoltura
31
Observa: comienza la infeccin ME X50.000
Viriones a punto de ser liberados
Liberacin y restos de la lisis celular
MULTIPLICACIN DE LOS BACTEIRFAGOS

Ciclo de reproduccin de un bacterifago T4, estas etapas son
comunes a otros virus bacterianos y eucariticos
1. Adsorcin
El virus se fija o se adhiere a componentes de la superficie celular que actan
como receptores especficos.

2. Inyeccin del material gentico viral
Despus de la adsorcin, se produce un cambio conformacional en las protenas
de la placa basal, algunas de las cuales tienen actividad enzimtica y producen un
poro en la membrana citoplasmtica de la clula. La vaina del fago se contrae y el
material gentico viral ingresa en la clula, mientras que el cpsido queda en el
exterior
3. Replicacin del material gentico viral
El material gentico viral ingresa en una clula y contiene bases
modificadas que evitan la degradacin por nucleasas bacterianas. Esta
modificacin consiste en la glicosilacin y/o metilacin de algunas
determinadas bases.
Para lograr una efectiva replicacin del genoma viral se deben sintetizar
algunas protenas tempranas que reparan el poro de la membrana
citoplasmtica por donde ingres el genoma viral, degradan el ADN
bacteriano lo que proporciona una fuente de precursores de los genomas
virales, evita la sntesis de ARN y protenas bacterianas.
4. Sntesis y ensamble de envolturas proteicas
las protenas de la envoltura (cpsido, vaina, fibras, etc.) son protenas
tardas que se sintetizan despus de iniciada la replicacin del material
gentico.
ETAPAS EN LA
REPLICACIN DE
UN
BACTERIFAGO
CICLO LITICO Y LISOGENICO
Segn la duracin de la fase de eclipse, se suelen distinguir
dos modalidades de ciclo infeccioso de un virus:
Ciclo ordinario (Ltico): el cido nucleico vrico procede
inmediatamente a la transcripcin de su mensaje gentico en
los ARN necesarios para su multiplicacin, y prosigue
rpidamente el ciclo vital. Es el ms extendido en la
naturaleza.
Ciclo lisognico de letargo:
Este ciclo tambin presenta las mismas etapas que el ciclo ltico,
donde adems el ADN del virus se suma al ADN celular de modo
que cada vez que la clula se duplica tambin lo hace el ADN
viral, pero sin manifestarse. Ejplo. VIH.
CICLOS LISOGNICO Y LTICO
CICLO DEL VIRUS HIV

EFECTOS EN LA CLULA HUSPED
La mayora de infecciones vricas acaban provocando la muerte de la
clula husped, por lisis celular, alteracin de la membrana celular y la
apoptosis.
La muerte celular puede ser por paro de sus actividades normales debido
a la supresin por protenas especficas del virus.
Algunos virus no causan cambios aparentes en la clula infectada. Las
clulas en que los virus es latente e inactivo presentan pocos signos de
infeccin y a menudo funcionan normalmente. Esto causa infecciones
persistentes y el virus a menudo permanece durmiente durante muchos
meses o aos. Este suele ser el caso del herpes simple.
Algunos virus, como el virus de Epstein-Barr, a menudo hacen proliferar
las clulas sin causar malignidad, pero otros, como los papilomavirus, son
una causa demostrada de cncer. Transformacin de clulas con cambios
en el metabolismo y prdida de inhibicin por contacto, clulas animales
promueve neoplasmas o tumores.

Respuesta inmune del husped
La primera lnea de defensa contra los virus es el sistema inmunitario.
Cuando el sistema inmunitario de una celula encuentra un virus,
produce anticuerpos especficos que se unen al virus y lo hacen no
infeccioso, lo que se denomina inmunidad humoral. Dos tipos de
anticuerpos son importantes. El primero se denomina IgM y es
altamente eficaz para neutralizar los virus, pero slo es producido por
las clulas del sistema inmune durante unas pocas semanas. El
segundo, denominado IgG, se produce indefinidamente.
Una segunda lnea de defensa de los vertebrados frente a los virus se
denomina inmunidad celular y consiste en las clulas inmunitarias
conocidas como linfocitos T. Las clulas del organismo constantemente
muestran cortos fragmentos de sus protenas en la superficie celular. Si
un linfocito T reconoce en una clula un fragmento sospechoso de ser
viral, destruye dicha clula y a continuacin se produce una
proliferacin de los linfocitos T especficos para ese virus.
TRATAMIENTO ANTIVIRAL
Muchas veces, el virus es eliminado por el sistema inmunolgico.
Los antibiticos no tienen ningn efecto, pero se han desarrollado
medicamentos antivirales.
Las vacunas pueden prevenir las infecciones virales produciendo
inmunidad durante tiempo prolongado. (preparado de antgenos
que una vez dentro del organismo provoca respuesta. Anticuerpo)
Esta respuesta genera memoria inmunolgica, inmunidad
permanente frente a la enfermedad.
Se clasifican en dos grandes grupos: Vacunas vivas o atenuadas ;
Vacunas muertas o inactivadas
2.Antivirales
La obtencin de frmacos antivirales es ms difcil que la de
antibiticos, ya que los virus dependen para vivir y multiplicarse
del metabolismo de la clula que infectan.
Los frmacos que bloquean la replicacin vrica alteran tambin
el funcionamiento de las clulas normales.
Generalmente, los antivirales inhiben de alguna forma la
sntesis de los cidos nucleicos (DNA RNA) y/o de las
protenas del virus.
Amantadina y rimantadina se ha empleado en la profilaxis y el
tratamiento de la gripe en pacientes de riesgo.
Tromantadina se emplea tpicamente para viriasis de la piel
(herpes)
Un enfoque es interferir con la habilidad del virus para ingresar
a la clula.
Esta etapa puede inhibirse de dos maneras:
1. Usando agentes similares a las protenas asociadas a virus
(VAP), que compiten con ellas por los receptores en las
membranas celulares. Pueden ser anticuerpos antiidiotipo,
anticuerpos antirreceptor.
2. Usando agentes similares al receptor, que se unen a las
protenas virales. Pueden ser anticuerpos antiprotenas virales,
anticuerpos de receptor antiidiotpicos, y receptores sintticos.

Antiretrovirales
Los frmacos antirretrovirales (TAR) son para el tratamiento de
infecciones por retrovirus como, el virus VIH, del SIDA

Inhibidores de proteasa (IP):
Inhiben la enzima proteasa del virus impidiendo la produccin
de protenas necesarias para la maduracin y replicacin del VIH.
Esta clase de drogas comparte las siguientes caractersticas:
Todos pueden causar intolerancia gastrointestinal.
Han sido asociados a hiperglicemia (elevacin del azcar en la
sangre), aparicin de diabetes mellitus e hiperlipidemia
(aumento de las grasas en sangre, como el colesterol).
Son metabolizados por el hgado, por lo que puede haber
interaccin con otras drogas que tambin son metabolizadas
por este rgano.
3. Interferones
Los interferones son unas protenas producidas naturalmente por el sistema
inmunitario de animales como respuesta a agentes patgenos: virus y clulas
cancergenas.
Son glicoprotenas de la clase de las citocinas.
Son capaces de interferir en la replicacin de los virus en las clulas hospedadoras.
Se unen a receptores en la superficie de las clulas infectadas, activando diferentes
vas de sealizacin en las que participan diversas protenas antivirales, para impedir
la replicacin de una amplia variedad de virus.
Cumplen, adems, otras funciones: activan clulas inmunes, como los macrfagos y
las clulas NK; incrementan el reconocimiento de clulas cancergenas o infecciones.
Ciertos sntomas como el dolor muscular y la fiebre estn relacionados con la
produccin de interferones durante la infeccin.
USOS BIOTECNOLOGICOS
Ingeniera gentica
Armas biolgicas
nanotecnologa
Clonacin
Ciencia de materiales y nanotecnologia
Los virus pueden considerarse nanopartculas orgnicas.
El tamao y forma de los virus y el nmero y naturaleza de los grupos
funcionales en su superficie estn exactamente definidos, pueden ser utilizados
en la ciencia de los materiales como herramientas base para realizar
modificaciones en superficies ligadas covalentemente.
Las partculas virales separan los tintes fluorescentes utilizados para la
sealizacin, con el fin de prevenir la formacin de dmeros no fluorescentes
que actan como absorbentes.
Virus no patgenos puedan usarse como moldes para la sntesis dirigida de
nanohilos magnticos y semiconductores. Mediante la modificacin gentica
de virus se consigue que ciertos pptidos (protenas pequeas) aparezcan en
la superficie del virus. Estos pptidos adsorben de medio lquido los elementos
de inters y se forman monocristales (ZnS, CdS, CoPt, FePt...) en esa misma
superficie. Un calentamiento posterior elimina los virus pero induce la
formacin de los nanohilos.
Armas biologicas
Los virus tienen capacidad de causar epidemias devastadoras.
El temor est justificado por el xito en la recreacin del virus de
la gripe de 1918 en el laboratorio.
El virus de la viruela devast en el pasado numerosas
sociedades humanas.
La enfermedad fue erradicada, pero el virus se conserva en
varios laboratorios.
La vacuna contra la viruela dej de administrarse despus de la
erradicacin de la enfermedad, por lo que la poblacin mundial
actualmente no presenta casi ninguna resistencia al virus.
VIROIDES
Estn constituidos por una cadena cclica corta de ARN, circular o con
forma de varilla.
La nomenclatura de los viroides incluye el sufijo Vd para
distinguirlos de los virus.
Logran causar infeccin por autocatlisis de su material gentico. En
s constituyen una etapa primitiva de los virus.
El segundo viroide en ser descubierto fue el agente causal de la
exocortis de los ctricos (citrus exocortis viroid, CEVd). Actualmente se
conocen ms de 30 viroides.
Se presume que causan la enfermedad interfiriendo con la regulacin
gnica de la clula hospedadora en la etapa de correccin del ARN
mensajero celular: particularmente en la eliminacin de intrones y de
empalmes de exones, presentando secuencias muy similares a los
intrones que normalmente son cortados .
Se han caracterizado 30 especies de viroides que infectan solamente
plantas superiores.
PRIONES
Prin: pequea partcula infecciosa proteica.
Se caracterizan por producir enfermedades que afectan el sistema
nervioso central (SNC), denominadas encefalopatas espongiformes
transmisibles (EET).
Las partculas infectivas estn constituidas total o parcialmente por
una forma modificada de protena.
Poseen afinidad por las protenas hidrfilas de las membranas
celulares.
La infeccin con protenas prinicas se debe a que, al consumirse,
empiezan a actuar en el tejido nervioso como ncleos en torno a los cuales
ms protenas se desnaturalizan bajo su accin y se acumulan, formando
generalmente fibrillas insolubles.
Se cree que la accin patgena de los priones est muy relacionada con la
forma modificada de una protena natural existente en el organismo que,
al entrar en contacto con las protenas originales, las induce a adoptar la
forma anmala del prin, mediante un mecanismo todava desconocido.
Humanos (Kuru: Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ)
Animales (Scrapie: Encefalopata espongiforme bovina (vacas locas)
ORIGEN DE LOS VIRUS
Hay tres teoras principales sobre el origen de los virus:
Teora de la regresin celular: es posible que los virus fueran pequeas clulas
que parasitaban clulas ms grandes. A lo largo del tiempo, desaparecieron los
genes que no necesitaban a causa de su parasitismo. El ejemplo de bacterias
Rickettsia y Chlamydia parece apoyar esta teora, pues es probable que su
dependencia del parasitismo haya causado la prdida de los genes que les
permitan sobrevivir fuera de una clula. teora de la degeneracin.
Teora del origen molecular-celular (tambin llamada hiptesis del nomadismo
o hiptesis del vagabundeo): algunos virus podran haber evolucionado a partir
de fragmentos de ADN o ARN que escaparon de los genes de un organismo
celular mayor. El ADN fugitivo podra haber provenido de plsmidos.
Teora de la coevolucin: los virus podran haber coevolucionado de
complejas molculas de protenas y cido nucleico, al mismo tiempo que
aparecieron las primeras clulas en la Tierra, y habran sido dependientes de
la vida celular durante muchos millones de aos. Los viroides son molculas
de ARN que no se clasifican como virus porque carecen de envoltura
proteica. Sin embargo, tienen caractersticas comunes a diversos virus y a
menudo se los llama agentes subvricos.
El virus de la hepatitis D de los humanos tiene un genoma de ARN similar al
de los viroides, pero su envoltorio proteico deriva del virus de la hepatitis B y
no puede producir uno propio. Por lo tanto, es un virus defectuoso que no
puede multiplicarse sin la ayuda del virus de la hepatitis B.
Estos virus que dependen de otras especies vricas reciben el nombre de
satlites, y podran representar estadios evolutivos intermedios entre los
viroides y los virus.
Los priones dan credibilidad a la teora de que los virus podran haber
coevolucionado de molculas autoreplicadoras; ya que ellos son capaces de
multiplicarse pues algunas protenas pueden existir en dos formas
diferentes, y los priones son capaces de inducir el cambio de la forma
normal de una protena husped a la forma del prion. Esto inicia una
reaccin en cadena en la que cada protena prinica convierte muchas
protenas del husped en ms priones, y estos priones convierten a su vez
an ms protenas en priones.
Sin embargo, parece improbable que todos los virus actualmente conocidos
compartan un antepasado comn y probablemente los virus han aparecido
en varias ocasiones en el pasado por medio de uno o ms mecanismos; con
lo cual, podran ser correctas todas ellas