REPLICACIN DEL ADN

EXISTEN TRES MODELOS DE REPLICACIN

a) Conservativa,
b) Dispersiva,
c) Semiconservativa(correcta)

En cada una de las molculas hijas se conserva una de las
cadenas parentales, y por eso se dice que la replicacin del
ADN es Semiconservativa. Hasta que finalmente se pudo
demostrar que la replicacin es Semiconservativa, se
consideraron tres posibles modelos de replicacin:

Semiconservativa (correcta). En cada una de las molculas hijas se
conserva una de las cadenas parentales.
Conservativa. Se sintetiza una molcula totalmente nueva.
Dispersiva. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la cadena antigua y
fragmentos de la nueva.

EL ORIGEN DE REPLICACIN

Es el lugar del cromosoma donde se inicia la replicacin de la cadena de
ADN. Se trata, por lo tanto, de una determinada secuencia de
nucletidos a partir de la cual se desarrolla una horquilla de replicacin
que dar lugar a las dos cadenas idnticas de ADN resultantes.
En los organismos procariotas suele encontrarse un nico origen de
replicacin en su ADN, mientras que en los eucariotas se encuentran
normalmente mltiples orgenes en cada cromosoma, lo que permite
una velocidad razonable de replicacin de las largas cadenas de ADN
de estos organismos. Esta multiplicidad de orgenes en una cadena
conforma las denominadas burbujas de replicacin.


LA REPLICACIN AVANZA EN FORMA DE HORQUILLA

Debido a que en la clula ambas cadenas de la doble hlice de ADN se
duplican al mismo tiempo, stas deben separarse para que cada una de ellas
sirva de molde para la sntesis de una nueva cadena. Por eso, la replicacin
avanza con una estructura en forma de horquilla formndose una burbuja u
ojo de replicacin que avanza en direccin a la regin de ADN no duplicado
dejando atrs los dos moldes de ADN de cadena simple donde se est
produciendo la replicacin.
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayora de los
casos, es decir, a partir de un punto se sintetizan las dos cadenas en
ambas direcciones. Esto ocurre en la mayora de los organismos,
pero se dan excepciones en algunos procariontes debido a que los
mecanismos de replicacin que tienen lugar dependen de la propia
estructura de su As, en casos particulares como el ADN
mitocondrial, algunos plsmidos o algunos genomas de cadena
simple de fagos pequeos, la replicacin se da unidireccionalmente
pudiendo haber uno o dos orgenes de replicacin.material
hereditario
SEMIDISCONTNUA

La replicacin siempre se da en sentido 5' 3', siendo el extremo 3'-OH libre
el punto a partir del cual se produce la elongacin del ADN. Esto plantea un
problema, y es que las cadenas tienen que crecer simultneamente a pesar
de que son antiparalelas, es decir, que cada cadena tiene el extremo 5'
enfrentado con el extremo 3' de la otra cadena. Por ello, una de las cadenas
debera ser sintetizada en direccin 3' 5'.
Una de las nuevas cadenas de ADN se sintetiza en forma de trozos cortos
que se denominan fragmentos de Okazaki. Su longitud puede variar entre
1000 y 2000 nucletidos en las bacterias y entre 100 y 400 nucletidos en
eucariontes.
La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que la horquilla de
replicacin se denomina hebra conductora o adelantada y es sintetizada de
forma continua por la ADN polimerasa mientras que la que se sintetiza en
sentido contrario se denomina hebra rezagada, cuya sntesis es realizada de
forma discontnua teniendo que esperar a que la horquilla de replicacin
avance para disponer de una cierta longitud de ADN molde

ADN POLIMERASAS

Emparejan los desoxirribonuclesidos trifosfato (dNTP) con la base
complementaria correspondiente del ADN molde. Los dNTP que se usan en
la replicacin del ADN contienen tres fosfatos unidos al grupo hidroxilo 5' de
la desoxirribosa y dependiendo de la base nitrogenada sern dATP, dTTP,
dCTP o dGTP. La reaccin fundamental es una transferencia de un grupo
fosfato en la que el grupo 3'-OH acta como nuclefilo en el extremo 3' de la
cadena que est en crecimiento. El ataque nucleoflico se produce sobre el
fosfato (el ms prximo a la desoxirribosa) del desoxirribonuclesido 5'
trifosfato que entra, liberndose pirofosfato inorgnico y alargndose el ADN.
A diferencia de la mayora de procesos biolgicos que ocurren en la clula en
los que slo se separa un grupo fosfato (P
i
), durante la replicacin se
separan los dos ltimos grupos fosfato, en forma de grupo pirofosfato (PP
i
).
Este proceso se puede resumir en una ecuacin qumica:
(DNA)
n
+ dNTP (DNA)
n+1
+ PP
i


Las ADN polimerasas pueden aadir hasta 1000 nucletidos por segundo.
Esto es debido a su naturaleza procesiva, es decir, el nmero de nucletidos
que son capaces de aadir cada vez que se asocian al molde de ADN que
van a copiar. Dado que la adicin de los nucletidos es un proceso que dura
unos milisegundos, la velocidad de catlisis va a depender del tiempo que la
ADN polimerasa permanece unida al ADN, esto es, de su posesividad

PROCESO DE REPLICACIN
INICIACIN.
Para que pueda formarse la horquilla de replicacin es necesario que las dos
cadenas se separen para sintetizar el cebador y el ADN de la cadena de nueva
sntesis. el ADN debe desenrollarse y el punto de partida viene determinado por
una secuencia especfica de nucletidos conocida como origen de replicacin; en
E. coli, el origen de replicacin se conoce como OriC. Esta secuencia contiene
gran cantidad de adenina y timina que facilita el desenrollamiento y es reconocida
por protenas iniciadoras que controlan este proceso, de forma que una vez se ha
unido la protena iniciadora al ADN, sta provoca el desenrollamiento de estas
regiones de fcil desnaturalizacin.
A continuacin las protenas iniciadoras reclutan el resto de protenas que
conforman el replisoma y que son necesarias para la sntesis de ARN y ADN,
empezando por la helicasa. Esta enzima, generalmente con forma de anillo y de
alta procesividad, se une a la regin de ADN de simple cadena resultante del
desenrollamiento, desplazndose a lo largo de sta mediante consumo de ATP en
direccin a la horquilla de replicacin, es decir, en direccin 5' 3' en la hebra
rezagada y 3' 5' en la hebra conductora, rompiendo los puentes de hidrgeno
que mantienen unida la doble hlice.
[3]
El siguiente conjunto de protenas
reclutadas son las denominadas protenas SSB (single-stranded DNA binding
proteins) encargadas de la estabilizacin del ADN monocatenario generado por la
accin de las helicasas, impidiendo as que el ADN se vuelva a naturalizar o forme
estructuras secundarias de manera que ste pueda servir de molde.

Estas protenas se unen preferentemente junto a otras SSB ya
unidas al ADN por unin cooperativa permitiendo que su unin a la
cadena conforme avanza la helicasa sea rpida, y estabilizando,
adems, su propia unin a la cadena. Por otro lado, conforme las
helicasas van avanzando se va generando superenrollamientos en
la doble cadena de ADN para relajar la tensin producida por el
aumento del nmero de enlace o nmero de veces que se
entrecruzan las dos cadenas, y si stos no fueran eliminados,
llegado a un punto la horquilla ya no podra seguir avanzando. Las
topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los
superenrollamientos cortando una o las dos cadenas de ADN y
pasndolas a travs de la rotura realizada, sellando a continuacin
la brecha
ELONGACIN
En el siguiente paso, la Holoenzima ADN Pol III cataliza la sntesis
de las nuevas cadenas aadiendo nucletidos sobre el molde. Esta
sntesis se da bidireccionalmente desde cada una de las horquillas
de replicacin que avanzan en sentido opuesto dentro de cada
burbuja. Cuando dos horquillas adyacentes se encuentran, es decir,
cuando dos burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han
fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado.
Puesto que la Holoenzima ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH
libre, es necesario que una ARN primasa catalice la formacin de un
fragmento corto especfico de ARN llamado cebador, que
determinar el punto por donde la ADN polimerasa comienza a
aadir nucletidos. As, durante la sntesis, en cada horquilla de
replicacin se van formando dos copias nuevas a partir del cebador
sintetizado en cada una de las dos hebras de ADN que se separaron
en la fase de iniciacin,

Pero debido a la unidireccionalidad de la actividad polimerasa
de la ADN Pol III, que slo es capaz de sintetizar en sentido
5 3', la replicacin slo puede ser continua en la hebra
conductora o cadena lder; en la hebra rezagada es, por un
lado, discontnua, dando lugar a los Fragmentos de Okazaki),
y por otro, antiparalela, es decir, se da en el mismo sentido 5'
3' pero en "sentido" contrario al de la sntesis de la
primera.
TERMINACIN
En la hebra rezagada, cuando la ADN Pol III hace contacto con el extremo de
otro Fragmento de Okazaki contiguo, el cebador de ARN de ste es
eliminado y los dos fragmentos de Okazaki de ADN recin sintetizado son
unidos. Una vez se han juntado todos se completa la doble hlice de ADN. La
eliminacin de cebadores tambin se da en la hebra conductora, de sntesis
contina, pero debido a que en sta hay un slo cebador es un proceso que
slo tiene lugar una vez, mientras que en la hebra rezagada se dar tantas
veces como fragmentos de Okazaki haya. Para ello intervienen una serie de
enzimas:
La enzima ARNasa H ("H" de Hbrido ARN-ADN) elimina el cebador
a excepcin del ribonucletido directamente unido al ADN; la ADN
Pol I elimina este ribonucletido gracias a su actividad exonucleasa
5' 3' y rellena el hueco con ADN quedando una molcula completa
a excepcin de una rotura entre el extremo 3'-OH libre y el fosfato 5'
de la cadena reparada; por ltimo, la ADN ligasa sella esa rotura
catalizando las reacciones de condensacin que unen los grupos
fosfato y la desoxirribosa de los nucletidos contiguos, creando un
enlace fosfodister mediante el uso de ATP
MODELO DE LA REPLICACIN: