ESPECTROFOTOMETRIA

Lic. T.M. Fredy Enrique Laguna Len

FUNDAMENTO
La espectrofotometra es el mtodo de
anlisis ptico ms usado en las
investigaciones qumicas y biolgicas.

Se refiere a los mtodos, cuantitativos, de
anlisis qumico que utilizan la luz para
medir la concentracin de las sustancias
qumicas

Todas las sustancias pueden absorber
energa radiante, aun el vidrio

Cuando la luz atraviesa una sustancia,
parte de la energa es absorbida; la energa
radiante no puede producir ningn efecto
sin ser absorbida
LONGITUDES DE ONDA
La cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia
recorrida por la luz.


LEY DE LAMBERT
IO
I = I0 10 -K.L log = K L
I
I = intensidad de luz transmitida I0 = intensidad de luz incidente
K = coeficiente de extincin L = espesor de capa
K se refiere a las sustancias en general, sin estar en disolucin.
Medio absorbente
Intensidad transm.
IO
La cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentracin
en la solucin.

LEY DE BEER
IO
I = I0 10 -K'.C log = K' C
I
I = intensidad de luz transmitida I0 = intensidad de luz incidente
C = concentracin de la sustancia absorbente K = coeficiente de extincin
K se refiere a las sustancias en general, sin estar en disolucin.
Sustancia absorbente
Intensidad trans.
COLORIMETRIA
La colorimetra es una tcnica
instrumental que tiene por
objeto determinar la absorcin
de luz visible por una muestra,
que puede ser una sustancia
pura o bien una mezcla o
disolucin
Fenmenos involucrados cuando
un haz (monocromtico) de
radiacin incide sobre una cubeta
conteniendo una solucin que
absorve en la longitud de onda
incidente


Io = Ir + Ie + Ia + It



Io = Intensidad del haz incidente,
Ir = Intensidad del haz reflejado,
Id = Intensidad del haz dispersado,
Ia = Intensidade del haz absorvido
por el medio
It = Intensidad del haz transmitido.
EQUIPOS DE MEDICION
ESPECTROFOTOMETRO FOTOMETRO
Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro


Espectrofotmetro Mecanismo Interno
Espectrofotmetro
Lampara
Selector
Celda
Detector
computadora
Espectrofotmetro
Lampara
Celda
Detector
computadora
Selector
Fotmetro Semiautomatizado
Fotmetro Semiautomatizado
CONCEPTOS BSICOS
ENZIMA.-
Protena responsable para apoyar casi todas las
reacciones qumicas que mantienen la homeostasis
del ser humano ,catalizadores biolgicos
Las enzimas se encuentran en casi todos los
tejidos y fluidos del cuerpo.
SUBSTRATO.-
Sustancia o sustancias especificas en las que acta
una determinada enzima. Ejm. Almidn sustrato de
amilasa.
CATALIZADOR.-
Sustancia que altera la velocidad de la reaccin
qumica, sin que resulte modificada al final de la
misma.
METODOS BIOQUIMICOS
CUALITATIVO
CUANTITATIVO:
Cambio de:
-aspecto
-color
- Punto final
- Cintico
- 2 puntos
- turbidimtrico
Cuantifican:
-enzimas
-electrolitos
-metabolitos,etc.

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica
estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por
enzimas

La velocidad de una reaccin catalizada
por un enzima puede medirse con
relativa facilidad ,realizando
siempre en las condiciones
ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc. y se
utilizan concentraciones saturantes
de sustrato.

En estas condiciones, la velocidad de
reaccin observada es la velocidad
mxima (Vmax). La velocidad
puede determinarse midiendo:

1) la aparicin de los productos o
2) la desaparicin de los
reactivos.
CINTICA ENZIMTICA
La grafica muestra:
enzima libre (E) y enzima unido al
sustrato (ES), de forma que la
concentracin total de enzima, [ET],
(que es constante a lo largo de la
reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]
Segn la cual la concentracin del
complejo enzima-sustrato es pequea y
constante a lo largo de la reaccin. Por
tanto, la velocidad de formacin del
complejo enzima-sustrato (v1) es igual a
la de su disociacin (v2+ v3):
v1 = v2 + v3
Adems, como [ES] es constante, la
velocidad de formacin de los productos
es constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.
CINTICA ENZIMTICA
Tiempo
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

1 2
Ab = Ab2-Ab1
Factor de calibracin =
st
Ab
1.- Temperatura
2.- Agitacin
3.- Fuente de luz
4.- Concentracin
5.- Catalizadores
CINTICA ENZIMTICA
FACTORES QUE MODIFICAN
LA VELOCIDAD DE LAS
REACCIONES
TEMPERATURA
La temperatura aumenta la energa cintica de las molculas o iones y
por consiguiente el movimiento de estos, con lo cual, aumenta la
posibilidad de choques entre las molculas o iones de los reactivos,
aumentando la posibilidad de que ocurra la reaccin o acelerando una
reaccin en desarrollo.


La velocidad de una reaccin crece, en general, con la
temperatura, y se duplica, aproximadamente, por cada
10 C que aumenta la temperatura.

Por ejemplo, el cloruro de sodio reacciona lentamente con el cido
sulfrico. Si se le proporciona calor aumenta la velocidad de reaccin
dando sulfato de sodio (Na
2
SO
4
) y cido clorhdrico:

2.NaCl + H
2
SO
4
Na
2
SO
4
+ 2.HCl

Recordemos que los combustibles para ser quemado, primero deben
alcanzar su punto de combustin, luego por ser reacciones exotrmicas
(liberan calor) la combustin contina sola.
AGITACION
La agitacin siempre esta
relacionado con las
superficies de contacto, lo
que se logra agitando las
sustancias reaccionantes, es
mezclar ntimamente los
reactivo aumentando la
superficie de contacto entre
ellos.

INCIDENCIA DE LUZ
Hay reacciones que en la oscuridad son muy lentas, como por
ejemplo, la combinacin del hidrgeno con el cloro. La luz solar
acelera la reaccin de modo tal, que a la luz solar directa, la reaccin
se hace explosiva:

H
2
+ Cl
2
2.HCl

Lo mismo ocurre en la formacin de glcidos por los vegetales verdes
a partir del agua y el dixido de carbono en la fotosntesis. Ocurre lo
mismo con la descomposicin de sustancias poco estables, por tal
motivo LOS REACTIVOS se envasan en recipientes hermticos
que impidan el paso de la luz, como por ejemplo, el perxido de
hidrgeno:

2.H
2
O
2
+ luz 2.H
2
O + O
2
(rpida)
CONCENTRACIN
La velocidad y la concentracin en
(moles/litro) son directamente
proporcionales

Si dos sustancias homogneas A y B
reaccionan:
A + B C + D

La velocidad de la reaccin es:
V = [A].[B]

Si duplicamos la concentracin, por ejemplo,
de la sustancia A, la velocidad de la reaccin
se duplica:
V* = 2.[A].[B]

En la figura anterior se observa, que
aumentando la presin las molculas de las
sustancias reaccionantes se aproximan entre
s, acrecentando la posibilidad de choque
entre sus molculas, y por consiguiente se
acelera la reaccin.
CATALIZADORES
a) Gran desproporcin entre la masa de las sustancias que reaccionan
y la pequea masa del catalizador (enzima-substrato).

b) El catalizador es igual al final del proceso, como al comienzo de l.

c) Un catalizador no produce una reaccin por si solo, simplemente
modifica la velocidad de la misma.

d) Los catalizadores son especficos de cada reaccin o de un cierto
grupo de reacciones.

La absorcin de las impurezas que acompaan a las sustancias
reaccionantes, pueden disminuir o detener la accin del catalizador.
Estas sustancias que retardan la accin de los catalizadores se
denominan venenos del catalizador.

GRACIAS !