Tipos de

transformacin celular
BACA MONTES DE OCA DANI EL
BENI TEZ MAR N TSI SEJE
MAYA PLAZA MAYRA
VARELA BAUTI STA WI LI BALDO
Transformacin celular
Proceso por el que las caractersticas fenotpicas de una clula se modifican
como consecuencia de la incorporacin en el DNA nuclear de otro organismo
(virus o plsmido).
Transformacin celular por
Agrobacterium
La bacteria Agrobacterium tumefaciens es un patgeno que provoca tumores en las plantas,
dando como resultado una enfermedad llamada agalla de cuello o crown gall.






Agrobacterium tumefaciens Agallas de cuello
Infeccin por Agrobacterium
Aplicaciones
biotecnolgicas
Transformacin celular por vectores

Vectores virales. Los vectores virales no han satisfecho las expectativas sobre su uso en
Ingeniera Gentica de plantas, pero s tienen el potencial de complementar las tecnologas
existentes de transferencia directa de genes y transformacin mediante Agrobacterium de
manera efectiva.

Vectores transposones. Los transposones son fragmentos de DNA que pueden realizar saltos
de una zona del DNA a otra in vivo.
El elemento Ac del maz se transfiri a plantas de tabaco por medio de una transformacin
mediada por Agrobacterium. En dichas plantas se observ su escisin y reintegracin en
cualquier sitio tal y como ocurre en el hospedador natural (maz)
Transformacin celular por tcnicas
de transferencia directa

Adems de las tcnicas de transferencia gnica basadas en el uso de Agrobacterium, existen
otro tipo de tcnicas basadas en la utilizacin de tratamientos qumicos, fsicos y elctricos para
introducir DNA en las clulas. Estas tcnicas son denominadas comnmente como tcnicas de
transferencia gnica directa (DGT).
Transferencia de DNA a protoplastos
La tcnica se basa en el principio de que la pared celular es la principal barrera para la captacin
de DNA, as que esta puede ser temporalmente extrada; posteriormente distintos mtodos
simples pueden ser utilizados para la transferencia gnica.

Los protoplastos tiene un gran inters en lo que se refiere al proceso de extraccin de la pared
celular (mediante enzimas de restriccin), pues este va a aislar las clulas de una en una a partir
del tejido utilizado, por lo que las clulas diana para la transferencia es una gran poblacin de
unidades individuales.
El mtodo qumico ms efectivo es el mtodo que usa polietilen glicol (PEG) en combinacin
con cationes divalentes (Ca++ o Mg++).

El mecanismo de la captacin de DNA inducido por el PEG no est completamente entendido,
pero implica la contraccin del volumen del protoplasto debido a la alta presin osmtica
originada por el PEG, seguido de la creacin de vesculas endocticas que incorporan el complejo
catin/DNA. Muchos factores van a influir en la eficacia del proceso de transformacin,
principalmente la concentracin de PEG, el pH del tampn de transformacin y la cantidad de
cationes divalentes.
La mayor alternativa al tratamiento con PEG para la transformacin de protoplastos es la
electroporacin.

En este mtodo los protoplastos son suspendidos en un tampn con gran conductividad que
contiene el DNA. Se aplican pulsos cortos de alto voltaje que pasa a travs de la solucin,
causando la aparicin de poros de forma reversible en la membrana, que van a permitir la
entrada de molculas externas.
El bombardeo con microproyectiles o
biolstica
Es el mtodo alternativo al plsmido Ti ms
importante para transferir DNA a plantas. La tcnica
consiste en baar partculas esfricas de oro o
tungsteno (aproximadamente de 0,4-1,2 micrmetros
de dimetro, o del tamao de algunas clulas
bacterianas) con DNA, el cual ha sido precipitado con
CaCl2, espermidina o polietilen glicol. Las partculas
baadas con DNA son aceleradas a altas velocidades
(300-600 metros / segundo) con un equipo especial
llamado pistola de partculas (o pistola de genes). Los
proyectiles acelerados van a penetrar la pared celular
y la membrana de la clula, aunque la densidad de
partculas utilizadas no va a resultar
significativamente daina para la misma.
Una vez dentro de la clula, el DNA se separa de las
partculas y, en algunos casos, es integrado dentro del
genoma de las plantas. El bombardeo con
microproyectiles es utilizado para transferir DNA exgeno
a suspensiones celulares de plantas, a cultivos de callos,
a tejidos meristemticos, a embriones inmaduros y a
polen, todos ellos obtenidos a partir de un amplio rango
de plantas diferentes, incluidas monocotiledneas y
confieras, plantas menos susceptibles de la infeccin por
Agrobacterium. Adems, este mtodo a sido utilizado
para transferir DNA a cloroplastos y mitocondrias.
Microinyeccin
Es una tcnica que ha sido aplicada en clulas animales desde hace ya veinte aos,
convirtindose en el mtodo de transferencia gnica ms utilizado, sobre todo en mamferos. La
microinyeccin ofrece la ventaja de que es uno de los dos mtodos, junto con la transformacin
mediada por lser, que permite la transferencia gnica a una clula concreta. La clula
continuars su desarrollo y es transgn expresado lo har tambin en su progenie. Esto
constituye una poderosa herramienta para analizar la expresin gnica diferencial en distintos
tipos celulares y para el marcaje de clulas en el estudio de morfognesis vegetal.
Macroinyeccin
La trasformacin mediante la inyeccin de DNA en el interior de cavidades que contienen
meristemos u rganos sexuales de la planta parece ser un paso obvio para la introduccin de
DNA en la planta. Esta tcnica ofrece la oportunidad de un mayor y ms ntimo contacto entre el
DNA y la lnea germinal.

La metodologa de esta tcnica es sencilla: la solucin que contiene el plsmido de DNA ser
inyectado en la cavidad que rodea la inflorescencia en desarrollo. El inconveniente es que ser
necesario utilizar una gran cantidad de plsmido. La potencial ventaja de esta tcnica es por
tanto su simplicidad, ya que puede ser utilizada en todas las plantas sin necesidad de la
preparacin de cultivos tisulares.
Electroporacin
Se basa en el conocimiento de que la aplicacin en la membrana celular de pulsos elctricos
cortos y de alto voltaje hace que en esta aparezcan, de forma temporal, poros que van a permitir
la entrada en el interior de la clula de macromolculas presentes en la solucin extracelular.

Este proceso permite a las clulas suspendidas en un tampn con plsmidos de DNA incorporar
al interior celular el ADN tras la electroporacin, resultando en una trasformacin transitoria o
estable.
Electroporacin de polen y microsporas.
Electroporacin de tejidos

Ultrasnidos
Es un mtodo fsico para la transferencia de plsmidos de DNA a protoplastos y clulas intactas.
Esta tcnica se basa en la aplicacin se ondas de ultrasonido que van a crear, en primer lugar, la
formacin de burbujas, con la consecuente generacin de elevada presin y temperatura. En
segundo lugar, los ultrasonidos van a provocar la generacin de corrientes alrededor de las
burbujas. La velocidad de estas corrientes estarn relacionadas con el efecto que va a producir el
tratamiento con ultrasonidos; de forma general, el tratamiento fuerte con ultrasonidos se asocia
con la inhibicin de la sntesis de polisacridos y protenas, as como con la destruccin de
algunas macromolculas.

Transformacin mediante laser
Se basa en llevar a travs del objetivo pulsos de luz de alta energa a las regiones del tejido diana
de menos de 1m de dimetro. Esta tcnica resulta muy til para manipular componentes
celulares y orgnulos, porque el rayo puede ser dirigido directamente a esta rea seleccionada.
El hecho de que con el lser, agujeros de dimensiones definidas pueden ser creados en la pared
y membrana celular, permitiendo la entrada pasiva de DNA a travs de los al interior de la clula,
hace de esta herramienta una posible forma de vencer la barrera para introducir DNA en la
clula. Este proceso puede ser ayudado por la creacin de un gradiente osmtico entre la clula
y el tampn hipotnico que favorezca la entrada de DNA a favor de gradiente.
Transformacin mediada por
gametos


El objetivo del mtodo es que el DNA sea transportado durante la fecundacin al interior de los
vulos, pues en este estado el DNA tiene ms posibilidades de ser integrado.
Transformacin por imbibicin
La introduccin de DNA durante la imbibicin de tejidos de plantas deshidratados es un mtodo
que ha sido estudiado desde los aos sesenta. Durante la deshidratacin ocurren cambios fsicos
y qumicos como la expansin rpida de la clula, la rotura de la pared, los cambios estructurales
en la membrana, etc., que sugieren que en estas condiciones el DNA puede ser captado.
Gracias por su atencin