Los animales no poseen enzimas que puedan digerirlos pero poseen microorganismos que, al fermentar el alimento, permiten al rumiante lo siguiente: Digestin de polisacridos complejos.
Aprovechar NNP, para convertir en protena microbiana.
Sntesis de vitaminas hidrosolubles.
El rumiante aprovecha : los productos finales de la fermentacin, spp AGV y los nutrientes contenidos en los cuerpos celulares de los microorganismos. Agua Muestra de alimento colocada en estufa a una temperatura de 105C durante 24 horas, el agua evapora y el alimento seco restante se llama materia seca.
Los alimentos contienen cantidades diferentes de agua. En sus etapas inmaduras las plantas contienen 70-80% agua (es decir 20-30% materia seca). Sin embargo, las semillas no contienen ms de 8 a 10% de agua (y 90 a 92% materia seca).
MS La composicin nutricional de los alimentos es comnmente expresada como porcentaje de materia seca (%MS) en lugar de porcentaje del alimento fresco (% "como alimentado") porque: * La cantidad de agua en los alimentos es muy variable y el valor nutritivo es ms fcilmente comparado cuando se expresa en base a materia seca. * La concentracin de nutriente en el alimento puede ser directamente comparada a la concentracin requerida en la dieta. Cenizas Cuando una muestra de alimento colocada en un horno se mantiene a 550C por 24 horas la materia orgnica se quemada y la materia restante es la parte mineral, llamada ceniza. En las plantas, el contenido de minerales vara entre 1 a 12%.
Los forrajes usualmente contienen ms minerales que semillas o granos. Los subproductos de animales que contienen huesos pueden tener hasta 30% minerales (principalmente calcio y fsforo).
Minerales: frecuentemente clasificados como macro- y micro minerales. Distincin basada solo en la cantidad requerida por los animales. Nutrientes que contienen energa La mayora de la energa viene principalmente de los carbohidratos. Los alimentos para las vacas usualmente tienen menos de 5% de lpidos pero 50-80% de HC. La mega calora (Mcal) es tpicamente utilizado como una unidad de energa, pero el joule (J) es la unidad oficial de medida. En alimentos para las vacas lecheras, la energa esta expresada como de energa neta de lactancia (ENl), que representa la cantidad de energa en el alimento que es disponible para el mantenimiento del peso corporal y la produccin de leche. Por ej., se requiere 0.74 Mcal ENl para producir 1kg. de leche y la energa en los alimentos es entre 0.9 y 2.2 Mcal ENl/kg. materia seca. Protena Cruda (PC) (mtodo que desarroll un qumico dans, J.G. Kjeldahl, en 1883) En protenas, el promedio del contenido de nitrgeno es 16%. As, el porcentaje de protena en un alimento es tpicamente calculado como el porcentaje de nitrgeno multiplicado por 6.25 (100/16 = 6.25). Esta medida se llama PC. La palabra cruda refiere a que no todo el nitrgeno en el alimento esta en forma de protena.
La PC en forrajes se encuentra entre menos de 5% (residuos de cosechas) hasta ms de 20% (leguminosas de buena calidad). Subproductos de origen animal son usualmente muy ricos en protena (ms de 60% de protena cruda). Nutrientes que contienen nitrgeno Protenas y otros compuestos, incluidos en la materia orgnica de un alimento. Las protenas tienen una o ms cadenas de AA. Hay 20 AA que se encuentran en protenas. Algunos AA son esenciales y otros no-esenciales.
Nitrgeno no-protena (NNP): h. 20-30% del N total de las hojas, no protena (amonaco, urea, aminas, cidos nucleicos). Sin valor nutritivo para monogstricos. Sin embargo, en los rumiantes, NNP puede ser utilizado por las bacterias del rumen para sintetizar aminocidos y protenas. Captacin de N y S por las bacterias Tanto el N como el S estn en la clula en estado reducido: el radical -NH 2 (AA y bases nitrogenadas); el radical -SH (algunos AA y coenz.como la CoA).
En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias? Bacterias fotosintticas y muchas heterotrofas los asimilan en forma combinada inorgnica oxidada: como NO 3 -- , merced a la actuacin secuencial de nitrato- reductasas y nitrito- reductasas asimilatorias como SO 4 = . Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para la incorporacin del S. Muchas bacterias hetertrofas pueden usar alguna forma reducida: de N inorgnico: amonio (NH 4 + ) de S inorgnico: sulfuros (S = , SH - ) de N orgnico: aminocidos, pptidos de S orgnico: cistena. Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente de nitrgeno tambin pueden usar nitratos.
FIJACIN DE NITRGENO
Atmsfera: c/gran cantidad de nitrgeno libre (gas), el nitrgeno molecular o dinitrgeno (N2), que procede de microorganismos denitrificantes.
Slo puede servir de fuente de N a ciertos procariotas, las bacterias fijad. de N o diazotrofos.
Hay ciertos tipos de asociaciones simbiticas entre procariotas diazotrofos y ciertos eucariotas. Estas bacterias toman el N atm. (N2) y lo modifican para que pueda ser utilizado por los organismos vivos como nitratos o amonaco NH3. Desarrollo de un ndulo en una raz de ciertas plantas (en general leguminosas) donde viven bacterias en simbiosis con ella. Nitrogenasa o dinitrogenasa Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; en el centro activo posee un cofactor de Fe y Mo (FeMoCo) = molibdoferroprotena.
Componente II o nitrogenasa- reductasa, que posee tomos de Fe acomplejados con S de determinadas cistenas (por lo que este componente se denomina a veces ferroprotena).
N 2 + 8H+ + 8e + 18 ATP -->2NH 3 + H 2 + 18 (ADP + Pi) Va metablica que fija el nitrgeno atmosfrico N 2 , y lo convierte en amonaco NH 3
Rumiantes Ganado vacuno, caprino, ovino, y grupos como los camlidos (camellos, dromedarios, llamas, etc.) y jirafas. La adaptacin al sistema rumiante acarrea una serie de cambios fisiolgicos en los animales: (1) la saliva deja de una solucin enzimtica pasa a ser un tampn formado principalmente por bicarbonato y fosfato sdicos, (2) el rumen y el intestino (algo menos) se han adaptado a absorber AG de bajo PM que son la principal fuente de C de estos organismos, (3) las clulas de los rumiantes pueden usar AG de cadena corta de manera ms eficiente que el resto de los animales, siendo, por consiguiente, fuente de carbono en vez de la glucosa. Minutos dedicados/h Saliva Vacas adultas 100-150 litros/da Ovinos 8.5-12.5 litros/da
Funciones importantes : Mantener un pH constante (agua, fosfatos y bicarbonatos, Na, K, etc) (Soluc.de simil. [AG] pH=2.78-3.05). Lubricacin, amb. acuoso, aporte de P ato y TC. Fuente NNP(Urea sintetizada en el hgado) Excretora (Hg, K, I) 1 Retculo 2 Rumen (saco craneal) 3 Rumen (saco dorsal) 4 Rumen (saco ciego dorsal) 5 Rumen (saco ventral) 6 Rumen (saco ciego ventral) 7 Omaso 8 Abomaso 9 Orificio retculo-omasal 10 Cardias 11 Pliege retculo-omasal 12 Pilar craneal 13 Pilar longitudinal 14 Pilar caudal 15 Pilar coronario dorsal 16 Pilar coronario ventral Mucosa Interior de rumen, retculo y omaso: epitelio estratificado, c/ mucosa distinta que le facilita su funcin:
RUMEN : Con num- erosas y pequeas papilas. RETCULO Pliegues del epitelio c/ celdas poligonales, y una gran cantidad de pequeas papilas en su superficie. OMASO Papilas longitudinales y anchas (hojas, que atrapan las partculas pequeas de la ingesta). Funcin General
Rumen y Retculo
Conforman una cmara, que mantiene un ambiente favorable para la fermentacin anaerobia. Volumen (retencin). Aporte sufic. de sustratos. Potencial de xido-reduccin de -250 a -450 mV. La temperatura de 39 - 40C. Osmolaridad : 280-300 mOsm (260-340). Hasta 350-400 con ingesta de alfalfa granulada o concentrado; se inhibe digest. de HC. pH de 6-7 (otros 5,5 - 7,2). Remocin de los desechos = trnsito. Remocin de microorganismos vs. regeneracin. Remocin de los cidos grasos voltiles (AGV), producidos durante la fermentacin = absorcin. Estratificacin
Capa gaseosa. Capa slida: alimento y microorganismos flotantes. El alimento consumido en el da, se establece en la parte superior, pues posee partculas de gran tamao (1-2 cm), que atrapan a los gases producidos. El alimento consumido hace 1 da se va ms al fondo, ya fue fermentado suficiente y se redujo su tamao a 2-3 mm; en este momento puede ser captado por el retculo y salir a travs del orificio retculo-omasal. Capa lquida. lquido con pequeas partculas de alimento y microorganismos suspendidos.
El flujo de material slido a travs del rumen es lento y depende de su tamao y densidad. Los alimentos con buena digestibilidad pueden tardar 30 horas. El contenido del rumen y retculo (alimento y productos de la fermentacin), 4-6 Kg en los ovinos y 30-60Kg en los bovinos, se acomoda en tres capas por su gravedad especfica:
Debido a la fermentacin ruminal, se producen y eliminan diferentes gases. Bovino adulto 30-50 litros/hora Borrego 5 litros/hora Los principales son: Bixido de carbono (60-70%). Metano (30-40%). Nitrgeno (7%). Oxgeno (0.6%). Hidrgeno (0.6%). cido sulfhdrico (0.01%). Los AGV son principalmente retirados del lquido ruminal, al ser absorbidos en las paredes del rumen-retculo. Bacterias = 1/2 de la biomasa en el rumen normal (10.000 a 50.000 millones/ml). Por lo menos 28 especies son funcionalmente importantes.
Hongos = h. el 8% de la biomasa intra-ruminal. Se ubican en la ingesta de lento movimiento evitando su rpido lavado. Digieren de forrajes de baja calidad.
Protozoos = 20 40 % de la biomasa, contribucin menor por su gran retencin y menor actividad metablica. Aspectos importantes: Fermentacin acoplada al crecimiento microbiano. Las protenas de la biomasa son la principal fuente de nitrgeno para el animal. Los microorganismos del rumen sintetizan aminocidos y vitaminas, spp del complejo B (ppal fuente para el animal). Tambin algunas bacterias degradan componentes txicos : AA mimosina y sus derivados (de Leucaena), fenoles vegetales como la cumarina (1,2 benzopirona), canavanina (anloga de arginina de la leguminosa Canavalia ensiformis, que inhibe algunas bacterias del rumen, pero es hidrolizada por otras). El rumen incluye entre 10 9 y 10 12
bacterias/ml, y ms del 75 % se asocia a partculas alimenticias. La densidad general no vara con la dieta, pero el nmero de las diferentes especies esta afectado a la disponibilidad del sustrato para la fermentacin. Grupo Biomasa Mg./100 ml Tg % de biomasa total Bacterias pequeas 1.600 20 min. 60-90 Selenomonas 300 Oscillospira flagellates 25 Protozoos ciliados 10-40 Entodinia 300 8 h Dashytricha + Diplodinia 300 Isotricha + Epidinia 1100 36 h Hongos 24 h 5-10 Bacterias del rumen: anaerobias estrictas, que coexisten con pocas anaerobias facultativas, adheridas a las paredes del rumen p/usar el O2 que proviene del torrente circulatorio y los alimentos, son muy importantes las que fermentan la celulosa. Sintrofia: Dos o ms microorganismos combinan sus capacidades metablicas para degradar una sustancia que no pueden degradar en forma individual.
En el rumen existen grupos sintrficos relacionados a la degradacin de fibras, por ejemplo a los celulolticos, hemicelulolticos y los que los suceden, como las bacterias metanognicas.
Los ms competitivos presentan adhesin al sustrato y almacenamiento de energa dentro de la clula. Las bacterias del rumen se caracterizan segn:
Su morfologa, Los productos de fermentacin, Los sustratos que utilizan, La relacin molar (G+C) % de su DNA, y Por su movilidad. Organismo Morfologa Movi- Productos de Fermentacin DNA (mol Sustrato lidad %C+G) Fibrobacter succinogenes * Bacilo - Succinato-Acetato-formiato 45-51 Celulosa Butyrivibrio fibrisolvens * Bacilo Curvado + Acetato-Formiato-lactato-Butirato-H2 y CO2 41 Celulosa Ruminococcus albus* Coco - Acetato-Formiato- H2 y CO2 43-46 Celulosa Clostridium polysaccharolyti-cum Bacilo (espora) Acetato-Formiato-butirato y H2 - Celulosa y Almidn Bacteroides Ruminicola, Bacilo, - Formiato-acetato y succinato 40-42 Almidn Selenomonas Lactilytica, Bacilo Curvado, + Acetato y Succinato 50 Lactato Lachnospira Multiparus Bacilo Curvado + Acetato-Formiato-lactato-H2 y CO2 - Pectina Anaerovibrio Lipolytica Bacilo Acetato-propionato y succinato - Lipolitico Eubacterium Ruminantium Bacilo Formiato-Butirato-lactosay CO2 - Xilano Methanobrevi-bacter ruminantium Bacilo - CH4 (de H2 + CO2 o formiato) 31 Metangenos Bacterias celulolticas Se adhieren a fragmentos vegetales en los 5 de entrados al rumen, segregan sus enzimas hidrolticas y liberan principalmente celobiosa.
Muchas especies celulolticas pueden tambin degradar la fraccin mal llamada hemicelulosa.
Ante la existencia de amonio las bacterias celulolticas se multiplican rpidamente (ej. + Urea). Bacterias amilolticas
La mayora de ellas no usan la celulosa.
Las enzimas amilolticas se encuentran muy distribuidas entre las bacterias y convierten los materiales amilceos, como granos de cereales, en AGV.
Con la presencia de amonio el proceso es ms eficiente. Hongos (ms del 8% de la biomasa) Fermentan polisacridos (celulosa). Los flagelados c/ zoosporas mviles (adhieren a fibras vegetales y desarrollan esporangios y filamentos rizoidales, producen enzimas que facilitan la desaparicin de la pared celular vegetal). Colonizan regiones daadas de las fibras (a 2 horas de la ingestin), en respuesta a materiales solubles. Los hongos producen AGV, gases y trazas de etanol y lactato. Se han identificado especies de 4 gneros: Neocallimastix, Caecomyces (formalmente Sphaeromona), Pyromyces (formalmente Phyromonas) y Orpinomyces. Protozoos (1 milln por ml) Biomasa similar a las bacterias, pero pueden sobrepasarla ms de 3 veces segn la dieta, o inclusive desaparecer. La > Ciliata (organismos unicel. ms complejos), seg. Spp de: 25 a 250 micras, c/17 gneros de la subclase Entodiniomorphes y 2 gn. de la s-clase Holotriches, que difiere en su morfologa y metabolismo. Caractersticas de los protozoos
Con los cilios se mueven y crean corrientes que arrastran las partculas nutritivas hacia la pequea depresin de la superficie celular que sirve para ingerirlas. Viven en el agua y el suelo, donde descomponen la materia orgnica en sustancias que pueden ser utilizadas por otros seres vivos.
Los tiempos de generacin oscilan entre 0.5 a 2 das. En el rumen consumen y metabolizan azcares solubles y bacterias (con lo que limitan el crecimiento bacteriano). PROTOZOOS
Ingieren partculas del tamao de bacterias, como almidn, fibras, cloroplastos y enlenteciendo la degradacin de sustratos rpidam. fermentescibles.
Las especies presentes varan con la especie animal, la localidad y la dieta.
Varios permanecen adheridos a fragmentos de alimento y son mas retenidos que las bacterias y una gran parte pueden ser lisados en el rumen. FLUIDO RUMINAL En una vaca adulta se producen ms de 100 litros de saliva/d. En una vaca de 500 kg. el contenido lquido del rumen es de 50 litros y el flujo de 150 a 170 litros por da.
En cabras se ha determinado que pasan en ambas direcciones, a travs de la pared del rumen, 40 litros de agua al da : 55 ml/cm2 de pared ruminal/hora (in vitro). Paso de slidos, condicionado a:
Las caractersticas fsico qumicas del alimento y al contenido previo.
Otros factores : - tamao de las partculas, - digestibilidad del alimento y - volumen consumido. Componente qumico
Pericarpio
Endospermo 70 al 86 % del peso Germen 7 al 22 % Protenas
3,7
8;0
18,4
Extracto etreo
1,0
0,8
33,2
Fibra cruda (hemicelulosa 67%, celulosa 23 % y lignina 0,1%)
86,7
2,7
8,8
Cenizas
0,8
0,3
10,5
Almidn
7,3
87,6
8,3
Azcar
0,34
0,62
10,8
Composicin qumica proximal de las partes principales de los granos de maz (%) Fuente: Watson, 1987.
Resumidamente Endospermo = HC y Protenas de los granos de maz
Germen = Grasas crudas y, en menor medida, protenas y minerales.
Cubierta seminal / pericarpio = Fibra cruda del grano. Composicin qumica del grano de maz Almidn = 72-73 % (maz ceroso formado totalmente por amilopectina) Glc, fruct, sacarosa y azcares simples = 1 - 3 % Protenas = 8 11 % (5 fracciones = alb, glob y NNP de 7, 5 y 6 % del N total; prolamina zena 52 %; glutelina 2 de 8 %; glutelina 3 de 0,5 % y 5 % de N residual) Fibra soluble e insoluble: 10 12 y 1 2 % respectiv. Fibra cido- y neutrodetergente, hemicelulosa y lignina en el maz completo (salvado de maz = celulosa 25 %, hemicelulosa 75 %y lignina 0,1 %) Aceite y cidos grasos 3 18 % (c/11 y 2-3 % de palmtico y esterico ; oleico 30-36 %; linoleico 24 %; linolnico 0,7 %) GLUCOSA XILOSA GLUCOLISIS
La glucosa y otros azcares son absorbidos por los microorganismos y en su citosol se incorporan a la va de la gluclisis. Este proceso enzimtico da lugar a la formacin de NADH+H (reducido), ATP y piruvato. La energa potencial representada por el ATP es la principal fuente de energa para el mantenimiento y crecimiento de los microbios. Digestin NO fermentativa c/ O2 = aerbica, piruvato CO2 , H2O y ATP
Digestin fermentativa (no es un sistema aerbico); por el contrario es un sistema altamente anaerbico y reductor. La restauracin de NAD oxidado se logra con otro compuesto que sirva como el resumidero de electrones para la oxidacin de los cofactores enzimticos. Si no existiera este mecanismo, todos factores oxidados presentes podran rpidamente reducirse y entonces el metabolismo bacteriano se detendra. y AMI Almidn Nativo Almidn Soluble Amilo dextrina Eritro dextrina Acro dextrina Maltosa Maltasa 2 Glc Glc-6P Hexoquinasa 2 ATP 2 ADP Celobiasa Celulosa Nativa Celulosa Soluble Celo dextrina PM Eritro dextrina Acro dextrina Celulasas C1 y Cx Celobiasa Fosforilasa Celobiosa 1 Glc 1 Glc-1P Celobiosa 2 Glc 2 ATP 2 ADP Piruvato Pi Sntesis de AGV y restauracin del NAD PRODUCTOS FINALES (digestin fermentativa): Lactato si el piruvato funciona como el captador de electrones. El CO2 puede reducirse para formar metano aceptando electrones para la regeneracin del NAD y de FAD. El proceso transformador del piruvato da lugar a los los cidos grasos voltiles (AGV); Actico (CH3-COOH), Propinico (CH3-CH2-COOH) y Butrico (CH3-CH2-CH2-COOH). Bacterias adheridas a alimentos (SAB); Bacterias libres en el licor ruminal (LAB) y Bacterias adheridas a la pared del rumen (Epimurales). Fuentes de protena No-rumiantes : AA pre-formados en su dieta. La urea siempre se pierde en la orina.
Rumiantes : c/distintas fuentes de nitrgeno sintetizan AA y forman protena. mecanismo para ahorrar nitrgeno :Cuando el nitrgeno en la dieta es bajo, la urea, catabolito proteico del cuerpo, puede ser reciclado al rumen en grandes cantidades. Contenido de aminocidos esenciales de las protenas del germen y el endospermo del maz Aminoacido Endospermo (1,26% de N)
Fuente: Orr y Watt. 1957. Peso del grano = Endospermo 70 al 86 %; y germen = 7 al 22 %, aunque aporta lisina y triptofano (AA limitantes). Metabolismo Nitrogenado del Rumen La protena es particularmente vulnerable a la fermentacin ruminal, y sus esqueletos de carbonos pueden proveer energa a los microorganismos.
Los microoorganismos pueden utilizar fuentes de NNP como sustrato para la sntesis de aminocidos.
Independencia de la calidad de las protenas ingeridas: los microorganismos del rumen son capaces de sintetizar todos los aminocidos, incluyendo los esenciales para el hospedador. * Las protenas y el NNP son atacados en el rumen por enzimas microbianas extracelulares (la mayora endopeptidasas parecidas a la tripsina y forman pptidos de cadena corta).
* Los pptidos son absorbidos hacia el interior de los microorganismos, son degradados a aminocidos.
1 Fijacin (entrada y salida de materiales al ecosistema) Ruminococcus flavef., R. albus, B. Succingenes adhieren a las membranas veg.por su envoltura glicoproteica. Adhiere 1 una especie, luego otra... 2 Tiempo medio de generacin (< que el interc.Ingesta) 3 Adhesin a partculas (+ los de generacin lenta). Protozoos Oligotricos se retienen por adhesin a partculas y los Holotricos son secuestralos en la pared del retculo entre dos tomas. AA limitantes segn especie y produccin Vaca en lactancia.......................met., Lis, Phe (Thr) Ternero en crecim......................met. Cabra en lactancia......................met. Oveja adulta (prod. de lana).....Cisti, Met. Cordero en crecim.....................Lis. (Met)
Das antes del parto fijan (g de prot./da) Feto ovino................................15-17g/d Feto bovino..............................95 g/d * Los aminocidos son utilizados para la formacin de protena microbiana o degradados ms para producir energa a travs de la va de los AGV , previa desaminacin que da lugar a amonaco y a un esqueleto carbonado.
Protenas Proteasas AA - pptidos Degradabilidad: forrage = 60-80 %; concentrados y subprod. Industriales = 30-60 % NNP NH 3
Urea Sntesis de protena microbiana ureasa * Los aminocidos forman protena microbiana o son degradados ms para producir energa a travs de la va de los AGV , previa desaminacin que da lugar a amonaco y a un esqueleto carbonado.
Protena Bacteriana (38-55% de la bacteria) 20 g/100g MO fermentada 400-1500g/da seg digestibilidad 2000-7500g MO/da ID: Prot.Bact. 60%, comp. constante Prot.pasante 40%, comp. variable Heces: 20%, Prot.no digerida Composicin qumica proximal del contenido ruminal desecado de bovinos, ovinos y caprinos sacrificados en el Rastro Municipal de Culiacn, Sinaloa (%).
DETERMINACION
BOVINOS (X DE)
OVINOS (X DE)
CAPRINOS (X DE) Humedad
5.45 2.04
6.88 2.77
7.14 2.66
Cenizas
19.43 5.89
15.91 3.65
16.64 2.62
Protena cruda
14.97 1.44
16.01 1.86
16.67 2.88
Grasa cruda
2.23 1.27
2.131.17
2.54 1.31
Fibra cruda
20.32 9.10
33.27 6.47
31.40 7.07
Extr. libre de N
42.01 9.43
33.36 5.2
33.48 5.58
Fuentes de NH 3
Protenas de alimentos + microorganismos -> AA -> NH 3 y cidos orgnicos (cidos grasos con cadenas ramificadas).
Fuentes alimenticias de NNP y urea reciclada de la saliva y a travs de la pared del rumen dan -> NH 3
Principal compuesto que utilizan los microorganismos para la sntesis de aminocidos y protenas (con suficiente energa o carbohidratos).
Formacin de diversos componentes nitrogenados de la pared celular y cidos nucleicos.
Liberado en el rumen es absorbido a la sangre, conducido al hgado en donde se forma urea, la cual se puede reciclar en la saliva o eliminarse a travs de la orina. NH 3
HIGADO RIONES SALIVA Destinos de NH 3 NH 3 utilizado p/el crecimiento de la poblacin bacteriana segn la disponibilidad de energa generada por la fermentacin de carbohidratos.
NH 3 escasez de nitrgeno para las bacterias y reduccin de la digestibilidad de los alimentos.
NH 3 prdida de peso, toxicidad y, en casos extremos, muerte del animal. 38% de los microorganismos aislados del rumen tienen actividad proteoltica. Hay por lo menos tres tipos de proteinasas: 1 - Cistena o Tiol proteinasa (-COOH de AA bsico, aromtico o apolar) 2 - Serina proteinasa (-OH + -COOH de steres o amidas de Arg y Lis) 3 - Metalo proteinasa (c/Zn ++ o Ca ++ , en Leu, Ile, Gli, Gli-Pro) Algunas bact. Poseen exopeptidasas Otras enzimas Asparaginasa L-Asn + H2O -> L-Asp + NH3
Glutaminasa
Ureasa
Arginasa Va de degradacin de protena ingerida a amonaco por microorganismos del rumen. La importancia relativa de bacterias y protozoos depende de las propiedades de la protena a ser atacada. Partculas proteicas pequeas ingestin Protena Soluble Bacterias Protena Insoluble Adsorcin Fijacin Polipptidos Oligopptidos Dipptidos AA AMONIO PROTOZOO Resumen de las propiedades productoras de amonaco de bacterias aisladas de rumen Alto n - Baja actividad Bajo n - Alta actividad
Butyrivibrio fribrisolvens Clostridium aminophilum Megasphaera elsdenii Clostridium sticklandii Prevotella ruminicola Peptoestreptococcus Selenomonas ruminantium anaerobius Streptococcus bovis >10 9 / ml 10 7 / ml 10-20 nmol NH3 min-1 300 nmol NH3 min-1 Mayormente resistente a monensina Monensina sensibles Producen NH3 y asociados 1 - B. Rumincola, M. Elsdenii, S. Ruminantium y algs. Butirivibrios (desaminan AA) Val->isobutirato; Leu->isoval.; Ile->2-metil- butirato + CO2; Pro,Lis,Arg e HC->n-Valrico
2 - Digieren HC complejos y requieren NH3
3 - B. Ureolticas (5% de aislamientos) Aspectos importantes: Acoplamiento fermentacin-crecimiento microbiano (las protenas de la biomasa constituyen la principal fuente de nitrgeno para el animal). Adems de las funciones digestivas, los microorganismos del rumen sintetizan aminocidos y vitaminas, spp del complejo B (principal fuente para el animal). Algunas bacterias degradan componentes txicos de la dieta: aminocidos mimosina y sus derivados, componentes del forraje de Leucaena, fenoles vegetales como la cumarina (1,2 benzopirona), canavanina, anloga a la arginina, componente de la leguminosa Canavalia ensiformis, que inhibe algunas bacterias del rumen, pero es hidrolizada por otras. N ingerido Fraccin soluble Fraccin particulada NnoAA NNP AA Nprot. Nprot. Degradable no degradable Peptidos AA Captacin
Pasaje Fermentacin Snt. Prot. Microb. Pasaje PIA NH3 Prot.Microb. PIA
estudios in vivo estudios in saco Endo- pepti- dasas Protenas Dietarias Mucoprotenas Saliva
Pptidos cadena cta. Pptidos AA Peptidasas NNP (Urea NH3, Biuret, Nitratos, Nitritos, N2) Protenas Microbianas NH3 Piruvato NH3 Protenas pasantes ID Esqueletos C AGV Glc AA Pool extern o AA Pool interno 1.Protenas Microbianas (estruct. y enzimticas) 2.Desaminacin Oxidativa (-cetoc.) 3.Desamin. NO Oxidativa (-cetoc.) 4.Desam. Reduc. (AG saturado) y desat. (AG insat.) 5.Desam. Hidroltica (Ac.-alcohol) 6.Descarboxilacin 7.Sntesis De Novo 8.Eliminacin de AA por exceso de produccin 9.Captacin de NH3 10.Transaminaciones NH3 CO2 AA NH3 Desaminacin Oxidativa (-cetoc.) c/D-L AA-Oxidasas+FAD-> iminocido + H2O o GLDH Desamin. NO Oxidativa de AA-OH y -SH (-cetoc.) c/Deshidratasas + Piridoxal-P + H2O Desam. Reduc. + H2 (AG saturado) Desam. y desat. (AG insat.) Desam. Hidroltica (Acido-alcohol) DESAMINACIN DE AMINOCIDOS
Los AGV de cadena ramificada son utilizados por las bacterias como factores de crecimiento. *va de los AGV: actico, propinico y butrico, y tambin de AGV de cadena ramificada o isocidos : c. isobutrico, c. isovalrico y 2- metilbutirato) para los casos de valina, leucina e isoleucina.
Esqueleto carbonado de muchos AA : El esqueleto carbonado de muchos de los aminocidos se puede acomodar en varios de los pasos de la va de los AGV, con produccin de actico, propinico y butrico,
y tambin de AGV de cadena ramificada o isocidos (cido isobutrico, cido isovalrico y 2-metilbutirato); solo los tres aminocidos de cadena corta ramificada (Val, Leu e Ile), permiten la produccin de estos isocidos. Urea Urea Urea NH3 Urea Ureasa NH 3 + CO 2 Estratos celul. Cornif .
Urea Ureasa bact.NH 3 + CO 2 NH 3 H+ NH+ 4 pH~6,5 Urea 0,28-0,44 g / Kg p.v. es txica panza= h. 84 mg/100 ml lmite detoxif. heptica
Clulas basales Vaso sanguneo Ingreso de N: 1-Elev. osmolaridad de panza, c/ingr.de agua; 2-ADH q`aum. la permeabil. de la mucosa; 3-carencia de agua c/merma en la eliminacin de urea y ms entrada de N a la panza. >55-60 mM GlDH+ NADH = Glutmico (bact) Glu+NH 3 =
Glutamina (bact) 1 % p.v. 20 % aporte de nutrientes y velocidad de eliminacin Crecimiento microbiano de los microorganismos del rumen (Prot de baja digestibil.
Snt. de cs. Nucleicos)
carbohidratos microbios + AGV + = + protenas NNP NH 3 + CH4 + CO2 La absorcin de NH 3 depende del pH ya que este pasa ms rpidamente que el in NH 4 (amonio). Al caer el pH a 5,0-6,0 la absorcin se reduce a 2/3 de la que ocurre a pH 7,8-6,8. Cuantificando La sntesis de protena bacteriana puede variar entre 400 a 1500 gr/da segn la digestibilidad de la dieta.
El porcentaje de protena en bacterias vara entre 38 y 55%.
Se sintetizan 20 gr. de protena bacteriana/c/ 100 gr materia orgnica fermentada en el rumen. Protena sobrepasante o pasante = Protena dietaria que escapa a la digestin ruminal y pasa al intestino sin modificarse en el rumen.
Degradabilidad usual: Forraje = 60-80% y Concentrados o Subpr. industriales = 30-60%. La relacin que existe entre la disponibilidad de carbohidratos y la de protenas (o nitrgeno) ejerce un fuerte impacto sobre la produccin de clulas microbianas y por lo tanto sobre la nutricin del husped.
La mayora de los microorganismos ruminales pueden sintetizar protena a partir de amoniaco proveniente de fuentes no proteicas tales como la urea.
Desde un punto de vista nutricional y econmico, esto se ha explotado utilizando fuentes nitrogenadas de bajo costo en lugar de protenas costosas en las dietas de los rumiantes, permitiendo la sntesis microbiana de protena para satisfacer las necesidades del hospedero. Protena microbiana (cuerpos celulares): una porcin se destruye en el rumen; el resto entra el abomaso pegada a las partculas de alimentos, donde se inactiva la actividad microbiana, y se completa la digestin en el intestino (pepsina, tripsina, quimiotripsina, carboxipeptidasa y aminopeptidasa) en forma similar a la digestin proteica en los monogstricos. Carbohidratos + Protenas/NNP
Microbios + AGV + NH3 + CH4 + CO2 Dieta c/ Forrajes granos o concentrados
> galactoglicridos > triacilglicridos HIDRLISIS DE LPIDOS La digestin de los lpidos en los rumiantes tiene una etapa peculiar microbiana ruminal. Ms del 95% de los lpidos dietarios son hidrolizados rpidamente por lipasas microbianas, producidas principalmente por las bacterias adheridas a partculas alimentarias ( SAB Solid Adherent bacteries). Ms del 70% de los A.G son liberados antes de la primer hora post-ingestin y se produce segn el siguiente esquema: lipasas T.A.G -------------------- 3 A.G + glicerol D.A.G --------M.A.G
Fosfolipasas Fosfolpidos------------------2 A.G + glicerol + base aminada y ac. Fosfrico.
El glicerol es transformado por las bacterias en Ac. Propinico. La galactosa en Acetato y Butirato y las Bases Aminadas en NH3 y A.G.V.
La mayora de los cidos grasos presentes en la dieta de los rumiantes son insaturados; el medio ambiente reductor del rumen produce la hidrogenacin de una gran cantidad de ellos, previamente hidrolizados .
BIOHIDROGENACION. Los A.G liberados son adsorvidos en pequeas partculas alimentarias y van a ser hidrogenados secuencialmente. Las Isomerasas transforman las formas CIS en TRANS Las Reductasas del entorno peri-bacteriano transforman, xej el Linolnico (18: 3) en Linoleico (18:2), este en 11 trans octodecenoico (18:1 18:1, 11t c vaccnico) y, por ltimo, en Esterico (18:0). El Palmitoleico (16:1) pasa a Palmtico (16:0).
Por lo tanto los principales A.G de cadena larga que sern incorporados al organismo animal sern: PALMITICO, ESTEARICO, TRANSVACCENICO y LINOLEICO.
Las ventajas que presenta la hidrogenacin de cidos grasos son: Aumenta el crecimiento bacteriano (los AG insat. provocan cambios en la permeabilidad de las membranas microbianas (inhibiendo su desarrollo). Se reduce la produccin de metano al haber menor cantidad de hidrgeno. Aumenta la energa disponible, ya que los cidos grasos saturados liberan ms energa al oxidarse que los cidos grasos insaturados. SINTESIS DE LIPIDOS EN EL RUMEN Las bacterias son capaces de sintetizar A.G de cadena larga (saturados, pares, impares y ramificados). Las bacterias NO sintetizan A.G poliinsaturados; la pequea proporcin que aparece en los microorganismos ruminales resulta de la incorporacin de A.G exgenos preformados (18:2). LIPIDOS PROTEGIDOS La disminucin de la hidrogenacin ruminal logra un mayor pasaje de A.G insaturados al intestino con aumento de su absorcin (+ en la grasa corporal y lctea) Para lograr el by-pass ruminal se puede: a) Proteger por encapsulamiento, utilizando protenas (casena) tratadas con formaldehido, lo cual impide la liplisis y b) Proteger por saponificacin; los jabones formados se disocian poco en el rumen e impiden la accin de las isomerasas indispensables para el desarrollo de la biohidrogenacin RESUMEN Los microorganismos fermentan Glu para obtener la energa para crecer y prod. AGV como productos finales de fermentacin.
Los AGV cruzan las paredes del rumen y sirven como fuentes de energa para el rumiante.
Mientras que crecen los microorganismos del rumen, producen aminocidos, fundamentales para protenas.
Rumen: ambiente apropiado, suministro generoso de alimentos crecimiento y reproduccin de los microorganismos.
Ausencia de oxgeno favorece el crecimiento de bacteria que pueden digerir las paredes de las clulas de plantas (celulosa) para producir azucares sencillos (glucosa). Las bacterias pueden utilizar NH 3 o urea como fuentes de N. Sin la conversin bacteriana, el amonaco y la urea seran intiles para los rumiantes.
Sin embargo, las protenas bacterianas producidas en el rumen son digeridas en el intestino delgado y constituyen la fuente principal de aminocidos para el animal. La mayor parte de los AGV del lquido ruminal se absobe all, el resto se absorbe en omaso, para posteriormente incorporarse a la circulacin general pasando por la vena porta. Cambios en la dieta pueden modificar el patrn de fermentacin. Cuando la dieta del animal est basada en forrajes, la proporcin molar en que se encuentran los AGV es: 25% 65% 10% Mientras que si la dieta es alta en granos o concentrados la proporcin ser de: En el hgado el propionato y el acetato son incorporados al metabolismo energtico, el cido propinico es el nico de los AGV que el hepatocito puede transformar en glucosa, en la va de la gluconeognesis . Las molculas de glucosa sintetizadas en este proceso, sern exportadas hacia los tejidos extrahepticos, quienes sern los encargados de utilizarla como la primera fuente de energa altamente disponible para sostener las necesidades fisiolgicas de mantenimiento y reproduccin. 40% 15% 45% Esquema de la regulacin del pH RACIN RICA EN FIBRA BRUTA (60% forrajes groseros y mucha celulosa)
LARGO TIEMPO DE RUMIA (45-70`/Kg de MS)
ALTA PRODUCC. DE SALIVA (Aprox. 12-14 L/Kg MS)
ALTO pH EN RUMEN (pH 5- 6,8 c/alta prod. de c actico)
pH FAVORABLE A LA DIGESTIN DE LA CELULOSA RACIN RICA EN CONCENTRADOS (35-60% forrajes groseros y mucho almidn)
CORTO TIEMPO DE RUMIA (35-45`/Kg de MS)
BAJA PRODUCC. DE SALIVA (Aprox. 10-12 L/Kg MS)
BAJO pH EN RUMEN (pH 5,4- 6,0 c/alta prod. de c propinico)
pH FAVORABLE A LA DIGESTIN DEL ALMIDN CONCEN- TRACIN Y VELOC DE ABSOR. DE AG RELATIV` BAJAS CONCEN- TRACIN Y VELOC DE ABSOR. DE AG RELATIV` ALTAS 35% DE FORRAGES GROSEROS ES EL LMITE INFERIOR BAJO EL CUAL CESA LA CAPACIDAD DE REGULACIN, COMIENZA LA FERMENTACIN LCTICA Y CAE EL % GRASO DE LA LECHE. FORRAJES GROSEROS = HENO, ENSILAJE PREMARCHITO (40% DE MS; ENSILAJE HMEDO) - 2-4 Kg DE HENO O PAJA. Incorporacin Y Aprovechamiento DE AMINOCIDOS Absorcin de AA Aproximadamente 60% derivados de protena bacteriana, y 40% de protena no degradada en el rumen.
Contribucin en % de los AA a la gluconeognesis en ovinos adultos (% del flujo de AA): Asp 30 Gli 7 Ala 25 Met <1 Glu 16 Treo 3 Ser 7 Ile <1 MOLECULAS DE ALIMENTO MOLECULAS SENCILLAS VIAS ANFIBOLICAS VIAS CATABOLICAS VIAS ANABOLICAS PROTENAS CARBOHIDRATOS LPIDOS ACS. NUCLEICOS, ETC CO2 + H2O O2 2H P Otros procesos endergnicos Digestin Absorcin La transformacin de cido pirvico en el proceso glucoltico de la manera siguiente: