Reactores con biocatalizador

inmovilizado

CURSO: BIOQUIMICA
ALUMNO: PABLO LAURA CCASO
CODIGO: 2010-35566
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA
Reactores con biocatalizador
inmovilizado


Estos biorreactores son reactores heterogneos de fase slida y fluida, donde el
biocatalizador se encuentra o adherido a la superficie de un soporte o lecho, o
confinado en un espacio determinado. El biocatalizador puede ser la enzima, la
clula entera o algn organelo de sta.
Las principales ventajas de inmovilizar el biocatalizador son: reduccin en los
costos de separacin, mayor concentracin de clulas o enzimas, minimiza el
problema de lavado del biocatalizador a alta dilucin y por lo anterior, mayor
productividad volumtrica.
Existen varias tcnicas de inmovilizacin: atrapamiento en gel, adsorcin fsica,
aglomeracin celular, por formacin de enlaces covalentes entre la enzima y el
soporte (slido inerte), etc.
Dependiendo de la tcnica utilizada y del tipo de soporte, si es poroso o no,
puede resultar predominante el fenmeno fsico a la cintica intrnseca de la
reaccin bioqumica. Esto define el grado de complejidad del modelo. Igual que
toda reaccin cataltica heterognea, para que sta suceda es necesario una
serie de etapas: difusin del substrato desde el seno del lquido hasta la capa
lmite que rodea la superficie del soporte; difusin a travs de la interfase o
capa lmite; difusin intrapartcula a travs del slido poroso; reaccin y salida
de productos siguiendo la misma ruta. El proceso de transformacin
bioqumica depende del contacto entre el biocatalizador, el substrato y el
oxgeno, este ltimo si el proceso es aerbico.
Figura 1. Partcula biocataltica. La profundidad activa es la distancia mxima a la cual el substrato penetra
dentro de la pelcula microbial.
Usos industriales de algunas enzimas y clulas inmovilizadas.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LAS ENZIMAS
INMOVILIZADAS
Biorreactor combinado:
CSTR - Hollow Fiber
Los biorreactores de fibras huecas son especialmente tiles en
los procesos que involucran enzimas puesto que permiten la
recuperacin del biocatalizador durante el transcurso de la
reaccin. Usualmente, en los reactores enzimticos de
membrana el medio reaccionante va por el lmen y el substrato
y/o el producto de la reaccin atraviesan la membrana hacia el
nulo del biorreactor
Esquema de un biorreactor enzimtico de membrana
Los reactores enzimticos de membrana se clasifican en dos grupos: los
que se utilizan para procesar substratos de bajo peso molecular, en cuyo
caso tanto el substrato como el producto son permeables, y los que se
emplean para convertir substratos de alto peso molecular, en donde el
substrato es impermeable y el producto de la hidrlisis es permeable. En
uno y otro caso la enzima es impermeable. Una de las configuraciones de
reactores de membrana ms empleadas es la del reactor de fibra hueca
con membrana de ultrafiltracin. Las principales desventajas de este tipo
de reactor tienen que ver con el taponamiento y ensuciamiento de los
poros de la membrana, lo cual tiene los siguientes efectos:

Disminucin de la velocidad de produccin. La velocidad de produccin
est relacionada directamente con el flux msico de permeado a travs
de la membrana. Prdida de la actividad enzimtica. Las enzimas
pueden adherirse a los poros de la membrana disminuyendo la actividad
enzimtica en el caldo reaccionante. Disminucin de la conversin de
substrato a producto. Al taponarse la membrana se alcanzan
concentraciones inhibitorias de producto en el sistema reaccionante que
disminuyen la velocidad de conversin.

La principal ventaja radica en la obtencin de un producto puro libre de
enzimas. Se utiliza en procesos como la hidrlisis de protenas

Una alternativa para disminuir la concentracin de substrato efluente de este tipo de
biorreactores, aumentando la conversin, es recircular el biocatalizador a travs de un
sistema que integra al mdulo de fibra hueca con membrana de ultrafiltracin un
biorreactor CSTR (CSTR-HF). En la Figura se presenta un esquema de este tipo de sistema.

Sistema CSTR - Biorreactor de Fibras Huecas con membrana de ultrafiltracin (CSTR-HF)
Consiste de un reactor continuo de tanque agitado conectado
al mdulo de fibra hueca con membrana de ultrafiltacin a
travs de una bomba de baja presin. Para comenzar la
operacin, el CSTR es llenado con el substrato hasta un
volumen determinado. Despus de ajustar el pH y la
temperatura la enzima es adicionada al reactor. La bomba se
prende y la mezcla reaccionante es bombeada al lumen del
mdulo de fibra hueca. All las molculas de producto y/o
substrato lo suficientemente pequeas para pasar a travs de
la membrana de ultrafiltracin, son removidas como
permeado. Las partculas de soluto rechazadas por la
membrana son recirculadas junto con las enzimas al tanque de
reaccin. El volumen de ste ltimo se mantiene constante
controlando la rapidez de alimentacin y el flujo de permeado
por medio de una serie de vlvulas y flujmetros en lnea
Modelo matemtico. Biorreactores CSTR - HF
Deeslie y Cheryan proponen un modelo para la hidrlisis de protenas de
alto peso molecular (en este caso el substrato sera impermeable) en el
sistema CSTR-biorreactor de fibra hueca con membrana de ultrafiltracin
(CSTR-HF). Las siguientes son las suposiciones hechas para establecer las
ecuaciones del modelo:
La reaccin involucra la conversin irreversible de substrato a producto,
sin inhibicin
La reaccin es cinticamente controlada
El sistema en su totalidad se comporta como un CSTR con mezcla ideal
Las limitaciones de transferencia de masa y la adsorcin de enzima en la
membrana son despreciables
Cintica de Michaelis - Menten para una reaccin con un solo substrato
limitativo y sin inhibicin.
La secuencia terica de las reacciones que ocurren en el tanque de
fermentacin est representada en la Figura siuiente


Representacin esquemtica de la secuencia de reacciones en el sistema CSTR- reactor de fibra hueca con membrana
de ultrafiltracin


El substrato alimentado al tanque de reaccin con una concentracin So, est compuesto de
dos fracciones proteinceas: una fraccin soluble, Po, y una insoluble, So'. Tambin puede
contener una porcin de substrato no hidrolizable, SI, que generalmente es despreciable.
Dentro del reactor (CSTR-HF), la fraccin hidrolizable del substrato, So', reacciona con la
enzima E, produciendo el producto P'. En el sistema habr en todo momento substrato sin
convertir, S, con una concentracin que depender de la actividad de la enzima y del tamao
de poro de la membrana de ultrafiltracin. Se asume mezcla perfecta, por lo cual la
concentracin de substrato en el interior del reactor (CSTR-HF) es la misma que en la salida y la
velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin de substrato. El producto P del
reactor, el cual permea la membrana, est compuesto por la fraccin soluble del substrato
inicial, Po, y la fraccin convertida durante la reaccin, P'. Los componentes restantes de la
mezcla reaccionante, S, SI y E, son recirculados al tanque de reaccin junto con algunas
molculas de producto que no atraviesan la membrana, debido al equilibrio entre las fases en
el proceso de ultrafiltracin.
Teniendo en cuenta todas las anteriores consideraciones las
ecuaciones que conforman el modelo matemtico que describe el
sistema son:
El balance de masa para el sistema es:

Ecuacin 4.164
Con:
Ecuacin 4.165
Ecuacin 4.166
Donde:
J: velocidad de flujo del alimento (ml/min)
V: volumen del reactor (ml)
P': producto producido en la reaccin (mg/ml)
S: concentracin de substrato (mg/ml)
E: concentracin de enzima (mg/ml)
r: velocidad de reaccin
V
mx
: velocidad mxima de reaccin (mg/ml
min)
K
M
: constante de Michaelis (mg/ml)
k
2
: constante de velocidad (min
-1
)
La conversin fraccional X de substrato a
producto puede ser escrita as
Ecuacin 4.167
Por definicin:
Ecuacin 4.168
Ecuacin 4.169
Donde:
X: conversin fraccional
P': producto producido en la reaccin (mg/ml)
So': fraccin insoluble del substrato inicial
(mg/ml)
So: concentracin del substrato inicial
(mg/ml)
Po: fraccin soluble del substrato inicial
(mg/ml)
Despejando P' de la Ecuacin 4.167 y
reemplazndolo en la Ecuacin 4.164, resulta:
Ecuacin 4.170
Reemplazando la Ecuacin 4.168 en la
Ecuacin 4.170 y desarrollando se obtiene:
Ecuacin 4.171
Ecuacin 4.172
Donde es el tiempo de residencia en (min).
Dividiendo la Ecuacin 4.171 en So':
Ecuacin 4.174
Ecuacin 4.173
Donde:
t : tiempo de residencia modificado (min)
Ejemplo 7: Hidrlisis de protenas de alto peso
molecular en un biorreactor CSTR-HF

Los sistemas CSTR - HF han ganando importancia en la
hidrlisis de protenas de alto peso molecular. A continuacin
se presentar el caso de la hidrlisis de una protena aislada de
la soya mediante la enzima Pronasa, una mezcla de exo y
endo-peptidasas de Streptomyces griceus, en este tipo de
sistemas. Con el fin de describir la influencia de las cuatro
variables operacionales del modelo de Deeslie y Cheryan
(concentracin de enzima, concentracin de substrato
hidrolizable, volumen de reaccin y velocidad de flujo) sobre el
funcionamiento del reactor, se calcularon las conversiones
para varios tiempos de residencia, , para cuatro valores de la
concentracin de enzima, E
El clculo requiri de los siguientes pasos:
1. Definicin de las constantes cinticas y de los parmetros de operacin.
Los valores de los parmetros cinticos utilizados en el clculo se presentan en la
Tabla 1. El usuario puede modificar cualquiera de estos valores.
Tabla 1. Valor de las constantes cinticas
* Para convertir a mg multiplquese por 6.25
Para iniciar el clculo se definieron, adems de los parmetros cinticos, los
siguientes datos de entrada: concentracin de substrato hidrolizable, So ', flujo de
alimento, J, y volumen del reactor, V. Los valores utilizados se presentan en la
Tabla 2. El usuario puede modificar cualquiera de estos valores
Tabla 2. Datos de entrada
Los valores de la velocidad mxima de reaccin, Vmx, el tiempo de residencia, q, y
el tiempo de residencia modificado, t, se calculan a partir de los parmetros
anteriormente definidos, mediante las ecuaciones 4.166, 4.172 y 4.174,
respectivamente.

2. Clculo de los valores de conversin para varios tiempos de residencia, para
cuatro concentraciones de enzima, E.

Con el fin de calcular la variacin de la conversin con el tiempo de residencia,
q, se dividi el tiempo de residencia calculado mediante la Ecuacin 4.172 en 50
( = q/50) , de tal forma que

= + . Se calcul la conversin para cada

tiempo de residencia,

y para cuatro valores distintos de la concentracin de

enzima, E.
Ecuacin 4.175
Esta ecuacin resulta de despejar la conversin fraccional, X, de la Ecuacin
4.173.