ANTIBIOGRAMA

QU ES UN ANTIBIOGRAMA?
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la
susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de
antibiticos Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de
microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los
microorganismos responsables de las infecciones. Cuando hacemos un cultivo
de orina, sangre, heces, piel o de cualquier otra parte de nuestro organismo ,
lo que intentamos conocer es que microorganismo es el causante de la
infeccin o enfermedad que estemos pasando. Una vez hemos logrado
aislarlo, diagnosticarlo y cultivarlo, procederemos a averiguar cual es el
tratamiento adecuado.
Por qu realizar un antibiograma?:
El primer objetivo es medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se
sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En
efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia
in vivo de un tratamiento antibitico. El segundo objetivo es el de seguir la
evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento
epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una
regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica,
revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse
ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de
prevencin en los hospitales.
Para que sirve un antibiograma?:
El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones
teraputicas individuales.


Cundo realizar un
antibiograma?:
Siempre que una toma bacteriolgica de finalidad dagnstica
haya permitido el aislamiento de una bacteria considerada
responsable de la infeccin.


INTERPRETACIN DE UN
ANTIBIOGRAMA
ANTIBIOGRAMA Certos mecanismos de resistencia se expresan
dbilmente in vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano. Su
expresin en el organsmo , en donde las condicones en cuanto a
medios son diferentes, expondra al riesgo de fracaso teraputico.
Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera
global a fin de descubrir, a travs de la comparacin de las
respuestas para cada antibitico, un mecanismo de resistencia
incluso dbilmente expresado.
Sensibilidad bacteriana a los
antibiticos
La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM) es
la base de la medida de la sensiblidad de una bacteria a un
determinado antibitico. La CIM se define como la menor
concentracin de una gama de diluciones de antibitico que
provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible.
Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies
bacterianas.
Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o
calcular de rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos
manuales y mtodos automatizados o semiautomatizados). Estos
diferentes mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa
bacteriana en funcin de su sensibilidad frente al antibitico
probado
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la NCCLS:
Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de
un tratamiento a la doss habitual.
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No
es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir
efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o
aumento de la posologa).
Ciertas molculas son representativas de un grupo de antibiticos. Los
resultados (S, I, R) obtenidos con estas molculas pueden ser ampliados a los
antibiticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo:
Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinas de
1 generacin que no es necesario probar, ya que el resultado puede
deducirse del obtenido en la cefalotina).
Este hecho permite ensayar un nmero reducido de antibiticos, sin limitar por
ello las posibilidades teraputicas.


RESISTENCIA BACTERIANA:

Cada antibitico se caracteriza por un espectro natural de
actividad antibacteriana. Este espectro comprende las especies
bacterianas que, en su estado natural, sufren una inhibicin de su
crecimiento por concentraciones de su antibitico susceptibles de
ser alcanzadas in vivo. A estas especies bacterianas se les dice
naturalmente sensibles a dicho antibitico.
El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias
resistentes eliminando las sensibles. Es lo que se conoce con el
nombre de presin de seleccin. El aumento de la frecuencia de
las cepas resistentes va unido cas siempre al uso intensivo del
antibitico en cuestin.
Una resistencia cruzada es cuando se debe a un mismo
mecanismo de resistencia. En general, afecta a varios antibiticos
dentro de una misma familia (Ejemplo: La resistencia a la oxacilina
en los estafilococos se cruza con todas los -lactmicos). En ciertos
casos, puede afectar a antibiticos de familias diferentes (Ejemplo:
La resistencia por impermeabilidad a las ciclinas se cruza con la
resistencia al coloranfenicol y al trimetoprima).
Un resistencia asociada es cuando afecta a varios antibiticos de
familias dferentes. En general, se debe a la. asociacin de varios
mecanismos de resistencia (Ejemplo: La resistencia de los
estafiolococos a la oxacilina va frecuentemente asociada a las
quinolonas, aminoglicsidos, macrolidos y ciclinas).

Con el fin de tener en cuenta la evolucin de las resistencias
adquiridas y, por consiguiente, proporcionar a los mdicos datos
tiles cuando deben proceder a la eleccin emprica de una
antibioterapia, la nocin de espectro clnico completa la de
espectro natural. Definido para cada antibitico, este espectro
clnico se incluye en el Resumen de las Caractersticas del Producto
(RCP). Este espectro integra no solamente datos bacteriolgicos
(espectro natural, frecuenca de las resistencias adquiridas), sino
tambin datos farmacocinticos y clnicos (las especies descritras
en el espectro son aquellas para las que se ha demostrado la
actividad clnica del producto). El espectro clnico se revisa
regularmente para tener en cuenta la evolucin de las resistencias
adquiridas.
Mecanismos de la resistencia
adquirida
El mecanismo gentico de adquisicin de una resistencia puede
ser:
- La mutacin de un gen implicado en el modo de accin de un
antibitico: Este mecanismo afecta preferentemente a ciertos
antibiticos: quinolonas, rifampicina, cido fusdico, fosfomicina,
antituberculosos y a veces cefalosporinas (Ejemplo: La resistencia a
las quinolonas por modificacin del ADN grasa en las
enterobacterias).
- La adquisicin de genes de resistencia transferidos a partir de una
cepa perteneciente a una especie idntica o diferente: Ciertos
Antibiticos estn particularmente afectados por este mecanismo:
-lactmicos, aminoglicsidos, tetraciclinas; cloranfenicol,
sulfamidas (Ejemplo: Resistencia a la ampicilina E. coli y del Proteus
mirabilis).

El mecanismo bioqumico de la resistencia puede ser:
- una produccin por la bacteria de enzimas que inactivan el
antibitico. Ejemplo: Penicilinasa de los estafilococos, lactamasa
de amplio espectro (BLAE) de las enterobacterias.
- una modificacin del blanco del antibitico. Ejemplo:
Modificacin de las Protenas de Enlace con la Penicilina (PBP) de
los estafilicocos resistentes a la oxacilina (llamados estafilococos
"Meti-R"). Neumococos resistentes a la penicilina.
- una impermeabilidad de la pared bacteriana por modificacin o
por disminucion cuantitativa de las porinas. Ejemplo: Pseudomonas
aeruginosa resistente a la imipenem.
- un mecanismo de efusin: expulsin de la molcula por un
transporte activo. Ejemplo: Estafilococos resistentes a las
tetraciclinas.

Pruebas de sensibilidad bacteriana
in vitro
En la poca posterior al descubrimiento de las sulfonamidas y de la
penicilina rara vez se probaba la sensibilidad de los
microorganismos a las drogas. Los pacientes eran tratados en forma
emprica y los microorganismos generalmente eran sensibles. Slo
tras el surgimiento de las cepas resistentes, poco despus de la
introduccin de estos agentes, los microbilogos comenzaron a
probar la sensibilidad de un microorganismo infectante frente a los
agentes antimicrobianos.
En un primer momento, el mtodo estndar utilizado para las
pruebas in vitro fue el de dilucin en caldo, que proporcionaba un
resultado cuantitativo de la concentracin de agente
antimicrobiano necesaria para inhibir el desarrollo de un organismo
dado.

los mtodos de dilucin en caldo
En, base de casi todos los mtodos utilizados en la actualidad,
se colocan concentraciones decrecientes del agente
antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en tubos con un
caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del
microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas
pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los
cationes magnesio y calcio.
Los agentes antimicrobianos se preparan en "soluciones
madre" concentradas y luego se diluyen en caldo hasta
obtener las concentraciones apropiadas.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control
negativo de crecimiento. Luego de la incubacin adecuada
(usualmente de un da para el otro) se observa la turbidez de
los tubos que indicar desarrollo bacteriano. El
microorganismo crecer en el tubo control y en todos los otros
que no contengan suficiente agente antimicrobiano como
para inhibir su desarrollo. La concentracin de antibitico que
presente ausencia de crecimiento, detectada por falta de
turbidez (igualando al control negativo), se designa como la
Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) (ver esquema
ampliado).
Para medir la capacidad de un antimicrobiano para matar a
un microorganismo (CMB) se debe realizar la prueba de
actividad bactericida, que emplea el mismo sistema de
dilucin en caldo que para medir la sensibilidad.

MTODO DE DIFUSIN EN AGAR
Una vez demostradas las grandes ventajas de las tcnicas de
dilucin en caldo, el paso siguiente, pensando sobre todo en poder
realizar fcilmente pruebas de sensibilidad de un microorganismo
frente a mltiples antibiticos a la vez, consisti en buscar la
manera de aplicar la idea directamente a las placas de agar
Mtodo de E-test
Mtodo de E-test Es uno de los mtodos ms recientes que se han
presentado en el mercado y resulta de una curiosa combinacin
de caractersticas de los mtodos anteriores. Se trata de una
tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura
directa de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas
impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico
indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
MTODOS AUTOMATIZADOS
La mayora de estos novedosos mtodos utilizan sistemas de
microdilucin en medio lquido sobre microplacas con pocillos en
"U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos
por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o
fluorescencia) o, en el caso de los sistemas ms sencillos, por simple
lectura ptica del tcnico a travs de un visor invertido de espejo.