RNA de interferncia

O que ?

uma fita que se liga ao mRNA de um gene interrompendo
indiretamente a sntese protica;

Mediado por pequenos RNAs de fita dupla;

Silenciamento por inibio da traduo e/ou degradao do RNAm;
RNA de interferncia
Descrito pela primeira vez em petnias;

Plantas transgnicas, super expressando genes para produo de
pigmentos;

Apresentavam flores brancas devido inibio da sntese do pigmento
por silenciamento do transgene e do gene endgeno;

cossupresso;

Em 1998, o mecanismo de interferncia comeou a ser elucidado.
RNA de inteferncia
Importncia:

- Mecanismo de defesa do organismo (antiviral);

- Silenciamento ps-transcricional de genes;

- Permite estudar a funo de genes especficos.

RNA de interferncia
Caractersticas:

- Presente em muitos organismos;

- Atua como mecanismo de defesa endgeno em nematoides, plantas e
fungos;

- Os dsRNAs envolvidos neste processo, podem ser classificados em
trs principais:

miRNAs
siRNAs
shRNAs
miRNAs (microRNAS)
Pequenos dsRNAs endgenos;

Silenciadores ps-transcricionais,
inibindo a traduo do RNAm-alvo
em protena;

Sua descoberta: Caenorhabditis
elegans;

Conhecidos como reguladores
fundamentais da expresso gnica
em plantas e animais.

miRNAs (microRNAS)
Os genes que codificam miRNAs so transcritos pela RNA polimerase II;

Formam o pri-miRNA (longo microRNA primrio);

clivado por um complexo proteico: RNAse III (Drosha) e protena Pasha;

A clivagem resulta no microRNA precursor (pr-miRNA);


Contendo cap 5 e cauda poli(A)
O pr-miRNA exportado para o citoplasma (exportina-5);

clivado pela Dicer gerando um miRNA maduro;

A Dicer envolvida na incorporao de uma das fitas do miRNA a um
complexo denominado RISC;







.


miRNAs (microRNAS)
O complexo RISC permite o pareamento entre a fita do miRNA
incorporado e a regio homloga do RNAm-alvo por
complementaridade de bases.

Complementaridade total ocorre degradao do RNAm;

Complementaridade parcial ocorre represso da traduo e posterior
degradao do RNAm.


miRNAs (microRNAS)
siRNA (short interfering RNAs)
So molculas sintticas de dupla fita de RNA;

Atuam por meio de pareamento a sequncias complementares ao
RNA mensageiro alvo;

Causando sua degradao: silenciamento especfico do gene;

Silenciamento do gene-alvo possibilita a obteno de informaes sobre
a funo exercida na clula pela protena que esse gene codifica;
siRNA (short
interfering RNAs)
As protenas argonautas so tambm responsveis
pela seleo da fita do siRNA que ser incorporada
ao RISC.
Pareamento a sequncias complementares ao
RNA mensageiro alvo
Silenciamento especfico do gene
Existem trs atributos importantes para se projetar e selecionar um
siRNA:

- Potncia;
- Especificidade;
- Estabilidade s nucleases;

Um dos fatores crticos para o sucesso da tcnica de RNAi a
capacidade do siRNA em silenciar especificamente o RNAm-alvo;

Tambm podem reconhecer e interferir com a expresso de RNAs
mensageiros que apresentam homologia parcial com o RNAm-
alvo.
siRNA (short
interfering RNAs)
shRNAs (short hairpin RNAs)
So RNAs de dupla fita;

Construdos para apresentar uma estrutura semelhante aos miRNAs;

Podem ser introduzidos prontos na clula ou transcritos dentro da
clula;

O transcrito processado pela Dicer da mesma forma que os
miRNAs.
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