Universidad Nacional Jos Faustino

SNCHEZ CARRIN
Facultad de Medicina Humana
Seminario de Biologa
ELECTROFORESIS
GENERALIDADES
Y
APLICACIONES CLINICAS
Dr: HUGO SEGAMI SALAZAR

Alumnos: - Paredes Romero, Freddy
- Paucar Pearanda, xanny
Mtodo de laboratorio en que tiene por finalidad separar
biomolculas segn su tamao y carga elctrica utilizando
corriente elctrica a travs de una matriz gelatinosa.









ELECTROFORESIS
Fue empleado por primera vez en
el ao de 1937, pero su importancia
vino a incrementarse en los aos
cincuenta con E. Durrum y Arne
Tiselius , impulsando la electroforesis
de zona
Arne Tiselius
1937
(Nobel 1948)
- +
muestra
muestra
+
fuente de
alimentacin
fuente de
alimentacin
cable
cable
-
tampn
tampn
cubeta
cubeta
gel
gel
electrodo
electrodo
ctodo
nodo
electrodo
ctodo
nodo
(E. horizontal)
(E. vertical)
Fundamentos de Electroforesis
Su carga neta.
Peso molecular
Estructura tridimensional

PROTEINAS
Molc. (+) polo (-) o ctodo
Molc. (-) polo (+) o nodo
ctodo
nodo
GENERALIDADES:

El movimiento de las molculas depende de dos fuerzas
adicionales:

1- Friccin del solvente Dificultar este movimiento
2- Las molculas tienden a moverse en forma
aleatoria( movimiento browniano)

------- la E.C de las molculas T, por ello a T mayor
difusin.











La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas
no migren de una manera homognea, de tal manera que si
la molculas son colocadas en un cierto lugar de la solucin,
los iones comenzarn a moverse formando un frente cuya
anchura aumentar con el tiempo.


GENERALIDADES:
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el
movimiento de las molculas empleando un medio que
oponga ms resistencia a dicho movimiento. Una forma
comn de hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un
polmero soluble de muy alto peso molecular y neutro que
atrapa molculas de agua y forma un tamiz molecular que
dificulta el movimiento de los solutos.









GENERALIDADES:
Consecuentemente, la velocidad de migracin
electrofortica
V = q E / f

(q) carga efectiva
(E) gradiente de potencial elctrico
(f) coeficiente de friccin


Por lo tanto, la friccin que se observa durante el
movimiento electrofortico en un gel depende de la
masa y la forma de la molcula, en adicin a su carga
elctrica.
GENERALIDADES:
soporte electrofortico
Gel poroso
Restringe el movimiento de las molculas
Disminuyen los flujos de conveccin del solvente.
Material inerte
Tipos de Soporte
Papel (celulosa)
Acetato de Celulosa
Almidn

Poliacrilamida


Agarosa

Electroforesis de Protenas
( separacin solo por carga)
Electroforesis de Protenas
( separacin por carga y tamao)
Electroforesis de DNA/RNA
( separacin por tamao)
CONCLUSIN:

Alta sensibilidad, poder resolucin y versatilidad.

Sirve como mtodo de separacin de
cidos nucleicos
Protenas u
Otras biomolculas

Entrega criterio de pureza.

Separa mezclas complejas

Permite determinar

El peso molecular de una protena
Punto isoelctrico.
Nmero de cadenas polipeptdicas de una protena
ELECTROFORESIS DE PROTENAS

En clnica
Las protenas sricas estn separadas aproximadamente en albminas y
globulinas ( globulina, globulina y globulina).

La electroforesis de protenas es llevada a cabo generalmente en un gel
de poliacrilamida



--Polmero : acrilamida + bis acrilamida

-Alta resolucin

---El tamao del poro, vara de manera uniforme con la
concentracin del gel.

- De preparacin rpida, pero trabajosa

- Reproducible
ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL


Separa protenas de masa molecular idntica que
difieren en el pI o protenas con valores similares pero
con diferentes masas moleculares.

Separacin por:
1 dimensin: ISOELECTROENFOQUE separa por pI

2 dimensin: SDS-PAGE separa por PM
En gel de poliacrilamida con Dodecil Sulfato Sdico (SDS)

O

Na
+

-
O S O (CH
2
)
11
CH
3
O dodecil sulfato sdico

O
El SDS se une a la mayora de protenas en cantidad aprox. Proporcional a su M
El SDS ligado incorpora una gran carga neta negativa.
La conformacin nativa de la protena se altera por la fijacin del SDS
Po tanto va separar en funcin de su M.












Despus de la electroforesis se puede visualizar las protenas tratando el gel con
un colorante como el Azul de Coomassie (que se fija a las protenas pero no al gel)

Cada banda representa una protena diferente.



La protena purificada contiene cuatro subunidades como se ve en ltimo carril.
Marcadores de peso
molecular:

* Mezcla de diferentes
protenas pre-teidas de las
que conocemos el peso
molecular.
Enfoque isoelctrico

Se basa en el desplazamiento de las molculas anfotricas en un medio de
pH con respecto a su pI.






nodo


pI es el valor de pH en el que la carga de la protena = 0
si pH > pI: carga ()
si pH < pI: carga (+)
Protenas migran hasta
la zona del gel donde
pH=pI de la protena
Prot A pI=6
Prot B pI=7
+ +
pH 2
(cido)
+
-
pH 10
(bsico)
G
R
A
D
I
E
N
T
E

D
E

p
H

A B
0
+
+
-
A B
0
0
+
-
pH 6
pH 7
A
B
ctodo
Recordar: La carga neta de una protena
es cero cuando pH = pI
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
Polisacrido
extrado de algas marinas
Usado de 0.5 2%
Geles fciles de
Preparar

No es txico

Amplio rango de
Separacin

Baja resolucin
Usado tpicamente para
ADN
Soporte Inerte
Se lee en un fotodensmetro
Dibuja un trazado de absorbancia
Se obtiene una curva
El proteinograma
Permite orientacin rpida y clnicamente significativas
ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA
IMPORTANTE SIGNIFICADO CLNICO
Equine: Chronic
Hepatitis
Equine: Inmunodeficiency
+ Pneumonia
Feline: Feline
Infectious Perionitis
Feline: Lymphosarcoma
Canine: Leishmaniosis
Canine: Leishmaniosis
Feline: Lymphosarcoma
Aplicaciones
EN EL SUERO
EN LA ORINA
EN EL LQUIDO
CEFALORAQUIDEO
Electroforesis de protenas
en el Suero

Es un examen que mide aproximadamente
los tipos y concentraciones de las protenas en
la parte lquida (suero) de una muestra de
sangre.
Forma en que se realiza el examen
La sangre se extrae de una vena, usualmente del
pliegue interno del codo o del dorso de la mano,
aplicando un torniquete y luego desinfectando el
rea. Se introduce la aguja en la vena y se extrae
la sangre hacia el interior del frasco para
analizarla.
El suero sanguneo se coloca en un papel
especialmente tratado y luego se expone a una
corriente elctrica.
Las diversas protenas migran o se mueven
en el papel con el fin de formar bandas que
indican la proporcin relativa de cada
fraccin de protena.
Preparacin para el examen
El mdico le puede solicitar que deje de tomar
medicamentos que pudieran afectar el examen.
No se suspenda ningn medicamento sin
consultarlo previamente.

Los medicamentos que pueden afectar la
medicin de las protenas totales incluyen,
corticoesteroides, neomicina, fenacemida,
salicilatos, sulfamidas y tolbutamida.
Importancia del examen
La determinacin de las protenas del suero,
separadas dentro de un campo elctrico por la
influencia ejercida por los electrodos clsicos,
nodo y ctodo, permite al investigador, por
comparacin de sus valores normales con los
encontrados en una enfermedad, conocer y
precisar mejor numerosos cuadros patolgicos.
Valores normales
Protena total: 6.4 a 8.3 g/dL
Albmina: 3.5 a 5.0 g/dL
Alfa-1 globulina: 0.1 a 0.3 g/dL
Alfa-2 globulina: 0.6 a 1.0 g/dL
Beta globulina: 0.7 a 1.2 g/dL
Gammaglobulina: 0.7 a 1.6 g/dL

Significado de valores anormales
La disminucin de la protena total puede indicar:

- Desnutricin
- Sndrome nefrtico
- Enteropata por prdida de protenas gastrointestinal
-La desnutricin: Es un estado patolgico
provocado por la falta de ingesta o absorcin de
alimentos, tambin se puede dar por estados de
exceso de gasto metablico.
Enfermedades diagnosticadas
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
Valor normal 2.8 3.5 g/dL
desnutricin leve
2.1 2.7 g/dL
desnutricin
moderada
Menor de 2.1g/dL
desnutricin grave
Valores indicadores de desnutricin
La albmina es uno de sus indicadores.
Sntomas: Los sntomas generales son la fatiga,
mareo y prdida de peso.

Pruebas y exmenes: Valoraciones nutricionales y el
anlisis de sangre.

Tratamiento: Reposicin de los nutrientes que faltan.

Complicaciones: Sin tratamiento la desnutricin
puede ocasionar discapacidad mental y fsica, y
posiblemente la muerte.

Prevencin: Ingerir una dieta balanceada y de buena
calidad.
Caractersticas de la desnutricin
Desnutricin y mortalidad
infantil
La desnutricin continua siendo un problema significativo en todo
el mundo, sobre todo entre los nios.
-El sndrome nefrtico: Es un trastorno renal
causado por un conjunto de enfermedades,
caracterizado por aumento en la permeabilidad de la
pared capilar de los glomrulos renales que conlleva
a la presencia de niveles altos de protena en la orina.
Enfermedades diagnosticadas
- La enteropata por prdida de protena:
Es la prdida anormal de protena desde el tubo
digestivo o la incapacidad de ste para absorber
las protenas.
Enfermedades diagnosticadas
Electroforesis de protenas
en la Orina

Tambin llamado electroforesis de protena
urinaria; UPEP. Es un examen que da un
estimativo de cuanta cantidad de ciertas
protenas tiene uno en la orina.

Forma en que se realiza el examen
Se necesita una "muestra de orina limpia.
A medida que comience a orinar, permita que
una pequea cantidad de orina caiga a la taza
del bao, lo cual limpia la uretra de
contaminantes. Luego, en un recipiente limpio,
recoja aproximadamente de 30 a 60 ml (una o
dos onzas) de orina y retire el recipiente del
chorro. Entrguele el recipiente al mdico o a
su asistente.

El especialista del laboratorio colocar la
muestra de orina en un papel especial y
aplicar una corriente elctrica.
Las diversas protenas se mueven y
forman bandas visibles que revelan las
cantidades generales de cada protena.

Preparacin para el examen
Se aconseja recoger la muestra de la primera
miccin de la maana, ya que sta es la ms
concentrada.
Importancia del examen
La electroforesis de protena en orina se
puede recomendar para ayudar a determinar
la causa de la presencia de protenas en la
orina o como una prueba de deteccin para
medir las diversas protenas presentes all.
Valores normales
Ninguna cantidad significativa de globulinas
en la orina. La albmina urinaria es de menos
de 50 mg/dL.
Significado de valores anormales
- Inflamacin aguda
- Amiloidosis
- Disminucin de la funcin renal
- Nefropata diabtica
- Insuficiencia renal
- Mieloma mltiple
- Sndrome nefrtico
- Infeccin urinaria aguda
Amiloidosis es un trmino genrico, utilizado
para hacer referencia a un grupo de
enfermedades de etiologa diversa y pronstico y
tratamiento variables, con una caracterstica
comn: todas ellas estn causadas por el
depsito extracelular de un material, denominado
material amiloide. Este material, de naturaleza
proteica, insoluble y resistente a la protelisis,
fue bautizado por Virchow debido a su afinidad
por colorantes yodados, similar a la del almidn.
Enfermedades diagnosticadas
Amiloidosis en las manos
Amiloidosis en el rostro
Electroforesis de protenas
en el Lquido Cefalorraqudeo

El fraccionamiento de las protenas del
LCR constituye una herramienta bsica para
el diagnstico y seguimiento de algunas
enfermedades neurolgicas, para lo cual es
imprescindible tener informacin acerca de
los patrones normales.
Forma en que se realiza el examen
Se requiere muestra por puncin lumbar, la
ms comn y tambin se puede obtener por
puncin ventricular o cisternal.

Valores normales
Se encuentra una prealbumina en concentracin
del 2.3 a 6.9 % de la totalidad.De 5.2 a 8.7 % de
albumina. De Alfa1, 3.7 a 8.1 %. Alfa2 de 4.2 a 8.8
%.Beta de 7.3 a 14.5 % y Gamma de 3.0 a 9.0 %.
Significado de valores normales
En la esclerosis mltiple el 90 % presenta bandas
oligoclonales de IgG y pueden establecer un
pronstico, pues la esclerosis se disemina ms a
menudo en los pacientes que tienen bandas muy
definidas.
Resultados y concluciones
Las concentraciones de protenas del LCR y la
fraccin gama, fueron significativamente ms
bajas y la fraccin prealbmina ms elevada en
los nios en comparacin con la de los
adultos. La presencia de bandas de
haptoglobinas en el LCR no fue indicativa de
alteracin de la permeabilidad de la barrera
sangre-LCR, ya que se encontraron en 65.7%
de los nios y en 79.6% de los adultos.