ENZIMAS

ENZIMAS

Las enzimas catalizadores de las reacciones
qumicas en los seres vivos. Sustancias que, sin
consumirse en una reaccin, aumentan notablemente
su velocidad.

Ello hace posible que en condiciones fisiolgicas
tengan lugar reacciones que sin catalizador
requeriran condiciones extremas de presin,
temperatura o pH.


Sin las enzimas los procesos biolgicos seran tan
lentos que la vida no podra existir

ENZIMAS
La enzima disminuye la energa de
activacin
Tiempo de la reaccin
E + S
E + P
Sin enzima
Con enzima
La Ea de la hidrlisis de la
urea baja de 30 a 11 kcal/mol
con la accin de las enzimas,
acelerando la reaccin 10
14

El aumento de temperatura
necesario para producir la
reaccin no catalizada seria
de 529C
Las enzimas se unen a los reactivos
(sustratos) reduciendo la energa de
activacin

Cada enzima tiene una forma nica
con un sitio o centro activo en el que
se une al sustrato

Despus de la reaccin, enzimas y
productos se separan.

Las molculas enzimticas no han
cambiado despus de participar en la
reaccin

ENZIMAS
Enzima
Sitio activo
Sustrato
Enzima - Catalizador
Tanto la enzima como el catalizador aceleran la
velocidad de una reaccin qumica.
Una enzima puede transformar 1000 molculas
de sustrato/ segundo
Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
Especificidad por el sustrato
Se inactivan por desnaturalizacin
Pueden ser reguladas

Las enzimas cumplen su papel cataltico gracias
a:
Fijacin estereoqumicamente complementaria
del substrato
Transformacin cataltica del mismo

En ambas funciones participan:

Cadenas laterales de los aminocidos
Grupos o molculas no proteicas:
Grupos prostticos
Iones metlicos
Cofactores
Los siguientes hechos:
Especificidad de la reaccin enzimtica
Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica


Nos llevan a postular la existencia de un Centro Activo
en la molcula de enzima, capaz de:

Fijar especficamente al substrato
Transformarlo catalticamente.

La unin del sustrato es muy
especfica
Complementariedad
geomtrica
Complementariedad de
cargas, uniones inicas
Modelos:
Llave cerradura.
Encaje inducido
Teoras de la accin enzimtica
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)
Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica, de la
misma manera que una llave se ajusta a su cerradura.
Hoy se considera insuficiente al no explicar algunos fenmenos
de la inhibicin enzimtica
Teoras de la accin enzimtica
Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)
Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin
en su estructura por el hecho fsico de la unin.

Est mucho ms de acuerdo con todos los datos
experimentales conocidos hasta el momento.
Teoras de la accin enzimtica, 3
La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad
definiendo la accin enzimtica como:
Estabilizacin del Estado de Transicin
El Centro Activo enzimtico es en realidad
complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transicin entre ambos.
Una enzima puede unir dos sustratos en su sitio activo
Clasificacin de las enzimas
Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxido-
reduccin.
Transferasas: Catalizan reacciones de transferencia
de grupos.
Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrlisis.
Liasas: catalizan la ruptura simple de una molcula
en dos o la reaccin inversa.
Isomerasas: catalizan reacciones de isomerizacin por
reacciones intramoleculares.
Ligasas: catalizan la unin de dos o molculas,
acoplada a la ruptura del ATP.
EC 2.7.1.1
Nmero Enzyme Commission:
Enzyme
Comission
Grupo
Subgrupo
Nombre comn (sustrato+asa): Hexokinasa
Clasificacin y nomenclatura
ATP: hexosa fosfotransferasa
Nombre sistemtico:
Donador Aceptor
Grupo transferido
Tipo de reaccin catalizada
Grupos
qumicos
Enzimas
EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas
Clasificacin de enzimas por Grupos
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, en que tomos de
oxigeno hidrogeno son trasladados entre molculas:
En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a
la vez el aceptor y el dador electrnico.
AH
2
+ B A + BH
2

Clasificacin y nomenclatura
A
red
+ B
ox
A
ox
+ B
red

Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa
Nombre comn:
Glucosa oxidasa
b-D-Glucosa : O
2
1-oxidorreductasa
Dador Aceptor
EC 1.1.3.4
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Aplicaciones: Ensayos de diagnostico clnico (glucosa oxidasa y colesterol
oxidasa

A-X + B
A + B-X
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de tomos
grupo de tomos entre molculas:
Dador: Aceptor Grupo transferido - transferasa
ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa
EC 2.7.1.1
Nombre comn: hexokinasa
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis y tambin su reverso.
Son las ms comunes en el dominio de la tecnologa
enzimtica:
A-B + H
2
O A-OH + H-B
No se suelen utilizar nombres sistemticos en las
hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre
Primitivo. Ejemplo: Quimosina EC 3.4.23.4.
Clasificacin y nomenclatura
Caso particular Pptido hidrolasas: clasificacin comn
(no sistemtica)
I. Segn la situacin del enlace atacado:
- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)
II. Segn el mecanismo cataltico:
- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remocin de grupo de
tomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):

A-B A + B
Clasificacin y nomenclatura
Ejemplo
Nombre sistemtico:
Histidina amonio-liasa (EC
4.3.1.3)

Nombre comn:
Histidasa
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin moleculares
Clasificacin y nomenclatura
A
B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC
5.3.1.5)
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
A + B + ATP A-B + ADP + P
i

Clasificacin y nomenclatura
Ejemplo: Glutationa sintasa (EC
6.2.2.3)


Nombre sistmico:
G-L-glutamilo-L-
cisteina:glicina ligase


PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS
Los cambios en la conformacin de las enzimas producen
modificaciones en la actividad cataltica. Los factores
que influyen de manera ms directa sobre la actividad de
un enzima son:

pH
Temperatura
Cofactores
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

Las enzimas poseen
grupos qumicos
ionizables (carboxilos -
COOH; amino -NH
2
; tiol -
SH; imidazol, )

Como la conformacin de
las protenas depende, de
sus cargas elctricas,
habr un pH en el cual la
conformacin ser la ms
adecuada para la actividad
cataltica

Efecto del pH en la ENZIMA
Cada enzima tiene un pH ptimo para su actividad
El pH afecta las interacciones inicas
Efecto de la temperatura sobre
actividad enzimtica

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA



Los aumentos de temperatura aceleran las reacciones
qumicas, sin embargo, las enzimas temperaturas altas se
desnaturalizan por el calor. La temperatura a la cual la
actividad cataltica es mxima se llama temperatura
ptima.
ORGANISMOS TERMFILOS
Son organismos que viven a altas t y realizan sus
reacciones enzimticas a estas altas t
Ejemplos son los que viven en las aguas termales
Es tema de investigacin el aislamiento de las
enzimas de estos organismos para desarrollar
procesos industriales en condiciones ms extremas
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

A veces, un enzima requiere para su funcin la
presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la
catlisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser
iones inorgnicos como el Fe
++
, Mg
++
, Mn
++
, Zn
++,
Casi
un tercio de las enzimas conocidos requieren
cofactores. Cuando el cofactor es una molcula
orgnica se llama coenzima. Muchos de estos
coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas.
Coenzimas
Las coenzimas son pequeas molculas
orgnicas, que se unen a la enzima.
Las coenzimas colaboran en la reaccin
enzimtica recibiendo transitoriamente algn
grupo qumico: H
+
, OH, CH
3
.
La enzima sin la coenzima recibe el nombre de
APOENZIMA
El NAD es una coenzima aceptora de H
Sustrato
oxidado
Algunas enzimas requieren metales para mejorar su
actividad
CINTICA ENZIMTICA

1. La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan informacin
directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la
especifidad del enzima. No es necesario purificar o aislar la
enzima.
2. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato.
3. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la
velocidad mxima (V
max
). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
Complejo enzima-sustrato
La cintica es el estudio de las velocidades de reaccin y los
principios que permiten comprender como suceden las
reacciones.
Michaelis y Menten (1913) realizaron estudios de
comportamiento enzimtico, con un extracto de levaduras ricas
en invertasa, enzima que cataliza la hidrlisis de la sacarosa.



Concentracin de la enzima (E)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

i
n
i
c
i
a
l

(
V
o
)
Concentracin del sustrato (S)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

i
n
i
c
i
a
l

(
V
o
)
Cuando la concentracin de la enzima se mantuvo constante y
se hizo variar la cantidad de sustrato, lo que se observ fue una
relacin hiperblica entre la velocidad y la concentracin del
sustrato:



E + S ES P + E
k1
k3
k2
Baja
concentracin
de sustrato
ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION
E + S
ES E + P
k
+1

k
-1

k
+2

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:
Hay un nmero limitado de sitios en la enzima
para fijar substrato; una vez que estn ocupados
todos, por mucho que aumente la concentracin
de substrato, la velocidad permanecer constante
tendiendo a un valor asinttico
0
0 . 0 4
0 . 0 8
0 . 1 2
0 . 1 6
0 . 2
0 . 2 4
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0
Co n ce n t r a ci n d e l su st r a t o ( S)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

i
n
i
c
i
a
l

(
V
o
)
c l c ul o del val or as i nt t i c o
V ma x
V ma x / 2
K m
Vo= Vmax[S]
Km + [S]
Ecuacin cintica de Michaelis-Menten
Relacin entre Km y Vmax
Michaelis y Menten
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i

n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2
La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
Concentracin de Sustrato [S]
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

l
a

r
e
a
c
c
i

n

(
v
)

Km
Vmax
Vmax/2

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el
sustrato
A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el
sustrato
Significado de la constante K
m

1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rpido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rpido)

3. Mide la funcin de fijacin (en cond.de equilibrio rpido)

4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s
0.5
)

5. Se define para una pareja enzima-substrato

6. Se mide en unidades de concentracin
Significado de la constante V
max

1. Velocidad asinttica para s

2. Directamente proporcional a la concentracin de
enzima


3. Mide funcin de transformacin cataltica

4. Se expresa en unidades de velocidad
Representacin recproca doble
(Lineweaver - Burk)
1/s
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
1 1 1
v
K
V s V
m
mx mx

-1/K
m

1/V
max

Representacin Lineweaver-Burke
Nmero o ndice de Recambio
Es til definir una constante de velocidad
ms general, k
cat
, para describir la
velocidad limitante de cualquier reaccin
enzimtica a saturacin
k
cat
x [E] = V
mx

K
cat
es una constante de velocidad de 1
er

orden con unidades de tiempo
-1
, tambin
llamada Nmero de Recambio
INHIBICION ENZIMATICA
Antibiticos, insecticidas, herbicidas, venenos y
diversos medicamentos, que combaten el dolor, la
inflamacin, las infecciones virales y el cncer, son
sustancias capaces de inhibir el funcionamiento de
las protenas celulares, usualmente de una enzima
especfica
La accin de un inhibidor implica la fijacin de ste a
alguna forma de la enzima, lo que da por resultado
una prdida total o parcial de la actividad enzimtica
para transforma sustratos en productos.
Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).



I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.
Los inhibidores pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima
libre, con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la
enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Acompetitiva
Inhibicin Competitiva
Inhibidores Competitivos
Compiten con el sustrato por el sitio activo
de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V
mx
no se altera y K
M
cambia
Inhibicin competitiva
Al aumentar la cantidad
de SUSTRATO el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto
E
ES
EI
I
S
E + P
Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente
exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la
inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico
del substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato
Se define una constante de
equilibrio de disociacin del
inhibidor:
K
i
=
[E] [I]
[EI]
Por tanto, en la inhibicin competitiva,
1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la
K
m.

2. La V
max
no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = V
max
, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto ms pequeo sea el valor de K
i
mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.
Km
Sin
inhibidor
Km
con
inhibidor
Sin inhibidor
Con inhibidor
El inhibidor competitivo
aumenta la Km
1/s
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
1/v
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
-1/K
m

-1/(K
m

1/V
max

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble
cido Flico y Sulfanilamida
La sulfanilamida es un anlogo estructural del
cido p - aminobenzoico (PABA)
PABA es el punto de partida para la sntesis de
cido flico en las bacterias
El cido flico es una vitamina esencial para la
proliferacin (divisin) bacteriana
Sulfanilamida se usa en el tratamiento algunas
infecciones
Inhibidor No Competitivo
Se une a un lugar diferente del sitio activo
la enzima
Se une a la enzima libre y tambin al
complejo enzima-sustrato
Por accin del inhibidor disminuye la V
mx

pero el valor de K
m
no se altera
Inhibicin NO competitiva
Inhibidor Acompetitivo
Se une a un lugar diferente del sitio activo
de la enzima
Se une slo al complejo enzima-sustrato
Los efectos que tiene: disminuye el valor
de K
m
y tambin el de V
mx

Inhibidor Acompetitivo
El inhibidor Acompetitivo se une a la enzima en un sitio
diferente del sitio activo
Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente

- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K
i
,
sino por una constante de velocidad k
i
:
E + I E
- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
Inhibidores Irreversibles
Producen inactivacin permanente de la
actividad enzimtica
Se interfiere con el normal desarrollo de
una reaccin o va metablica
Algunos tipos de inhibidores irreversibles
1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Efectos de los inhibidores sobre
constantes cinticas
Tipo de inhibidor Efecto
Competitivo (I slo se une a E) Aumenta Km, V mx sin cambio
Acompetitivo (I slo se une a ES) Km, V mx descienden
No competitivo (I slo se une E ES)

Sin cambio Km, V mx desciende.
Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molcula de sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad presenta
una forma sigmoidal
RESUMEN
Las enzimas son protenas que catalizan las
reacciones biolgicas
Presentan especificidad por su sustrato
Cada enzima presenta dos parmetros
importantes Vmax (saturacin de la enzima)
y la Km (medida de la afinidad por el
sustrato)

RESUMEN
La actividad enzimtica puede ser inhibida,
por inhibidores competitivos (similares al
sustrato) o por inhibidores no competitivos.
La temperatura y el pH afectan a la enzima
en su actividad cataltica.
Algunas enzimas requieren de coenzimas
y/o cofactores para su actividad.
Regulacin enzimtica
Control gentico: Sntesis de enzimas como
respuesta a las variaciones de las
necesidades metablicas, permite a las
clulas responder de forma eficaz a las
variaciones del ambiente.
Ejemplo E. coli puede metabolizar lactosa
en ausencia de glucosa en el medio.

Transformacin
de Alimentos
Fermentaciones
Quesos
Vinos
Agricultura
Rhyzobium

Medicina
Transaminasas
Industria
Farmacutica
Penicilina