En 1953, James Watson y Francis Crick publicaron

el primer modelo estructural de la molcula de ADN,

(Premio Nobel de Medicina en 1962)
Unidad bsica: nucletido
Los peldaos formados por los nucletidos son complementarios.
La posicin de una A en una de las cadenas se corresponde con
una T en la otra cadena...
De igual forma, la posicin de una G en una de las cadenas se
corresponde con una C en la misma posicin de la otra cadena.
El esquema de este dogma ha sido encontrado repetidamente
y se considera una regla general (salvo en los retrovirus)
Protena
Severo Ochoa descubre la ARN polimerasa y sintetiza por primera vez
in vitro una molcula de ARN
(Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1959)


Nirenberg y Khorana descifran el cdigo gentico
(Premio Nobel de Medicina en 1968)
El cdigo gentico est compuesto por codones
(codon= 3 bases nitrogenadas) que definen el
proceso de traduccin
61 codones para aminocidos
(existen 20 aminocidos diferentes)
3 codones de terminacin
El cdigo gentico es
universal

El cdigo gentico es
redundante (varios
codones para un mismo
aminocido)

Ejemplo: El aminocido
glicina est codificado
por GGU, GGC, GGA y
GGG
En el campo de la Ingeniera gentica consiste
en aislar y multiplicar un gen, o en general,
un trozo de ADN


En Animales superiores consiste en obtener un
individuo a partir de una clula o de un nucleo
de otro individuo
Obtencin de organismos genticamente idnticos
Conjunto de tcnicas nacidas de la Biologa molecular
que permiten manipular el genoma de un ser vivo
Homo sapiens
Escherichia coli Mediante la ingeniera gentica se pueden introducir genes
en el genoma de un individuo que carece de ellos



cromosoma
gen

Aislamiento y manipulacin de fragmentos
de ADN de un organismo para introducirlo
en otro (ADN recombinante)

Nathans D., Arber W., y Smith H. (premio Nobel de Fisiologa
y Medicina en 1978 por el descubrimiento de las enzimas de
restriccin y su aplicacin en Gentica Molecular)
Molcula A Molcula B
Digestin de ambas molculas con la
misma enzima de restriccin, BamHI
Mezclar
Tratar con ADN-ligasa
ADN recombinante
Extremos
cohesivos
Es un proceso cclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)

94C desnaturalizacin (separacin
de las dos hebras de ADN)

50C Anillamiento de "cebadores"

72C copia de cada una de las
hebras de ADN por la ADN
polimerasa

En 1983 Kary Mullis da a conocer esta tcnica y en 1993 recibi el Premio Nobel de Qumica por este descubrimiento

35 ciclos 2
36
= 68 billones de copias

Plsmidos
1

Plsmidos
2
Extremos cohesivos
Plsmido
3
Molcula de ADN recombinante
gen de resistencia
a la ampicilina
Plsmido

Virus
2
1
3
(f) (h)
(g)
Ciclo ltico
Ciclo lisognico
Genoma de hongos: 44 millones de pares de bases
Huesped: Escherichia coli
Vector: Bacterifagos
capacidad: 20 mil pares de bases




Genoma humano: 3000 millones de pares de bases
Huesped: Saccharomyces cerevisiae
Vector: YAC (cromosoma artificial de levadura)
MegaYAC (capacidad: 1 milln de pares de bases)
ACTTTGTCCACGGCCTAAGCGTTTTTTGCCC
AGTGACTTTGTCCAAC
GTCCAACAGTTACCAAGTGACTTTGTCCAC TTTTGCCC
AGTGACTTTGTCCA ACGGCCTAAGCGTTTTTTTT

ALINEAMIENTO DE TODAS LAS SECUENCIAS Y RECONSTRUCCIN DEL CROMOSOMA
Secuenciacin
de genomas

Deteccin de mutaciones
Mtodo de diagnstico rutinario (relacin entre enfermedad y mutacin puntual)


Secuenciacin de ADNs fsiles
Posibilidad de aislar secuencias de ADN a partir de unas pocas copias (la mayora
estn daadas o degradadas)


Diagnstico de enfermedades genticas
Diagnstico prenatal / Diagnstico preimplantacin de enfermedades hereditarias o
determinacin del sexo del feto previamente a su implantacin en procesos de
fecundacin in vitro


Identificacin de especies y control de cruces entre animales
Para descubrir fraudes comerciales, tales como vender carne de una especie ms
barata a los precios de otra ms cara, o el comercio ilegal de especies en peligro


Secuenciacin de genomas
Conocimiento bsico y aplicado de diferentes organismos (incluido el genoma humano)


Beneficios mdicos tras el conocimiento de la
estructura de cada gen humano

1. Diagnstico en individuos con riesgo de ser
portadores del gen de alguna enfermedad

2. Marco de trabajo para el desarrollo de
nuevas terapias, adems de nuevas
estrategias para la terapia gnica

16 de Febrero de 2001
Celera Genomics
15 de Febrero de 2001
Consorcio pblico internacional
Proyecto genoma humano
La secuencia del genoma es un atajo valioso: ayuda a los
cientficos a encontrar los genes ms fcil y rpidamente
y sienta las bases para averiguar la funcin de los genes
identificados
Obtencin de protenas de inters mdico, comercial, etc...
(insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulacin antes se obtenan
a partir de los tejidos que las producen o fluidos corporales)
Obtencin de vacunas recombinantes
(aternativa al uso de organismos patgenos inactivos)
La levadura fabrica las
protenas vricas
con poder inmunolgico
Inyeccin de protenas
vricas en un chimpanc
plsmido
bacteriano
Integracin del
plsmido hbrido
en el ncleo de una
clula de levadura
ADN
Extraccin del ADN
del virus
Conocimiento previo de
la secuencia de ADN
enfermo
Mediante ingeniera gentica
se construye una sonda de
ADN, marcada (marcaje
fluorescente), con la
secuencia complementaria del
ADN enfermo
ADN enfermo
ADN sano
ADN complementario
del ADN enfermo
Diagnstico de enfermedades de origen gentico
ADN de la
persona que se
quiere
diagnosticar
Hibridacin?
No hibridacin?
Renaturalizacin
del ADN con la
sonda
fluorescente
Desnatura
lizacin
del ADN
Si aparecen bandas
fluorescentes
demuestra que la
persona presenta la
anomala
Biochip
Microarray
DNAchip
DIAGNSTICO
Plantas transgnicas
tumores
clula
vegetal
Proliferacin de
hormonas
crecimiento. Se
forman tumores en
las zonas de la
lesin
Plsmido Ti
ncleo
cromosoma
cromosoma
Agrobacterium
inductor de tumores
contiene oncogenes
(genes onc)
Ingeniero
gentico
natural tras
sutitucin de
genes onc por
genes de
inters
Transgnesis= introduccin de
ADN extrao en un genoma, de
modo que se mantenga estable de
forma hereditaria y afecte a
todas las clulas en los organismos
multicelulares.
Agrobacterium tumefaciens es patgena de plantas.Produce tumores

Resistencia a herbicidas, insectos y enfermedades microbianas
El maz transgnico de Novartis es resistente al herbicida Basta y tambin es
resistente al gusano barrenador europeo (contiene el Gen de resistencia a la
toxina Bt de Bacillus thuringiensis) produce su propio insecticida

Problemas:La toxina Bt en las plantas transgnicas tiene propiedades
sustancialmente diferentes a la toxina Bt en su forma natural.
La toxina puede ser transmitida a travs de la cadena alimenticia, un
efecto que nunca ha sido observado en la toxina Bt en su forma natural.
Larvas de especies de insectos predadores benficos (larvas verdes de
crisopa) murieron cuando fueron alimentadas con el gusano barrenador
europeo

Gold rice de Monsanto con color amarillo por los altos niveles de vitamina A

Mejora de la calidad de los productos agrcolas
Produccin de aceites modificados


Sntesis de productos de inters comercial
Anticuerpos animales, interfern, e incluso elementos de un polister destinado a la
fabricacin de plsticos biodegradables

Transgnesis en animales (por microinyeccin de zigotos)



Gen humano
Secuencia promotora para
la sntesis de una protena
de la leche
Gen hbrido
rata humano
Desarrollo de una cerda transgnica
Ovulos de cerda
fecundados
Clonacin de animales
(TRANSFERENCIA NUCLEAR DE CLULAS EMBRIONARIAS)
Clonacin de animales
(TRANSFERENCIA DEL NCLEO DE UNA CELULA SOMATICA: CLULA DIFERENCIADA)

Terneros clonados y manipulados genticamente (fbrica de anticuerpos humanos)

genes para anticuerpos clulas drmicas clonacin
humanos recombinantes

Objetivo: Tratamiento de enfermedades inmunolgicas

Futuro: Tratamiento de una amplia gama de enfermedades ocasionadas por
bacterias y virus, como hepatitis, ntrax (utilizada como arma biolgica)


Clonan terneros en EE UU para producir anticuerpos
humanos





efe- Washington - agosto 2002







Clonan cerdos destinados a trasplantar sus rganos a
humanos


La empresa escocesa PPL Therapeutics logra
retirar de los cerditos el gen que provoca el
rechazo en transplantes a humanos "alfa 1,3
galactosil transferasa"




Enero 2002. AP Photo/Roanoke Times, Gene Dalton (IDEAL-EFE)


Paso importante en favor del xenotrasplante (transferencia de clulas u
rganos de una especie a otra)


Ayudar a superar la escasez de rganos humanos para hacer trasplantes de
todo tipo





Un laboratorio de Texas clona al primer animal
domstico

"Copycat" es el primer gatito nacido mediante clonacin"




febrero 2002 Universidad College Station (Texas)





El experimento abre las puertas de la clonacin masiva de
animales domsticos, un fin sin explorar cuya sola
posibilidad haba desencadenado ya el almacenamiento
de clulas de mascotas por parte de sus ricos propietarios



El sexto da
El ataque de los clones
Para obtener a Dolly: 277 fusiones de
ovocitos con clulas mamarias, solo
29 embriones fueron aptos. De estos
solo uno result un xito
La clonacin humana ya se
est intentando de forma
clandestina por varios
laboratorios en el mundo
La clonacin reproductiva no arroja
los resultados suficientes, no existen
garantas como para decir 'Vamos a
clonar un ser humano'
Por cada intento de clonacin
hay detrs miles de fallos,
abortos y malformaciones
genticas
En caso de existir deficiencias a nivel
gentico se puede hacer terpia gnica
a nivel de clulas madre
1 Cultivo de blastocisto
Fecundacin
Embrin temprano
4 Transferencia de los agregados
celulares a un nuevo pozo
5 Formacin de clulas
diferenciadas a tejidos
daados
3 Adicin de sustancias
que disgregan la masa
celular interna
2 Eliminacin de la capa externa
6 Adicin de factores de
diferenciacin
seleccionados
7 Administracin de
clulas diferenciadas a
tejidos daados
CREACIN DE UN EMBRIN ARTIFICIAL
(con clulas adultas)

-embrin somtico-

OBJETIVO LTIMO: AUTOTRASPLANTES
(no hay rechazo)
Fusin de clula somtica
y ovulo enucleado
OBJETIVO LTIMO: TRATAMIENTO de ENFERMEDADES
Las clulas madre abren la posibilidad a un nuevo mundo en
las terapias de los trasplantes

Calificada como una tcnica "ineficaz e imperfecta" por cientficos
como Iam Wilmut, "padre" de la oveja Dolly, la clonacin ha encontrado
en las clulas "madre" su primera razn de ser.


Retos tcnicos
1. Las clulas embrionarias de ratn originan teratomas y
teratocarcinomas en animales adultos

2. Conocimiento de las seales implicadas en el desarrollo y
diferenciacin

3. Asegurar la salud a largo plazo de las clulas a transplantar
(edad biolgica de las clulas)
Declaracin Universal de Derecho Humanos y Genoma Humano de la UNESCO (1997),
adoptada en 1998 por la Asamblea General de ONU (busca un balance entre una
continuacin en las investigaciones y la salvaguarda de los derechos humanos)

Frente a los mltiples beneficios de la ingeniera gentica
pueden surgir algunos problemas

Problemas sanitarios nuevos microorganismos patgenos,
efectos secundarios de nuevos frmacos de diseo, etc...

Problemas ecolgicos desaparicin de especies con consecuencias
desconocidas, nuevas contaminaciones debidas a un metabolismo incontrolado, etc...

Problemas sociales y polticos en el campo de la produccin industrial, agrcola y ganadera,
pueden crear diferencias an ms grandes entre pases ricos y pobres. El sondeo gnico en
personas puede llevar a consecuencias nefastas en la contratacin laboral, por ejemplo, y atenta contra
la intimidad a que tiene derecho toda persona (empleo, agencias de seguros, discriminacin..).

Problemas ticos y morales Poder conocer y modificar el patrimonio gentico humano
puede ser una puerta abierta al eugenismo "Eugenesia: la ciencia del incremento de la felicidad humana a
travs del perfeccionamiento de las caractersticas hereditarias".