PRACTICA N 7

ACTIVIDAD ENZIMTICA
OBJETIVOS:
Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido
animal.
Comprobar que slo bajo ciertas condiciones las enzimas
funcionan ptimamente catalizando una reaccin enzimtica
con su sustrato.
Actividad enzimtica
Las enzimas son protenas
(excepto las ribozimas), que
catalizan las reacciones qumicas
que ocurren en las clulas
La catalisis la realizan
disminuyendo la energa de
activacin.
Factores que influyen en la
actividad enzimtica:
Temperatura
pH
Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato
Inhibidores
Alguna enzimas se encuentran inactivadas y reciben el nombre de Apoenzimas, para su
activacin estas enzimas requieren de un cofactor o de una coenzima.
La enzima activa unida a los cofactores o a las coenzimas se denomina Holoenzimas.
Apoenzimas + Coenzima/Cofactor Holoenzima
(Inactiva) (Activa)
Coenzimas (molculas orgnicas, como vitaminas)
Cofactores (molculas inorgnicas, iones metlicos)
Se unen por interaccin electrosttica, puentes hidrgeno o fuerzas de
Vander Waals.
La actividad cataltica de una enzima sobre un sustrato puede ser
descrita en dos parmetros:
Vmax velocidad mxima de la reaccin en concentraciones
saturantes del sustrato
Km La constante de Michaelis que es una medida de la afinidad
de la enzima para el sustrato. Esta esta definida como la
concentracin de sustrato en la cual se obtiene la mitad de la
velocidad mxima.
Las concentraciones de las moleculas en la celula varian, asi como
el valor del Km de las enzimas que actuan sobre ellas.
Generalmente la concentracion intracelular del sustrato es
aproximadamente la misma o mayor al valor del Km de la enzima a
la que se une.
PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA
OBJETIVO.
Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal
La catalasa es una enzima oxidoreductasa que se encuentra en altas concentraciones en los
compartimientos intracelulares llamados peroxisomas
Las clulas contienen catalasa para eliminar el exceso de H2O2 que es un agente oxidante y
es daino para las clulas
PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA EC
1.11.1.6
La reaccin enzimtica se evaluara por el desprendimiento
de O2 determinada por la formacin de burbujas en el tubo
de reaccin
SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA
La amilasa es una hidrolasa que digiere el glucgeno y el almidn para formar azcares simples.
Clasificacin :

-Amilasa (1,4--D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa)
Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro. Actan a lo largo de cualquier punto de la cadena
de los carbohidratos, descomponindolos en dextrina desde la amilopectina.
En fisiologa humana tanto la procedente de la saliva como la pancretica son -Amylasas. Puede
encontrarse en algunas plantas, hongos y bacterias.


-Amilasa (1,4--D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarognica)
La -amilasa es tambin sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Acta desde el extremo no
reductor de la cadena, catalizando la hidrlisis del segundo enlace -1,4, rompiendo dos unidades de
glucosa (maltosa) a la vez. Muchos microorganismos tambin producen amilasa para degradar el
almidn extracelular. Los tejidos animales no contienen -amilasa, aunque puede estar presente en
microorganismos saprfitos del tracto gastrointestinal.


-Amilasa (Glucano 1,4--glucosidasa; aminoglucosidasa; Exo-1,4--glucosidasa; glucoamilasa; -
glucosidasa lisosmica; 1,4--D-glucano glucohidrolasa)
Adems de romper el ltimo enlace (1-4)glicosdico en el extremo no reductor de la cadena de
amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la -amilasa puede romper los enlaces glicosdicos (1-6).
AMILASA SALIVAL (PTIALINA):
Reduce el almidn a maltosa y
dextrina. Se inactiva con los jugos
gstricos del estmago.
Condiciones ptimas de la Ptialina:
pH 5.6 - 6.9
Temperatura corporal 37C


AMILASA PANCRETICA:
Reduce el almidn a dextrina,
maltosa o glucosa. No se inactiva
con el jugo gstrico.
SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA
OBJETIVOS. Comprobar que slo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
ptimamente catalizando una reaccin enzimtica con su sustrato
ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA
1 2 3 4
Almidn Almidn Almidn Sacarosa
+ + +
Saliva Saliva Saliva
T Amb T Amb 37 C T Amb
Actividad de la enzima amilasa
ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA
La reaccin enzimtica se evaluar por la observacin del cambio de coloracin
de intensidad del reconocimiento del almidn por el lugol
1 2 3 4
Almidn Almidn Almidn Sacarosa
+ + +
Saliva Saliva Saliva
T Amb T Amb 37 C T Amb