MAGISTER EN BIOQUIMICA PROFESOR AUXILIAR - UPAO Las enzimas son biocatalizadores excelentes, mas eficaces y especficos que dirigen y regulan reacciones de los sistemas biolgicos. Todas las enzimas tienen las siguientes propiedades qumicas: * Aumentan la velocidad de una reaccin al disminuir la energa de activacin. * No se consume ni sufre cambios en sus estructura durante el proceso cataltico. * Acta sobre una molcula orgnica denominada sustrato, transformndola en un producto o productos. * Son reguladas por una gran variedad de controles celulares, genticos y alostricos. ENZIMAS Catalizan reacciones de transferencia de electrones y/o protones de un sustrato a otro; es decir reacciones de oxido-reduccin. - * Deshidrogenasas * Oxidasas * Oxigenasas - * Reductasas * Peroxidasas * Hidroxilasas CLASIFICACION ENZIMATICA LACTATO DESHIDROGENASA CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS
LACTATO PIRUVATO Catalizan la transferencia de un grupos funcionales entre donadores y aceptores. Los grupos que son transferidos frecuentemente son: fosfato, amino, glucosilo. * Quinasas * Transaminasas * Transmetilasas CLASE 2: TRANSFERASAS GLUCOCINASA GLUCOSA ADENOSIN TRIFOSFATO GLUCOSA-6-FOSFATO ADENOSIN DIFOSFATO CLASE 3: HIDROLASAS Estas reacciones implican la ruptura hidroltica de enlaces C-O, C-N, O-P y C-S. Se les puede considerar como como una clase especial de transferasas en las que el sustrato es escindido siendo sus fragmentos transferidos a los componentes del agua (OH y H). * Lipasas * Esterasas * Glucosidasas * Peptidasas LACTASA LIPASA TRIGLICERIDO CIDOS GRASOS LIBRES GLICEROL LACTOSA GLUCOSA GALACTOSA CLASE 4: LIASAS Catalizan reacciones en la que se rompen enlaces C-C, C-N y C-O, sin intervencin de agua y con prdida de grupos funcionales simultnea a la aparicin de dobles enlaces. * Descarboxilasas * Desaminasas Catalizan reacciones de isomerizacion de cualquier tipo, pticos, geomtricos o de posicin. * Epimerasa * Racemasa * Mutasa CLASE 5: ISOMERASAS PIRUVATO DESCARBOXILASA ALANINA RACEMASA PIRUVATO ACETALDEHIDO DIOXIDO DE CARBONO
L-ALANINA D-ALANINA CLASE 6: LIGASAS Participan en reacciones en las que se unen dos molculas a expensas de un enlace fosfato de alta energa procedente del ATP. El termino sintetasa se reserva para este grupo de enzimas. * Tiocinasa * Sintetasa CITRATO SINTASA Oxalacetato Citrato GLUTAMINA SINTETASA GLUTAMATO GLUTAMINA NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS La mayora de las enzimas (Apoenzimas) son de naturaleza proteica (90%). Algunas enzimas requieren de un componente adicional (cofactor o coenzima) para su funcionamiento. Estos se unen por medio de enlaces dbiles no covalentes. Las Coenzimas son molculas orgnicas, generalmente derivan de las vitaminas (NAD, FAD, Biotina, Tiamina). Los Cofactores son iones inorgnicos (Mg +2 , Cu +2 , Fe +2 , Zn +2 ). Cofactor Apoenzima HOLOENZIMA ENZIMA SUSTRATO OXIDADO NADH SUSTRATO REDUCIDO NAD ENZIMA COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO + + + Coenzima
Enzima (sacarasa) Sitio cataltico 1 2 3 Sustrato (sacarosa) Enzima disponible con sitio ctaltico vaco Sustrato se une a la enzima por encaje inducido Sustrato es convertido a productos 4 Productos son liberados Glucosa Fructosa SITIO CATALITICO El sitio cataltico o centro de fijacin del sustrato, es una pequea grieta o hendidura en una molcula proteica grande, donde se fija el sustrato. La estructura terciaria de la enzima est plegada de tal manera que se origina una regin con las dimensiones moleculares idneas para acomodar un sustrato especfico. sitio cataltico de carboxipeptidasa La especificidad reside en una regin determinada de la superficie enzimtica, el centro de fijacin del sustrato. Pueden presentar especificidad ptica absoluta para al menos, una porcin de la molcula del sustrato o a la totalidad de dicha molcula. ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS ISOENZIMAS Son enzimas que tienen diferente secuencia de aminocidos, es decir, son formas moleculares diferentes. pero catalizan la misma reaccin qumica.
Estas isoformas son codificadas por genes diferentes y sintetizados en tejidos diferentes.
Su accin la realizan de forma intracelular, es decir a nivel del citoplasma de las clulas. ISOENZIMAS DE CREATINA FOSFOQUINASA ISOENZIMAS DE LACTATO DESHIDROGENASA ELECTROFORESIS DENSITOGRAMA Ribozimas.- son RNAs catalticos, estn constituidos por nucletidos, son importantes en la eliminacin de intrones y ensamblaje de exones, es decir en el mecanismo de maduracin del RNA
Abzimas.- son anticuerpos catalticos de naturaleza proteica del tipo de las inmunoglobulinas (Ig), sirven como molculas de proteccin neutralizando sustancias extraas de daan las clulas.
Sinsimas.- son enzimas de origen sinttico, se utilizan para el tratamiento de enfermedades, como las adicciones a drogas.
Granzimas.- son proteasas que inducen o activan procesos de apoptosis, se sintetizan como zimgenos y se activan en lugares especficos de la clula. Apoptosis Clula normal Clula modificada Gen pre RNAm RNA maduro Transcripcin Maduracin MODELOS ENZIMTICOS MODELO DE LLAVE Y CERRADURA (E. Fischer).
El sitio cataltico es una estructura rgida, por lo tanto el sustrato y la enzima se acoplan de forma estereoespecfica, de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura. MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO (D. Koshland).
El sitio cataltico es una estructura dotada de flexibilidad, cuando el sustrato se une a la enzima, induce cambios conformacionales en esta molcula, para asegurar la ubicacin ms efectiva. FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
CONCENTRACIN DEL SUSTRATO Cuando aumenta la concentracin de sustrato, se produce un aumento en la velocidad de reaccin, al seguir aumentando la concentracin de sustrato la velocidad de reaccin se hace constante. Por lo tanto obtiene una velocidad mxima de reaccin. Esto nos sirve para obtener la velocidad mxima media, y por ende determinar el Km de la reaccin (constante de Michaelis-Menten) L Km = Afinidad EFECTO DE LA TEMPERATURA En organismos vegetales la temperatura optima esta entre 20 a 37C promedio, cuando disminuye o aumenta esta temperatura la actividad enzimatica disminuye, la enzima sufre alteraciones en su estructura. Por debajo de la temperatura promedio la actividad de la enzima disminuye por que esta sufre un proceso de inactivacion (proceso reversible), pero si la temperatura aumenta por encima de la optima la actividad enzimatica tambien disminuye, pero a diferencia de la primera la enzima sufre un proceso de desnaturalizacin (proceso irreversible). Temperatura ptima para enzima de termfila A c t i v i d a d
0 20 40 80 100 Temperatura (C) Temperatura ptima para dos enzimas Temperatura ptima para una tpica enzima humana EFECTO DEL PH La mayoria de las enzimas tiene un pH ptimo que varia entre 6-8. Pero tambien va a depender del tejido o del organo para poder determinar el pH mas optimo para las enzimas. Los cambios de pH en el medio pueden afectar el estado de ionizacin de ciertos grupos funcionales en la enzima y tambin en la del sustrato. Tanto la disminucion, como el aumento del pH, afectan la actividad enzimatica por que producen la desnaturalizacion de la enzima. ENZIMA pH Fosfatasa alcalina 9.5 Lipasa 8.0 Quimotripsina 8.0 Tripsina 7.9 Catalasa 7.6 Carboxipeptidasa 7.5 Amilasa 6.8 Fosfatasa cida 5.0 Pepsina 1.5 A c t i v i d a d
pH ptimo para dos enzimas pH ptimo para pepsina pH ptimo para tripsina 1 0 2 3 4 5 6 7 8 9 INHIBICIN ENZIMTICA Los inhibidores enzimticos son aquellos agentes que interfieren con la catlisis, disminuyendo o deteniendo la reaccin enzimtica. Se dividen en 2 grandes grupos: 1.- INHIBICIONES REVERSIBLES 2.- INHIBICION IREVERSIBLE Inhibicin no competitiva Inhibicin competitiva y Inhibicin acompetitiva
INHIBICIN COMPETITIVA El inhibidor generalmente tiene una estructura quimica semejante al sustrato, por lo tanto puede combinarse con la enzima libre, de tal modo que compite con el sustrato especifico por el sitio cataltico. Una caracterstica de este tipo de inhibicin est dada por el hecho de que puede ser revertida aumentando la concentracin de sustrato. Sustrato Inhibidor Competitivo Inhibidor Competitivo INHIBICIN NO COMPETITIVA
El inhibidor no tiene una estructura semejante a la del sustrato, por lo tanto se une a un sitio activo diferente al sitio catalitico de la enzima, deformndola de tal manera que no puedan formarse el complejo enzima-sustrato (ES). No existe competencia por el sitio catalitico entre el sustrato y el inhibidor. Sustrato Sustrato Inhibidor No Competitivo Inhibidor No competitivo INHIBICIN IRREVERSIBLE:
El inhibidor produce un cambio permanente en la molcula de enzima, que resulta en un deterioro definitivo de su capacidad cataltica. Por lo general estos inhibidores modifican qumicamente residuos de aminocidos en la enzima que tienen funciones fundamentales en la catlisis. INHIBICION ACOMPETITIVA
El inhibidor no tiene ninguna semejanza estructural con el sustrato, se une a un sitio activo de la enzima, pero no se une a la enzima sola, este se une al complejo ES, formando de esta manera un complejo ESI. Sustrato Inhibidor Acompetitivo Inhibidor Acompetitivo REGULACION O MODULACION ENZIMATICA Los reguladores alostricos actan como co-sustratos, se unen a la enzima en un lugar especifico denominado sitio alostricos. Efectores Positivos: se unen a la enzima, modificando el sitio cataltico para que se una el sustrato y asi pueda este transformarse en productos. Efectores Negativos: se unen a la enzima, modificando la estructura del sitio cataltico de tal manera que ya no se pueda unir al sustrato, por lo tanto no se forma los productos. REGULACION ALOSTERICA Sitio Alostrico SUSTRATO ENZIMA Efector Positivo Sitio Cataltico PRODUCTOS Sitio Alostrico ENZIMA SUSTRATO PRODUCTOS Efector Negativo NO FORMACIN DE PRODUCTOS ENZIMA EFECTOR NEGATIVO ENZIMA EFECTOR POSITIVO Sitio Cataltico Se produce cuando la enzima que regula el proceso sufre estados de fosforilacion, este proceso es llevado a cabo por enzimas denominadas quinasas. Estas enzimas modifican su actividad cataltica a travs de su unin a un grupo qumico de pequeo tamao (grupos fosfato). Estos grupos sern eliminados posteriormente de la enzima reguladora por enzimas denominadas fosfatasas. REGULACION COVALENTE La enzima fosforilasa, se encuentra en las celulas en un estado inactivo de baja actividad llamada fosforilasa b, la cual es convertida en fosforilasa a activa, por adicin de restos fosfato que se unen al hidroxilo de residuos serina en la molcula de la enzima. FOSFORILASA b (inactiva) FOSFORILASA a (activa) QUINASA FOSFATASA FOSFORILASA a (activa) CADENA DE ALMIDON (n) MOLECULA DE GLUCOSA GLUCOSA-1-FOSFATO CADENA DE ALMIDON (n-1) REGULACION POR RETROALIMENTACION Este tipo de modulacin se caracteriza por que la enzima clave en la ruta sinttica es inhibida por los productos finales, lo que da como resultado la interrupcin del proceso metablico.
Tambin se denomina regulacin por retroinhibicin (inhibicin feed-back), es decir el producto regula su propia sntesis. VIA DE NOVO VIA DE REUTILIZACION CIDOS NUCLEICOS